A polimeráz láncreakció (PCR) a molekuláris genetikai diagnosztika nagy pontosságú módszere, amely lehetővé teszi az emberben előforduló különféle fertőző és örökletes betegségek azonosítását, mind akut, mind krónikus stádiumban, és jóval azelőtt, hogy a betegség megnyilvánulhatna.

A polimeráz láncreakciót (PCR) Kary Mullis (USA) fejlesztette ki 1983-ban, amiért 1993-ban kémiai Nobel-díjat kapott.

A PCR-elemzés a legtöbb fertőzés egyfajta „arany standardjává” vált. A legtöbb szakember szinte minden nap találkozik vele, és el sem tudja képzelni nélküle a végső diagnózis felállítását. A PCR gyakran az egyetlen reakció a betegség aktív stádiumainak azonosítására olyan esetekben, amikor más bakteriológiai, virológiai és immunológiai diagnosztikai módszerek nem működnek.

A PCR-diagnosztika előnyei a modern orvostudományban:

Egy kórokozó (nevezetesen a kórokozó DNS-ének vagy RNS-ének egy meghatározott régiója) jelenlétének közvetlen kimutatása a vizsgált mintában.
A nagy specifitás lehetővé teszi, hogy meghatározza a DNS vagy RNS egyedi szakaszát, amely egy adott kórokozóra jellemző, ami kiküszöböli a hamis reakciók lehetőségét.
A PCR-módszer nagy érzékenysége lehetővé teszi a kórokozók (vírusok, baktériumok) egyetlen sejtjének kimutatását is. A PCR analízis érzékenysége 10-1000 sejt a vizsgált mintában (például az immunológiai és mikroszkópos tesztek érzékenysége csak 103-105 sejt).
Univerzális PCR technika kidolgozása különféle kórokozók kimutatására. A PCR módszerrel végzett kutatás tárgya a kórokozó genetikai anyaga (DNS, RNS). A technika lehetővé teszi több kórokozó azonosítását egy biológiai mintából.
Meglehetősen gyorsan megkapja az elemzési eredményeket. A teljes vizsgálat 4-4,5 órán belül történik, ritkábban - kicsit tovább.
A kórokozók kimutatásának képessége a betegség tüneteinek megjelenése előtt (preklinikai diagnózis) és a betegség elmúltával (retrospektív diagnózis). A preklinikai diagnosztika példája lehet a lappangási időszak alatti vizsgálat (a fertőzés pillanatától a beteg panaszkodásáig), valamint a látens fertőzés (amikor egyáltalán nincsenek tünetek, csak laboratóriumi adatok – például PCR). A PCR diagnosztika egyik fontos aspektusa az archív anyagokban vagy biológiai maradványokban végzett PCR elvégzése, amely a személyiség vagy az apaság azonosítása szempontjából fontos.

Jelenleg a PCR diagnosztika jelentős fejlődésen megy keresztül. Maga a módszer fejlesztés alatt áll, a PCR új fajtái újra és újra megjelennek, és ennek a reakciónak az új tesztrendszerei kerülnek be az orvosi piacra. Ennek köszönhetően a PCR-vizsgálatok költsége évről évre a betegek széles köre számára megfizethetőbbé válik.

Mire épül a PCR módszer?

A polimeráz láncreakció alapja a DNS vagy RNS egy bizonyos szakaszának ismételt megkettőzése (amplifikációja) enzimek segítségével a laboratóriumban. Ennek eredményeként a vizuális elemzéshez elegendő mennyiségű DNS vagy RNS képződik. A vizsgálat során csak azt a területet másoljuk le, amelyik megfelel a megadott feltételeknek, és csak akkor, ha az jelen van a vizsgálati mintában.

Például egy speciális reaktorba (erősítőbe) helyezik azokat a kutatási anyagokat, amelyekben egy kórokozó DNS- vagy RNS-fragmenseinek (nyál, vér, vizelet, nemi szervekből származó váladék) jelenlétét feltételezik. Ezután specifikus enzimeket adnak hozzá, amelyek a kórokozó DNS-éhez vagy RNS-éhez kötődnek, és ennek másolata szintetizálódik. Ez a másolás több lépcsőben, „láncreakcióként” megy végbe, és végső soron több száz és több ezer másolat képződik a genetikai anyag egy másolatából. Ezután következik az eredmény elemzése és összehasonlítása a meglévő adatbázissal a különböző kórokozók szerkezetéről. A PCR segítségével nemcsak a kórokozó típusát tudja azonosítani, hanem az elemzés kvantitatív eredményét is megadhatja, vagyis azt, hogy hány kórokozó van az emberi szervezetben.

A PCR módszer jelenleg bővíti a kutatási lehetőségek tárházát: mutációkat vezet be, DNS-fragmenseket splicingol, és széles körben elterjedt az orvostudományban például az apaság megállapítására, új gének megjelenésére stb.

Milyen fertőzések mutathatók ki PCR diagnosztikával?

1) HIV fertőzés (a HIV-1 humán immunhiány vírus kimutatható)
2) Vírusos hepatitis A, B, C, G (RNS-HAV, DNS-HBV, RNS-HCV, RNS-HGV)
3) Fertőző mononukleózis (Epstein-Barr vírus DNS - EBV)
4) Citomegalovírus fertőzés (DNS-CMV)
5) Herpesz fertőzés (DNS herpes simplex vírus HSV 1. és 2. típus)
6) STI-k (szexuális úton terjedő fertőzések) – ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis,
7) Tuberkulózis (Mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogén vírusok – papillomavírus fertőzés (humán papillomavírus (beleértve annak onkogén 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 és 59 onkogén típusait)
9) Borreliosis, kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás
10) Listeriosis
11) Candidiasis (a Candida nemzetségbe tartozó gombák)
12) Helicobacter pylori fertőzés
és mások

Figyelembe véve a kórokozók körét, a PCR-diagnosztikát aktívan használják a nőgyógyászati, urológiai gyakorlatban, fertőző betegségek gyakorlatában, pulmonológiában, ftiziológiában, gasztroenterológiában, hematológiában, onkológiában és másokban.

A kutatás anyaga és a gyűjtés szabályai

A PCR-kutatás anyaga, amelyben idegen bakteriális DNS vagy vírus DNS vagy RNS kimutatható, különféle biológiai közegek és emberi folyadékok lehetnek: nyálka, vizelet, vér, köpet, hámsejtek kaparék, méhlepényszövet, vér, prosztatalé, magzatvíz, pleurális folyadék.

A szexuális úton terjedő fertőzések (STI-k) szűrése során a férfiakat és a nőket megvizsgálják a nemi szervi váladékra, a méhnyakból származó kenetre vagy kaparásra, a húgycsőből (húgycsőből) származó kenetre vagy kaparásra és a vizeletre.

A fertőzések (herpetikus fertőzések, CMV, mononukleózis, toxoplazmózis, hepatitis B, C, HIV fertőzés) vizsgálatakor vért vesznek PCR-re.

A fertőző mononukleózis, CMV vagy herpetikus fertőzés diagnosztizálásához tampont vesznek a torokból, és vizeletet vesznek a CMV vizsgálatára. Gyakran elváltozások vizsgálatára idegrendszer Számos tanulmányban cerebrospinális folyadékot vesznek.

A pulmonológiában a köpet és a pleurális folyadék az alkalmazott anyag.

A méhen belüli fertőzések vizsgálatakor - magzatvíz, placenta szövet.

