Ang mga posibilidad ng paggamit ng isang pag-aaral ng bacteriological para sa mga sakit sa mata ay limitado sa pamamagitan ng pagkakaroon ng isang pathological focus. Kapag inilalagay ito sa posterior segment ng mata, madalas na napakahirap makakuha ng materyal para sa pananaliksik at ang posibilidad ng diagnosis ng bacteriological sa mga naturang kaso, siyempre, hindi kasama. Ang pangunahing larangan ng aplikasyon ng bacteriological diagnostics sa ophthalmic practice ay mga sakit ng panlabas na bahagi ng mata, pati na rin ang pagtagos ng mga sugat, kung saan ang materyal para sa pananaliksik ay maaaring makuha sa panahon ng kirurhiko paggamot ng isang sugat o kapag nag-aalis ng isang dayuhang katawan. Sa pangkalahatan, dapat tandaan na sa mga interbensyon ng kirurhiko ang hanay ng mga pagkakataon para sa pagkuha ng bacteriological na materyal ay makabuluhang pinalawak.

Pagkuha ng materyal para sa pananaliksik

Upang makakuha ng materyal mula sa sacunc ng conjunctival, gumamit ng isang platinum loop (sa kawalan nito, maaari kang gumamit ng isang loop na gawa sa filament ng isang spiral electric stove, o isa pang tool (isang baso na rod, spatula, atbp.), Na paunang-isterilisado sa pamamagitan ng pagkalkula sa isang siga ng isang burner ng alkohol. , na may isang cooled loop, kumuha sila ng isang bukol ng conjunctival discharge mula sa lalim ng mas mababang vault, habang iniiwasan ang pagpindot sa loop sa balat at mga gilid ng mga eyelid upang hindi ipakilala ang extraneous microflora sa materyal Maipapayo na kunin ang materyal bago ang paggamot at sa umaga, kapag ang paglabas ay mas sagana. Sa kawalan ng uhog at pus (halimbawa, kapag sinusuri ang isang malusog na conjunctiva bago ang operasyon), dapat mong gamitin ang luha ng luha o bahagyang mag-scrape sa ibabaw ng nag-uugnay na lamad (ayon kay Lindner). mas mainam na ilapat ang diskarteng Elynnig sa mga ganitong kaso: magsingit ng isang patak ng sterile physiological saline o sabaw sa conjunctival sac mula sa isang Pasteur pipette at pagsuso sa pagbagsak na ito pagkatapos ng ilang segundo.

Para sa pareho pangkalahatang mga panuntunan  makatanggap ng materyal mula sa lacrimal sac, pinipiga ang mga nilalaman nito, at mula sa gilid ng takipmata na may ulcerative blepharitis, na tinatanggal na dati ang crust mula sa ulser.

Kinakailangan ang mahusay na pag-aalaga kapag kumukuha ng materyal mula sa kornea, lalo na sa pagkakaroon ng isang gumagapang na ulser ng corneal. Ang loop (o iba pang mga blunt instrumento) ay dapat na idirekta nang diretso sa ibabaw ng ulser at kumuha ng materyal mula sa mga progresibong gilid nito. Nangangailangan ito ng kawalan ng pakiramdam (3 patak ng 1% dicain) at pag-aayos ng eyeball.

Bilang isang materyal para sa pananaliksik sa pagtagos ng mga sugat ng mata, maaari kang gumamit ng isang nababawas na sugat (kung mayroon man), makuha ito gamit ang isang loop o swab na swab, pagbutas ng anterior chamber o kinuha banyagang katawan, na nakalagay sa isang sterile tube na may 1-2 ml ng asin. Matapos alog ang mga tubo, ginagamit ang solusyon para sa pananaliksik.

Mula sa panloob na silid, ang materyal ng pananaliksik ay maaaring makuha mula sa isang tool sa pagputol sa panahon ng paracentesis o sa pamamagitan ng pagbutas. Matapos ang kawalan ng pakiramdam ng kornea (3 patak ng isang 1% na solusyon ng dicaine) at ang pag-aayos ng eyeball, isang karayom \u200b\u200bng syringe ay isinalong nang hiwa sa limb, na ipinasok sa anterior chamber (maingat, huwag masaktan ang iris at lens capsule!) At 0.3 ml ng mga nilalaman ng anterior kamara ay naisasabik.

Sa endophthalmitis, maaaring may pangangailangan para sa pagkuha ng materyal mula sa vitreous. Ang bulag ng eyeball ay isinasagawa pagkatapos ng anesthesia (1 ml ng isang 2% na solusyon ng novocaine sa ilalim ng conjunctiva