Anyagszállítás előkészítése és PCR diagnosztika

Szinte minden PCR-diagnosztikán átesett betegnek joga van megbízható, pontos és gyors eredményre számítani, ami nagymértékben függ a laboratórium képességeitől és a laboratóriumi orvos professzionalizmusától. Ugyanakkor sokan nem gondolják, hogy ez a megbízhatóság nagymértékben rajtunk múlik, mégpedig a kezelőorvos ajánlásaitól, életmódjától és az anyaggyűjtés helyességétől. Az anyaggyűjtés során olyan feltételek szükségesek, amelyek kizárják az anyag szennyeződését (szennyeződését), és ennek megfelelően kétségbe vonják az elemzés objektivitását.

Az anyag benyújtásának megfelelő előkészítése nem különösebben nehéz. Az orvosok a következő ajánlásokat fogalmazzák meg a betegek számára:

1) ne legyen szexuálisan aktív egy nappal az anyag benyújtása előtt;
2) vért kell adni a vizsgálathoz reggel éhgyomorra (ne egyen vagy igyon);
3) vizeletadáskor az első reggeli adagot tiszta, steril edénybe kell gyűjteni.

Készenléti idő a PCR elemzéshez

A végeredmény az anyag leadása után 1,5-2 nappal készen áll. Egyes esetekben az eredmény már az első napon készen áll.

A PCR eredmények értelmezése

Negatív a PCR eredmény azt jelzi, hogy a vizsgálati anyagban a kiszállításkor nem találtak fertőző ágensek nyomait. A legtöbb eset azt mutatja, hogy hiányzik a fertőzés, amelyet a vizsgálati mintában próbáltak kimutatni.

Pozitív a PCR eredménye fertőzésnyomok kimutatását jelzi a vizsgált biológiai mintában. A pozitív eredmény nagy pontossággal jelzi a fertőzés jelenlétét egy adott időpontban.

Vannak helyzetek, amikor a PCR pozitívnak bizonyul, de nem beszélhetünk aktív fertőzésről - ez az úgynevezett „egészséges fuvarozás” klinikai tünetek kezelést nem igénylő, de dinamikus orvosi megfigyelést igénylő betegség. Gyakrabban figyelhető meg számos vírusfertőzés (HPV, CMV-fertőzés, EBV-fertőzés, herpetikus fertőzés és mások) esetén olyan anyagokban, mint a nyál, a nyaki csatorna kaparékolása, a húgycső, azaz helyi fókuszból. Nem szabad azonban megfeledkezni arról, hogy a fertőzés a hordozókról egészséges emberekre is átterjedhet, csakúgy, mint az átmenet krónikus forma betegségek a folyamat aktiválásával. Ha a PCR pozitív a vérben, akkor ez már nem fuvar, és speciális kezelést igényel.

A PCR kvantitatív eredményét csak az orvos egyedileg értékeli egy adott fertőzésre külön-külön, és nincs általános fokozata. A kvantitatív PCR eredménye alapján az orvos meghatározhatja a fertőzési aktivitás mértékét és beállíthatja a betegség stádiumát, ami minden bizonnyal befolyásolja az előírt gyógyszerek lefolyását és adagját.

Az egyik utolsó izgalmas kérdés: mennyire pontos a PCR diagnosztika?

A PCR-analízis három definíciója létezik:

1. Pontosság (nagy valószínűséggel lehetséges a fertőzés észlelése vagy elkerülése).
2. Specificitás (specifikus fertőzés kimutatásának pontossága).
3. Érzékenység (még a vizsgált mintában lévő kórokozók genetikai anyagának alacsony tartalommal is kimutatható a fertőzés).

A polimeráz láncreakció gyakorlatilag nem ad hamis eredményeket. pozitív eredményeket(vagyis ott nincs pozitív minta ahol nincs fertőzés). A hamis negatív eredmények ritkák (leggyakrabban azért, mert jelenleg nincs aktív fertőzés a személyben). Például látens fertőzés, krónikus fertőzés aktivitás nélkül.

Fertőző betegség orvos N.I. Bykova

Videó arról, hogy miért és hogyan kell PCR-tesztet végezni fertőzésekre

A rendkívül informatív PCR (polimeráz láncreakció) módszer lehetővé teszi a különböző akut vagy krónikusan előforduló genetikai és fertőző betegségek korai felismerését. Sőt, még abban a szakaszban is azonosíthatók, amikor semmilyen tünet nem jelentkezik. A PCR-elemzést leggyakrabban a szexuális úton terjedő fertőzések (STD-k, STI-k) kimutatására használják.

A PCR-analízis olyan molekuláris diagnosztikai módszerre vonatkozik, amely a kórokozó bizonyos nukleinsav-fragmenseinek (DNS) kis koncentrációjának többszörös növelésén alapul bármely biológiai anyagban (méhnyakból, hüvelyből, húgycsőből, vérből, nyálból, köpetből, stb.), és összehasonlítja DNS-ét vagy RNS-ét a fertőző ágensek ismert típusait tartalmazó adatbázissal.

A technikát az amerikai Carrie Mullis fejlesztette ki a múlt század 80-as éveiben. 1993-ban a tudós elnyerte a kémiai Nobel-díjat. Ma a PCR-teszt egyfajta „arany standardnak” számít a fertőzések túlnyomó többségének diagnosztizálására. A PCR-elemzést széles körben használják az orvosi gyakorlatban a betegség természetének tisztázására és pontos diagnózis felállítására. Nagyon gyakran vannak olyan esetek, amikor minden ismert immunológiai, virológiai és bakteriológiai módszerek ne dolgozz. Ekkor a PCR lesz az egyetlen módja a betegség aktív stádiumának azonosítására.

A PCR diagnosztika előnyei más módszerekkel szemben

A PCR-technikát számos tagadhatatlan előnye miatt széles körben alkalmazzák a modern gyógyászatban. Beszéljünk róluk részletesebben.

A kórokozó jelenlétének közvetlen kimutatása

A hagyományos diagnosztikai módszerek közül sok olyan markerek meghatározásán alapul, amelyek a kórokozó salakanyagai. Ez a diagnosztikai elv csak közvetett módon tudja megerősíteni a patológiát. A PCR módszer lehetővé teszi a kórokozó közvetlen azonosítását, mivel a kórokozó szervezetek DNS-ének meghatározott szakaszait azonosítja.

Magas specifitás

A PCR technika rendkívül specifikus, mivel csak egy specifikus fertőző ágensre jellemző DNS-fragmensek kimutatását teszi lehetővé. Immunológiai módszerek alkalmazásakor továbbra is fennáll a hamis eredmény (a diagnózis hibái keresztreagáló antigénekkel járnak). Ami a PCR-t illeti, itt a hibák kizártak, mivel a specificitást ebben az esetben a primerek nukleotidszekvenciája határozza meg.

Magas érzékenység

Ezzel a módszerrel akár egyetlen patogén mikroorganizmusokat is meghatároznak. A fertőző ágenseket akkor is kimutatják az emberi szervezetben, ha más diagnosztikai módszerek nem tisztázzák a helyzetet (különféle immunológiai mikroszkópos és bakteriológiai kutatási módszerekről beszélünk).

Összehasonlításképpen itt van néhány adat. A mikroszkópos és immunológiai módszerek érzékenysége 103-105 sejt, a PCR érzékenysége 10-100 sejt mintánként.

A módszer sokoldalúsága

A PCR technika a patogén organizmusok DNS-ének vizsgálatán alapul. A kutatás során olyan RNS vagy DNS fragmentumokat határoznak meg, amelyek specifikus fertőző ágensekre jellemzőek. Mivel minden nukleinsav hasonló kémiai összetételű, amikor laboratóriumi elemzés szabványosított módszerek használhatók. Ez azt jelenti, hogy egy minta vizsgálata több kórokozó azonosítását teszi lehetővé egyszerre.

Gyors eredmény elérése

Ez a technika nem igényel kórokozó kultúrák termesztését, ami meglehetősen sok időt vesz igénybe. Az anyagok feldolgozására és a reakciótermékek azonosítására szolgáló egységes technológia alkalmazásának, valamint az automatizált amplifikációs folyamatnak köszönhetően a teljes kutatási folyamat mindössze néhány órát vesz igénybe.

A fertőzések látens formában történő kimutatásának lehetősége

A PCR technika lehetővé teszi a preklinikai diagnosztika (kórokozók azonosítása a tünetek megjelenése előtt) és retrospektív diagnosztika (kórokozók betegség utáni azonosítása) hatékony elvégzését. Így a preklinikai diagnosztikának nagy jelentősége van a beteg vizsgálata során lappangási időszak lehetséges betegség - a fertőzés gyanúja után az első jelek megjelenése előtt.

A PCR egyik fontos előnye, hogy biológiai maradványokat vagy archív anyagokat használhat az elemzéshez. Ez lehetővé teszi az apaság és a személyazonosság azonosítását.

Napjainkban a PCR diagnosztikai módszerek tovább fejlődnek. Magát az elemzési technológiát fejlesztik, és új típusú PCR-ek jelennek meg. Ennek a reakciónak az innovatív tesztrendszereit vezetik be az orvosi gyakorlatba. A tudomány ilyen gyors fejlődésének köszönhetően az eljárás költsége csökken, és a PCR-tesztek ma már számos betegcsoportnál alkalmazhatók.

Ez a diagnosztikai módszer egy adott RNS- vagy DNS-szakasz többszöri megkettőzésén alapul. Ezt a folyamatot a laboratóriumban speciális enzimek segítségével végzik. Ennek eredményeként annyi DNS (RNS) szakasz keletkezik, amennyi a vizuális vizsgálathoz szükséges. Az eljárás során csak azt a területet másolják át, amely megfelel a meghatározott feltételeknek (ha a vizsgált mintában jelen van).

A biológiai anyagot, amelyet meg kell vizsgálni a kórokozók DNS-ének vagy RNS-ének jelenlétére, egy ciklusba helyezik. (Az adott helyzettől függően vért, vizeletet, nyálat és a nemi szervekből származó váladékot vesznek elemzésre). Ezután speciális enzimeket adnak a mintákhoz. Megkötődnek a patogén mikrobák RNS-éhez vagy DNS-éhez, és megindul a másolatok szintézise. A másolás többlépcsős folyamat, amely láncreakcióként megy végbe. Az eredmény több száz vagy akár több ezer példány is lehet.

A következő diagnosztikai szakaszban az eredményeket elemzik és összehasonlítják a fertőző ágensek adatbázisával.

A PCR-technika nemcsak a kórokozó szervezet típusának meghatározását teszi lehetővé, hanem következtetéseket is levonhatunk az emberi szervezetben lévő fertőző ágensek számáról.
Napjainkban az ilyen technológiák alkalmazása széles lehetőségeket nyit meg a mutációk és a DNS-szakaszok illesztésének vizsgálatában. A modern orvostudományban a módszert elkezdték alkalmazni az apaság meghatározására, az új gének azonosítására és még sok másra.

Sokoldalúságának köszönhetően a PCR módszer széles körben alkalmazható az urológiában, nőgyógyászatban, pulmonológiában, onkológiában, hematológiában, ftiziológiában, fertőző betegségek gyakorlatában és az orvostudomány más területein.

Anyag PCR elemzéshez

A PCR diagnosztikához különféle biológiai közegeket, emberi szervezetből vett folyadékokat használnak: köpet, nyálka, nyál, vizelet, vér, hámsejtek, méhlepényszövet, pleurális folyadék, magzatvíz, prosztatalé stb.

Az STD (STI) diagnosztizálása során elemzik a férfi és női nemi szervek folyását. Ehhez kenetet vagy kaparást kell végezni a húgycsőből vagy a méhnyakból. A vizeletet kutatásra is használják.

A fertőzések (herpesz, mononukleózis, CMV, toxoplazmózis, HIV, hepatitis B és C) azonosításához vért vesznek elemzésre. Ha az idegrendszer károsodásának gyanúja merül fel, agy-gerincvelői folyadékot gyűjtenek.

A tüdővizsgálatokhoz pleurális folyadékot és köpetet használnak.

A méhen belüli fertőzések azonosításához a méhlepényszövetet és a magzatvizet elemzik.

PCR STI-k és egyéb fertőzések esetén

Milyen fertőzések mutathatók ki PCR-analízissel?

HIV fertőzés (humán immunhiány vírus HIV-1 kimutatható).

Vírusos hepatitis A, B, C, G (RNS-HAV, DNA-HBV, RNS-HCV, RNS-HGV).

STI-k (szexuális úton terjedő fertőzések) – ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis.

Fertőző mononukleózis (Epstein-Barr vírus DNS - EBV).

Citomegalovírus fertőzés (DNS-CMV).

Herpetikus fertőzés (DNS herpes simplex vírus HSV 1. és 2. típus).

Tuberkulózis (Mycobacterium tuberculosis).

Onkogén vírusok - papillomavírus fertőzés (humán papillomavírus (beleértve annak onkogén 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 és 59 onkogén típusait).

Borreliosis, kullancsencephalitis.

Listeriosis.

Candidiasis (a Candida nemzetségbe tartozó gombák).

Helicobacter pylori fertőzés
és mások.

PCR analízis elkészítése és leadása

Betegek, akik adományoztak anyagot PCR elvégzése diagnosztika, számíthat a gyors és pontos eredmények elérésére. Ebben az esetben egy fontos pontot kell figyelembe venni - a diagnózis megbízhatósága nem csak a szakemberek professzionalizmusától és az orvosi laboratórium képességeitől függ. Ahhoz, hogy a vizsgálat informatív legyen, a páciensnek magának kell erőfeszítést tennie. Tehát szigorúan be kell tartania az orvos összes ajánlását, és gondosan be kell tartania az anyaggyűjtésre való felkészülés szabályait. Nagyon fontos a biológiai minták szennyeződésének megakadályozása, ellenkező esetben a vizsgálati eredmények torzulnak.

Felkészülés a PCR elemzésre

Az eljárásra való felkészülés nem különösebben nehéz. Csak emlékezzen néhány szabályra:

PCR-elemzés céljából vért adnak éhgyomorra. A vért egy vénából veszik, általában reggel steril tűvel egy speciális tartályba.

Az anyag begyűjtése előtti napon a szexuális absztinencia javallt, ha PCR-kenetet vesznek STI-k miatt.

A vizelet PCR-vizsgálatához az első adagot le kell venni; a tartálynak sterilnek kell lennie.

Hogyan végezzünk PCR-tesztet férfiaknál és nőknél

A PCR-elemzést férfiaktól és nőktől veszik az oltószobában, ez vénás vér, nyál, garattampon, mandulák, orr-garat tamponok stb. A gyűjtés módja nem különbözik.

Az STI-k kimutatására szolgáló PCR-tesztet a terhességi klinikán, nőknél nőgyógyászati ​​vizsgálat során vesznek, ezek a hüvelyből, a méhnyakból és a húgycsőből származó kenetek. Férfiaknál az andrológus vagy venereológus látogatása során ez a húgycsőből származó kenet.

A PCR-hez szükséges anyaggyűjtési sémák

Mennyi ideig tart a PCR elkészítése?

A betegeknek nem kell sokat várniuk a PCR vizsgálat eredményére. A teljes elemzési eljárás általában több órától (valós idejű PCR) 2-10 napig tart. A vizsgálati eredményeket a páciens általában 2-5 napon belül, legfeljebb 10 napon belül kézhez kapja, az elemzés típusától függően. A HIV és hepatitis PCR vérdiagnosztikája tart a legtovább, a kenetek és kaparások a legtovább - 2-3 napig.

A negatív eredmény azt jelzi, hogy a biológiai anyagban jelenleg nem mutattak ki fertőző ágensek nyomait. Azaz a fertőzés, amelyre a vizsgálatot elvégezték, hiányzik.

A pozitív eredmény a kórokozó nyomainak kimutatását jelzi a biológiai mintákban. Ez azt jelenti, hogy jelenleg fertőzés van az emberi szervezetben.
Előfordulhatnak olyan esetek, amikor a PCR pozitív eredményt ad, de nem figyelhető meg aktív fertőző folyamat. Az „egészséges kocsi” nevű jelenségről beszélünk. Az ilyen betegek kezelése nem szükséges, de állandó dinamikus megfigyelés alatt kell tartani őket. Az ilyen helyzetek jellemzőek a vírusfertőzésekre: Epstein-Barr vírus (EBV), genitális herpesz, citomegalovírus fertőzés (CMVI), humán papillomavírus (HPV), amelyekben lokális gócokból (húgycső, méhnyakcsatorna kaparás) vesznek mintát kutatás céljából, nyál). Ugyanakkor nem szabad megfeledkeznünk arról, hogy az egészséges hordozó átadhatja a fertőzést másoknak. Ezenkívül nem zárható ki a fertőző folyamat aktiválása. Azokban az esetekben, amikor a PCR pozitív eredményt ad a vérvizsgálat során, ez már nem tekinthető fuvarozásnak. Az ilyen betegek speciális kezelést igényelnek a kimutatott kórokozó által okozott betegségre.

A mennyiségi mutatók nem rendelkeznek általános fokozatokkal. Ezeket az orvos minden egyes fertőzésre egyedileg értékeli. A kvantitatív eredmény lehetővé teszi a fertőzés aktivitásának meghatározását és a folyamat szakaszának meghatározását.

A PCR módszer megbízhatósága

Három kritérium van a technika hatékonyságának értékelésére:

- Pontosság– fertőzés (vagy annak hiánya) nagy valószínűséggel történő észlelése.

- Specifikusság– egy adott kórokozó azonosításának pontossága.

- Érzékenység– a kórokozó azonosításának képessége kis mennyiségű genetikai anyaggal is a biológiai mintákban.

A PCR módszer alkalmazásakor szinte lehetetlen hamis pozitív eredményt elérni (vagyis ha a kórokozó hiányzik, akkor pozitív teszt nem lesz).

Lehetséges hamis negatív eredmény, de ez meglehetősen ritka. Hasonló helyzetek merülnek fel, ha a fertőzés a vizsgálat időpontjában inaktív. Például egy krónikus fertőzés aktivitás nélkül vagy egy látens fertőzés.

PCR elemzés: videó

PCR diagnosztika(polimeráz láncreakció) a betegség aktív szakaszának azonosítására szolgál hagyományos vizsgálatokkal kombinálva, amikor immunológiai és mikrobiológiai diagnosztikai módszerekkel nincs reakció.

A PCR-diagnosztikát egy bizonyos ideig csak tudományos célokra használták, és csak a 20. század végétől és a 21. század elejétől vált ez az elemzés egyfajta „arany standardsá”, amely nagy hasznot hozott az orvostudomány különböző területein. .

Mi a PCR diagnosztika lényege?

A PCR-diagnosztika, ellentétben az antitestek (AT) nyomainak kimutatására képes eszközökkel, nemcsak a kiváltó okokat állapítja meg. kóros állapot, hanem laboratóriumi enzimek segítségével kimutatja a DNS vagy RNS jelenlétét egy adott területen.

A PCR módszerrel végzett elemzés rendkívül pontos, kiküszöböli a hamis reakciók lehetőségét, és egyáltalán nem szükséges vénából vért venni a vizsgálathoz, elegendő kis számú szövetminta vagy biológiai folyadék.

A fertőzőgyanús kórokozót tartalmazó vizsgálandó anyag biológiai környezetének fent említett változatához orvosi döntéssel egyszerre több lehetőség is hozzárendelhető, többek között ez lehet:

• kenet(váladék a nemi szervekből);
• nyálkás kaparás(száj, orr, nemi szervek);
• nyál, köpet vagy pleurális folyadék;
• prosztatalé, a prosztata szekréciójának vizsgálata kártevő jelenlétére;
• placenta szövet vagy magzatvíz;
• általános vizelet elemzés az üledék vizsgálata (centrifugálás után), ha szükséges a Mycobacterium tuberculosis azonosítása érdekében;
• gerincvelői folyadék a központi idegrendszer fertőző elváltozásainak azonosítása;
• sejtek vagy szövetek összegyűjtése(biopszia) a májból, patkóbél, gyomor stb.

Ezeket a mintákat egy speciális reaktorba helyezik, és a vizsgált DNS-fragmensek ismételt megkettőzésével (amplifikálásával), ismételt replikációs és denaturálási ciklusokkal, specifikus szintézis enzimek hozzáadásával elemzik. A láncreakció típusa alapján ez a módszer azonosítja a DNS vagy RNS típusát és egyedi jellemzőit. Végső soron a PCR folyamata a klónozott genetikai anyag összehasonlító elemzésében lehetővé teszi az élő vírus egyetlen sejtjének azonosítását is, könnyen megkülönböztetve az ureaplazmát a mikoplazmától vagy a mikoplazmától.

A PCR diagnosztika előnyei és hátrányai

Ennek a PCR-diagnosztikának vannak előnyei és számos hátránya is.

A diagnosztika előnyei:

• a kórokozó meghatározása közvetlenül jelzi a DNS vagy RNS atipikus szakaszának jelenlétét a genetikai anyagban;
• A PCR-diagnosztika 100%-ban pontos, mivel a vizsgált anyagban csak egy adott vírusra vagy baktériumra jellemző nukleinsavrészecskék (DNS- vagy RNS-fragmensek) vannak jelen;
• a PCR rendszer nagy érzékenysége más diagnosztikai módszerekkel összehasonlítva. A kórokozó jelenlétének meghatározására szolgáló PCR-analízishez egy élő vírus sejtre van szükség (10-100 sejt egy mintában), amely lehetővé teszi a patogén mikroorganizmus kimutatását a betegség korai szakaszában, kifejezett tünetek hiányában, és haladó formákban;
• A csúcstechnológiás automatizált PCR-amplifikáció növeli az elemzés sebességét azáltal, hogy a gyűjtés napján elvégzi a vizsgálatot (legfeljebb 4-6 órát szánva a diagnózisra). Ez növeli a termelékenységet és felsőbbrendűséget biztosít a kulturális kutatási módszerekkel szemben;
• Az elemzés sokoldalúsága lehetővé teszi, hogy egy biológiai mintából több kórokozót is kimutathassunk a különböző módon gyűjtött DNS vagy RNS genetikai anyag felhasználásával.

Ha már a hátrányokról beszélünk, akkor a PCR rendszer érzékenysége miatt az egyik kellemetlen pillanat a következő:

• a mikroorganizmusok változékonysága. Hátránya, hogy a mikroorganizmusokat mutáció jellemzi, ami a vizsgált kórokozó genotípusának megváltozásához vezet. A genom amplifikált régiójában található PCR tesztrendszer pedig nem képes kimutatni egy már kialakuló kórokozó hibridjét, ahogy az emberi immunrendszer sem ismeri fel, így nem jön létre a fertőző betegség jelenlétét megállapító reakció sem. De ehhez különböző fejlesztések folynak a PCR-módszer javítására;
• hamis pozitív vagy hamis negatív eredmény elérésének lehetősége. Annak érdekében, hogy a PCR-diagnosztika egyik szakaszában ne találkozzon hamis eredményekkel, óvatosan, a folyamat megszakítása nélkül, az anyaggyűjtési szabályok betartásával kell elvégezni. A minták szerkezete megváltozhat vagy teljesen megsemmisülhet, ami hamis negatív vagy álpozitív eredményhez vezethet. Meg kell érteni, hogy ez az eredmény akkor fordulhat elő, ha a fertőzés már elpusztult, de az elhalt sejteknek még nem volt idejük megújulni, és a klónozás során figyelembe vették őket. Ezért tovább korai szakaszaiban a kezelés után más módszereket alkalmaznak (például), és az inaktív fertőző ágensek teljes eltávolítása után a szervezetből kontrollanalízist végeznek a PCR módszerrel. És a kezelőorvos hozza meg a végső döntést a terápia célszerűségéről, figyelembe véve az összes előnyt és hátrányt.

Felkészülés a PCR diagnosztikára és a vizsgálatok felvételének feltételei

Érdemes odafigyelni egyszerű előkészítés PCR-re, ehhez szigorúan követni kell a kezelőorvos összes ajánlását, és legalább több tagadhatatlan feltételt be kell tartani a pontosabb eredmény érdekében.

A vizsgálathoz szükséges anyaggyűjtés módjától függően emlékezni kell arra, hogy:

• vénás vért használó diagnosztikához a beteget éhgyomorra kell megvizsgálni, még a folyadékfogyasztást is kizárva;
• kenetvizsgálatra Legalább néhány napig tartózkodni kell a szexuális érintkezéstől, a nemi szervek higiéniáját az esti órákban végezni, de a vizsgálat napján nem. Érdemes kiválasztani a vizsgálat elvégzésének optimális időpontját, figyelembe véve: két nappal a menstruációs ciklus előtt vagy után;
• bármilyen anyaggyűjtési módhoz néhány héttel a vizsgálat előtt hagyja abba az antibakteriális gyógyszerek alkalmazását, miután konzultált orvosával, mivel ez befolyásolhatja az eredmény megbízhatóságát;
• vizeletvizsgálatra A kórokozók jelenlétének megállapításához nemcsak a sterilitás és a higiénia megőrzése szükséges, hanem a kutatáshoz begyűjtött anyag minőségének biztosítása is, amely pontosabb információkat nyújt. Ezért megengedhető, hogy az utolsó vizeléstől számítva 2-3 órát várjunk a vizeletgyűjtés előtt, vagy reggeli mintát használjunk, ami nagy valószínűséggel gyulladásos folyamat jelenlétét mutatja.

A PCR alkalmazása és a kimutatott betegségek

Számos betegség kórokozóinak felkutatásához nem szabad figyelmen kívül hagyni a fent említett ajánlásokat, és a PCR diagnosztikai módszerrel végzett, előírt orvosi vizsgálat nemcsak egy felnőttet, hanem egy kis, még meg nem született gyermeket is megvédhet az anyaméhben súlyos szövődmények.

Valójában gyakrabban a lakosság női fele szenved bizonyos típusú vírusoktól (HPV), ami jelentősen növeli a méhnyakrák vagy a meddőség valószínűségét. Tekintettel a terhesség lefolyására és a magzati fejlődésre gyakorolt ​​lehetséges negatív hatásokra, figyelembe kell venni, hogy a nemi úton terjedő vagy immunhiányos mikroorganizmusok különböző csoportjait nehéz a kórokozók egyik vagy másik csoportjába sorolni, mivel nagyon összefüggenek egymással (például TORCH-fertőzések és STI-k). De a polimeráz láncreakció képes találni egy idegen struktúrát, azonosítva a vírus DNS specifikus típusát a női testben.

Az elemzési eredmények dekódolása lehetővé teszi a betegségek jelenlétének megerősítését vagy cáfolatát. A kórokozók széles körét lefedő elemzés nagyon fontos számos fertőzés időben történő kimutatása szempontjából, mint például:

• HIV-fertőzés kimutatása. Az immunrendszer súlyos károsodása olyan fertőzés által, amely elsősorban az immunrendszer felszínén lévő, CD4 receptorokon lévő immunkompetens sejteket érinti, amelyek ezt követően elveszítik a fertőzésekkel szembeni védekezési képességüket, és nem reagálnak a vírus RNS jelenlétére a vérplazmában. Anonim vizsgálat során pozitív eredmény esetén további vizsgálatok kiegészítésével megismétlik;
• vírusos hepatitis, leggyakrabban hepatitis C(RNS kórokozót tartalmazó), amely könnyű hordozhatósága miatt más módszerekkel nehezen diagnosztizálható, mert a PCR módszer optimálisabb a kórokozó vérben vagy májbiopsziában történő felismerésére. késői stádiumban nyilvánul meg, rosszindulatú gyulladásos folyamatot képezve. Érdemes azonban figyelembe venni, hogy ha a vérben található antitestek (AB) vizsgálatakor az eredmény pozitív, és a PCR analízis negatív eredményt ad, ez jelezheti a vírus jelenlétét a szervezetben. nagyon kis mennyiségben, vagy az érintett sejtek a májsejtek genomjában várakozó stádiumban vannak anélkül, hogy a véráramba kerülnének. Ilyen esetekben egy sor ismételt vizsgálatot kell végezni a végső diagnózis és a kezelési módszer meghatározása érdekében;
• onkogén vírusok, például HPV(humán papillomavírus) több mint 100 különböző típusú vírussal, szexuális úton terjedő vagy orvosi beavatkozások során, az anyától származó újszülött fertőzése átjut a szülőcsatornán, ha papillomavírus fertőzés hordozója;
• STI(szexuális úton terjedő fertőzések);
• alkalmas minden STD kimutatására(, gardnerellosis,) és TORCH fertőzések;
• nagy pontossággal jelzi mononukleózis fertőzés jelenléte, amelyet a nyirok- és retikuloendoteliális rendszer károsodása (nyirokcsomók, lép, máj megnagyobbodása) jellemez, PCR diagnosztikával, vérszérum vizsgálati anyaggal kimutatható. Külső paraméterek szerint a Filatov-kór kiütésekben, a bőr epeképződésében, fehér bevonat a nyelven.
• , behatol az AIDS-betegek és az immunrendszert elnyomó gyógyszerek segítségével szervátültetésen átesett betegek vérébe;
• herpetikus fertőzés, amely a herpesz egyik vagy másik típusát képviseli, amely érintheti a nemi szerveket, a szem nyálkahártyáját vagy a bőrt;
• tuberkulózis. Ha a betegség fő tünetei jelen vannak, a bronchoszkópia eredményeit követően PCR-vizsgálatot írnak elő, amely lehetővé teszi a tuberkulózis aktív szakaszának sokkal gyorsabb diagnosztizálását, mint a bakteriológiai vagy bakterioszkópos módszer alkalmazása;
• vírusos fertőző betegségek, mint pl kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás(Borreliosis). Jellemzője az idegrendszer sejtjeinek károsodása, mérgezés, agygyulladás és ezt követő bénulás. Az antigén PCR-diagnosztikával történő kimutatásához vért és agy-gerincvelői folyadékot vesznek az RNS-vírus izolálására.
• Helicobacter pylori fertőzés kimutatása(idült gyomorhuruthoz, peptikus fekélyhez, gyomordaganathoz vezet) a PCR-diagnosztika segítségével biopsziában, ürülékben, nyálban kimutatható a Helicobacter pylori DNS (genetikai anyag), a rosszindulatú daganat mértéke szerint megkülönböztetve a törzseket.

A fertőzések PCR diagnosztikája felgyorsult ütemben fejlődik, sikeresen alkalmazzák az onkológiában, nőgyógyászatban, urológiában, gasztroenterológiában, virológiában, a lista folyamatosan bővül, de nem korlátozódik a fertőző betegségek kórokozóinak felkutatására. A PCR módszer egyéb gyakorlati alkalmazásai közül kiemelhető az apaság megállapítására és az egyének azonosítására irányuló kutatások alkalmazása is.

Modern korunkban a molekuláris genetikát széles körben alkalmazzák az orvostudomány különböző ágaiban. Megalakulása óta az egyik legelterjedtebb lett hatékony módszerek diagnózist, és lehetővé tette az emberi szervezetben lévő fertőzések gyors és pontos azonosítását. Ha Moszkvában DNS-diagnosztikát kell végeznie, kérjük, vegye igénybe az Euromedprestige klinika szolgáltatásait. Központunk szakemberei nagy tapasztalattal rendelkeznek a genetikai elemzés területén, és garantálják a DNS-anyag rendkívül pontos vizsgálatát a lehető legrövidebb idő alatt!

Miért végeznek DNS-diagnosztikát Moszkvában?

A DNS-diagnosztika a mikrobiológiában a fertőző betegségek azonosítására használt vizsgálatok széles körére vonatkozik. Az elmúlt években a vírusok és baktériumok rohamosan fejlődnek, fejlődnek, egyre többen vannak, és egyre nehezebb azonosítani őket. A genetikai módszerek alkalmazása lehetővé teszi akár egyetlen mikroorganizmus megtalálását a vizsgált mintában, és egyszerre több kórokozó azonosítását egy biológiai mintában.

Klinikánkon Moszkvában a DNS-diagnosztika legáltalánosabb módszere a PCR (polimeráz láncreakció). Végrehajtásakor a DNS nukleinsav egyes szakaszainak többszörös szelektív másolása történik, enzimek (komplex fehérjemolekulák) segítségével. A reakciót egy speciális berendezésben hajtják végre - egy termikus ciklusban, amely időszakonként felmelegíti és lehűti a kémcsöveket egy mintával, majd valós időben jeleníti meg az információkat a kijelzőn grafikonok formájában.

A folyamatban lévő kutatás lehetőségei meglehetősen nagyok. Segítségével meg lehet határozni nagyszámú betegségek, beleértve szinte az összes szexuális úton terjedő fertőzést:

• ureaplasma;
• chlamydia;
• Candida gombák;
• gardnerella;
• trichomonas;
• gonococcusok és mások.

Gyakran vannak olyan helyzetek, amikor az orvosnak meg kell határoznia a terápia hatékonyságát vagy a betegség gyógyulásának mértékét - és ebben az esetben a moszkvai DNS-diagnosztika egyszerűen pótolhatatlanná válik. Különösen fontosnak tartják rejtett, mikroszkóppal nehezen kimutatható fertőzések jelenlétében.

A PCR módszer egyszerűen végrehajtható, és számos előnnyel rendelkezik:

• Magas specifitás - a tesztelés során a mintában egy DNS-fragmenst izolálnak, amely egyedi kórokozóra jellemző.
• Túlérzékenység – fertőzés akkor is kimutatható, ha a vizsgált anyag csak egy vírus- vagy baktériumsejtet tartalmaz.
• Sokoldalúság - bármilyen biológiai anyag felhasználható a diagnózis felállításához, mivel a fertőzés gyakran minden szövetben megtalálható.
• Közvetlen kimutatás – sok más módszertől eltérően a PCR nem közvetett jelekkel, hanem az összegyűjtött anyagban való közvetlen jelenlétével segíti a kórokozó azonosítását.
• A preklinikai DNS-vizsgálat lehetősége Moszkvában - a kórokozók már a tünetek megjelenése előtt kimutathatók, beleértve az inkubációs időszakot is.

0Tömb ( => Elemzések) Tömb ( => 2) Tömb ( =>.html) 2

Hogyan készüljünk fel a vizsgára

A kórokozó azonosításához megengedett különféle anyagok használata - vér, köpet, vizelet, a hám kaparása a hüvelyből, a méhnyakból vagy a húgycsőből. Az elemzés pontossága nagymértékben függ az anyaggyűjtés sterilitásától. Mivel a PCR megnövekedett érzékenységgel rendelkezik, a minta bármilyen szennyeződése torzíthatja a kapott eredményt.

A diagnózis megbízhatóságában fontos szerepet játszik a páciens előzetes felkészítése a vizsgálatra. Nem okoz nehézséget, és a következő ajánlásokat tartalmazza:

• A vizsgálat előtt 1 hónappal abba kell hagyni az antibiotikumok szedését.
• A DNS-diagnosztikához szükséges vért moszkvai központunkban reggel éhgyomorra adják.
• Vizeletadáskor az első reggeli adagot steril edénybe kell gyűjteni a nemi szervek gondos higiéniája után.
• A szexuális úton terjedő fertőzések vizsgálatakor a mintavétel előtt 72 órával az intim életet, 3-4 órával a vizelést kizárjuk. A tegnapi naptól kezdve nem szabad nemi szervi higiéniát végezni.

A DNS-diagnosztika pontossága Moszkvában központunkban

Központunk falain belül minden vizsgálatot kizárólag minősített szakemberek végeznek. A laboratórium a DNS-tesztelés legújabb fejlesztéseivel van felszerelve, ami minimálisra csökkenti az emberi tévedés lehetőségét. Az Euromedprestige szakemberei által a moszkvai DNS-diagnosztikához használt csúcstechnológiás berendezések lehetővé teszik akár 97% -os pontosságú eredmények elérését.

A fejlett tudományos és műszaki fejlődésnek köszönhetően a módszernek nincs analógja a minőség és az ár arányában. Alacsony költséggel a páciens lehetőséget kap arra, hogy gyorsan megtudja diagnózisát, és megkezdje az azonosított betegség kezelését, még mielőtt az szövődményeket okozna.

gasztroenterológia diagnosztikai komplexum - 5360 rubel

CSAK MÁRCIUSBAN megtakarítás - 15%

A PCR (polimeráz láncreakció) a molekuláris biológia vívmánya, a 20. század végén és a 21. század elején a klinikai laboratóriumi diagnosztika egyik fő módszere, amely óriási hasznot hoz az orvostudomány különböző területein.

Így még akkor is, ha az emberi test több millió sejtje között nem maga az élő vírus veszett el, hanem csak egy részecskéje a DNS-nek, akkor a PCR, ha semmi nem zavarja, valószínűleg megbirkózik a feladattal, és jelenteni fogja a jelenlétét. egy „idegen” pozitív eredménnyel. Ez a PCR lényege és fő előnye.

Előnyök és hátrányok

A PCR diagnosztikát végző laboratórium a legmagasabb követelményeket támasztja a berendezések, a vizsgálati rendszerek és az egészségügyi személyzet képzettsége tekintetében. Ez egy csúcstechnológiás laboratórium, amely rendkívül érzékeny és nagyon specifikus reagensek arzenáljával rendelkezik, így nincs különösebb hátránya. Hacsak nem ad pozitív eredményt klinikai megnyilvánulások hiányában, és ezzel dilemma elé állítja a klinikust: érdemes-e elkezdeni a kezelést vagy sem?

A pácienst megfigyelő orvos kételkedni kezd a vizsgálati eredmények megbízhatóságában, mivel nem látja a betegség jeleit. De mégis, tekintettel a PCR rendszer nagy érzékenységére, nem szabad elfelejteni, hogy már a preklinikai stádiumban is kimutatja a kórokozót, és a pozitív eredmény ebben az esetben inkább előny, mint hátrány. Ennek alapján a kezelőorvosnak magának kell döntenie a terápia célszerűségéről, figyelembe véve egyéb pro és kontra érveket.

A polimeráz láncreakciót használó diagnosztika előnyei nyilvánvalóak:

• Magas specifitás 100%-ot ér el, mivel a kiválasztott mintában egy adott szervezetben rejlő, de az ember számára idegen nukleinsavrészecskék vannak jelen;
• Nagy teljesítményű, mert a PCR egy high-tech automatizált technika, amely lehetőséget ad a vizsgálat elvégzésére a mintavétel napján és így mentesíti a pácienst a felesleges aggodalmaktól;
• Az egy mintán dolgozó PCR több vizsgálat elvégzésére és több kórokozó kimutatása, ha van ilyen feladata. Például a chlamydia fertőzés diagnosztizálásánál, ahol a PCR az egyik fő módszer, a chlamydia mellett a Neisseria (gonococcus), a kórokozó is kimutatható. Ráadásul ez nem befolyásolja negatívan az eredmények megbízhatóságát;
• PCR vizsgálat a lappangási idő alatt veszélyes mikroorganizmusokat tár fel, amikor még nem volt idejük jelentős károkat okozni a szervezetben, azaz korai diagnózis figyelmeztet a kóros folyamat közelgő fejlődésére, amely lehetővé teszi a felkészülést és a teljes felkészültséget.

Ezen túlmenően, a diagnózis során esetenként felmerülő félreértések elkerülése érdekében a PCR azzal is védekezik, hogy eredményeit szükség esetén szakértői felhasználás céljából rögzíteni lehet (fénykép, számítógép).

A PCR-reakciók normája negatív eredmény., jelezve az idegen nukleinsavak töredékeinek hiányát, a pozitív válasz a fertőzés jelenlétét jelzi a szervezetben, a digitális értékek a vírus állapotát és koncentrációját jelzik a vizsgálat időpontjában. Az elemzés teljes értelmezését azonban egy olyan orvos végzi, aki speciális képzésen esett át a „PCR” témában. Nincs értelme, ha megpróbálja saját maga értelmezni az eredményeket, mivel a legvalószínűbb, hogy félreértheti, és előre aggódhat.

Mitől „fél a PCR”, mire képes, és hogyan lehet rá felkészülni?

Mint minden más kutatásnál, néha a teszteredmények álpozitívak vagy hamis negatívak, ahol a PCR sem kivétel. Ez a következő esetekben fordulhat elő:

1. A technológiai folyamat megsértése a reakció egyik szakaszában;
2. Az anyaggyűjtésre, tárolásra vagy szállításra vonatkozó szabályok be nem tartása;
3. Idegen szennyeződések jelenléte az anyagban.

Ez arra utal, hogy a fertőzések PCR-diagnosztikáját körültekintően, körültekintően és pontosan kell megközelíteni, ellenkező esetben az anyagminták szerkezeti felépítése megváltozhat vagy teljesen összeomolhat.

A PCR diagnosztika szakaszai. A hamis eredményeket a vizsgálat bármely szakaszában bekövetkező jogsértések okozhatják.

A fertőzések PCR diagnosztikája a többi laboratóriumi módszer mellett az „arany standardok” kategóriájába tartozik, így számos olyan betegség kórokozóinak felkutatására használható, amelyeknek első ránézésre semmi közük egymáshoz:

• Különféle lokalizációjú tuberkulózis, tüdőgyulladás (beleértve az atipikus, chlamydia által okozott);
• Gyermekkori fertőzések (kanyaró rubeola, mumpsz, kanyaró);
• diftéria;
• szalmonellózis;
• Zoonózisos fertőző betegség - listeriosis (a betegséget a nyirokcsomók, a központi idegrendszer és a belső szervek károsodásával járó különféle tünetek jellemzik);
• Az Epstein-Barr vírus által okozott betegségek (fertőző mononukleózis stb.);
• Humán papillomavírus fertőzés által okozott onkológiai patológia (HPV és típusai);
• Borreliosis (Lyme-kór, kullancs-encephalitis);
• Helicobacter pylori fertőzés, melynek kórokozója az emberi gyomorban élő Helicobacter pylori mikroba. Bebizonyosodott, hogy a Helicobacter gyomor- vagy nyombélrák kialakulását okozza;
• és szinte mindent.

A szexuális úton terjedő fertőzések PCR-diagnosztikája különösen fontos, mivel az így előidézett betegségek gyakran hosszú ideig klinikai megnyilvánulások nélkül zajlanak le, de a terhesség alatt kezdenek aktívabbá válni, és ezáltal veszélyeztetik a beteg egészségét, sőt életét. gyermek. Hasonlóan viselkednek. Némelyikük („fáklya”) az STI-kre is utal, így az utóbbiak részletesebb megfontolást igényelnek. A legnépszerűbb módszerekkel az olvasó a cikk következő részeiben ismerkedhet meg.

Hogyan kell megfelelően felkészülni a megbízható eredmények eléréséhez?

Azonnal jegyezzük meg, hogy a PCR előkészítése meglehetősen egyszerű, és nem igényel különösebb erőfeszítést a páciens részéről. Csak három egyszerű feladatot kell végrehajtania:

1. A teszt elvégzése előtt 24 órával ne éljen együtt;
2. A vénából történő vérvételhez és vizsgálathoz éhgyomorra kell jönni, mellesleg inni sem lehet;
3. A vizeletet éjszaka kell adományozni (reggel - a gyógyszertárban előző nap vásárolt steril edényben).

A PCR bármilyen biológiai környezetben működhet

A PCR módszer nem „vérszomjas”, ezért minden olyan biológiai táptalajt elfogad, amely feltételezett fertőző ágenst tartalmaz. az orvos dönti el, hogy mit vigyen kutatásra.

Így a kórokozó keresése során a vérvizsgálaton kívül (bár ez is megfelelő, és a legtöbb esetben más anyaggal párhuzamosan történik) használhatja:

• (váladék az urogenitális traktusból);
• A szájüreg, a kötőhártya, a nasopharynx, a genitális traktus nyálkahártyájának kaparása (nőknél a méhnyakból és a hüvelyből, férfiaknál a húgycsőből);
• Nyál;
• Sperma;
• Prosztatalé;
• Placentaszövet és magzatvíz (magzatvíz);
• Vizelet üledék (centrifugálás után), például bizonyos STI-k és Mycobacterium tuberculosis kimutatására;
• Köpet és pleurális folyadék ugyanarra a célra;
• Váladékok;
• A cerebrospinális folyadék, ha a központi idegrendszer fertőzésének gyanúja merül fel;
• Biopsziás anyag (bioptat) a májból, nyombélből, gyomorból stb.

A fentiekhez szeretném hozzátenni, hogy minden esetben lesz elegendő anyag a vizsgálathoz, még kaparékban, váladékban is, hiszen a PCR-el végzett vizsgálat nem igényel nagy mennyiséget, elég néhány mikroliter az elemzéshez, amit általában vesznek. egy Eppendorf mikrocsőbe és vizsgálatra küldjük.

Betegségek és a PCR alkalmazása

HIV és polimeráz láncreakció

Általában anonim vizsgálat alkalmával, pozitív immunblot eredmény esetén a diagnózist újra megismétlik. Ha a diagnózis megerősítést nyer, a beteg további vizsgálatokat ír elő:

1. A CD 4 limfociták (immunkompetens sejtek - T-helperek vagy helperek) abszolút értékének meghatározása immunológiai reakciókkal, amelyeket a fertőzés először érint, majd elveszítik alapvető tulajdonságaikat, és nem tudnak különbséget tenni az „én” között. és „külföldi”. Összetévesztik a vérplazmában keringő vírus RNS-t a normál testsejtekkel, és nem reagálnak rájuk;
2. A vírus RNS kimutatása PCR-rel és a vírusrészecskék koncentrációjának kiszámítása a kóros folyamat stádiumának, súlyosságának és prognózisának megállapítása érdekében ezen adatok alapján. Természetesen a „norma” szó ebben a tekintetben nem létezik, mivel a reakció mindig pozitív, és a digitális értékek megfejtése az orvos hatáskörébe tartozik.

PCR és hepatitis

A PCR módszerrel kimutathatók a kórokozók, leggyakrabban a más módszerekkel nehezen kimutatható hepatitis C diagnosztizálására szolgál.

A hepatitis C vírus (RNS-tartalmú) az emberi szervezetben mutatott viselkedésében hasonlít a HIV-re. A májsejtek (hepatociták) genomjába beékelve ott is várakozik a szárnyakban, ami legalább 2 év, de akár 20 év múlva is megérkezhet, ezért az orvosok a „szelíd gyilkos” becenevet kapták. A hepatitis C rosszindulatú folyamat kialakulásához vezet a máj parenchymában, amely a későbbi szakaszokban nyilvánul meg. Az immunrendszer nem veszi észre ezeket az eseményeket, összetéveszti a vírust egy hepatocitával. Igaz, bizonyos mennyiségben a vírus elleni antitestek termelődnek, de nem adnak megfelelő immunválaszt. A hepatitis C diagnosztizálására az ELISA nem túl informatív, mivel azt jelzi, hogy a vírus nyomokat hagyott maga után, de nem tudni, hogy magától elmúlt-e. A HCV esetében ismertek az öngyógyító esetek, miközben a vírus elleni antitestek megmaradnak és keringenek egy életen át (immunológiai memória). A PCR észrevehetően megelőzi az antitestek képződését, és 1-1,5 héten belül képes kimutatni a vírusrészecskét, míg az antitestek 2 hónap és hat hónap közötti intervallumban jelenhetnek meg

A PCR diagnosztika az emberi szervezetben burjánzó hepatitis C vírus gyanúja esetén a legoptimálisabb kutatási módszer, mert csak ez tudja felismerni a „szelíd ellenség” jelenlétét a beteg vérében vagy májbiopsziájában.

Néha azonban vannak olyan esetek, amikor az antitestek pozitívak, de a PCR eredménye negatív. Ez néha megtörténik, amikor a vírus mennyisége nagyon alacsony, vagy amikor „alvó” állapotban van a májban anélkül, hogy bejutna a véráramba. Annak érdekében, hogy mégis megtalálja az igazságot, a páciensnek egy második, vagy akár több vizsgálatot is végez.

Humán papillomavírus fertőzés

Ha az öngyógyulás nem következik be, akkor anélkül, hogy bármi módon megmutatkozna, hosszú ideig fennmaradhat a tulajdonos testében, aki nem is sejti, mivel nem történt PCR, és nem voltak tünetek. a betegség. A papillomavírus-fertőzés jelenléte azonban, bár látens, korántsem közömbös az emberi egészség szempontjából, ahol a rákot okozó vírusok bizonyos típusai (16., 18. típus) különös veszélyt jelentenek.

Gyakrabban a lakosság női fele szenved HPV-ben, mivel a vírus a női nemi szervek területét, és különösen a méhnyakot preferálja, ahol bizonyos vírustípusok hozzájárulnak a diszpláziás folyamatok kialakulásához, majd a méhnyakrák kialakulásához, ha a diszpláziát nem kezelik. és a vírus szabad utat kap. Tehát a polimeráz láncreakció észleli a vírus DNS-ét, majd jelzi, hogy a nő szervezetében megtelepedett a „rossz” vagy „jó” (onkogén vagy nem onkogén) típus.

Egyéb STI-k és TORCH-fertőzések

Nyilvánvaló, hogy a polimeráz láncreakció bármilyen idegen nukleinsavból álló struktúrát találhat, így ez a teszt minden STD és TORCH fertőzés azonosítására alkalmas, azonban nem mindig alkalmazzák. Miért kell mondjuk ilyen drága vizsgálatokat végezni a gonokokusz kimutatására, ha vannak elérhetőbbek és olcsóbbak?

A TORCH fertőzések és az STI-k annyira összefüggenek egymással, hogy néha nehéz meghatározni, hogy egy adott kórokozót melyik csoportba kell besorolni. Általában nehéz lehet megérteni őket, mivel ezek meglehetősen változatos mikroorganizmuscsoportok, amelyek szexuális úton mindig vagy csak bizonyos körülmények között terjedhetnek (immunhiány), és csak a terhesség alatt lehetnek érdekesek, az esetleges negatív hatás miatt. lefolyása és a magzaton.

A PCR a rejtett fertőzések kimutatásának fő módszere

A klinikai megnyilvánulások kialakulásának alapja a különböző kórokozók, amelyek csak PCR-rel mutathatók ki, ami annak fő feladata, esetenként ELISA-val együtt, máskor pedig mint az egyetlen megerősítő vizsgálat, különösen, ha nincsenek a betegség tünetei. Ilyen nehéz helyzetet teremthet egy polimikrobiális fertőzés, amely a nyilvánvaló kórokozók mellett opportunista kórokozókat is tartalmaz.

Az ureaplazmát gyakran a mikoplazmával együtt tekintik.És ez nem ok nélkül. Ezek a fajok, akárcsak a chlamydia, sem nem vírusok, sem nem baktériumok, a sejtek belsejében élnek, és az STI-k közé sorolják őket, bár jelenlétük egészséges szervezetben sem ritka. Tehát az egészséges hordozó és a beteg ember megkülönböztetéséhez speciális módszerekre van szükség, ahol a PCR-t a legmegbízhatóbbnak tekintik, mivel e mikroorganizmusok szerkezeti jellemzői és viselkedése miatt más vizsgálatok nem hatékonyak.

Ami az (1., 2. típusú) és a szintén a herpeszvírusokhoz tartozó (5. típusú) vírusokat illeti, itt is kétértelmű a helyzet. A világ népességének fertőzöttsége megközelíti a 100%-ot, ezért ebben az esetben nagyon fontos a vírus azonosítása és annak dózisa, ami különösen a terhesség alatt játszik szerepet, hiszen egy felnőtt ember számára a szervezetében gyökeret verő vírus. gyakran nem okoz gondot és nem ad betegségre utaló jeleket.

Ezért nem szabad figyelmen kívül hagyni az orvos által előírt ilyen vizsgálatot, mert bizonyos esetekben a polimeráz láncreakció a laboratóriumi diagnosztika kötelező és szükséges módszere, amely nemcsak egy nőt, hanem egy kicsi, meg nem született személyt is megvédhet a súlyos szövődményektől.

Végezetül szeretném megjegyezni, hogy egy ilyen csodálatos módszer, mint a PCR, több mint 30 éve szolgálja az emberiséget. Ugyanakkor a vizsgálat céljai nem korlátozódnak a fertőző betegségek kórokozóinak felkutatására. A molekuláris biológia alapján megszületett polimeráz láncreakció elválaszthatatlanul összefügg a genetikával, sikeresen alkalmazzák a törvényszéki személyazonosításra, az igazságügyi orvostanban az apaság megállapítására, az állatorvoslásban, ha az állatklinikának van lehetősége drága berendezések beszerzésére, valamint egyéb területeken (ipar, mezőgazdaság stb.).

Videó: PCR - lényeg és alkalmazás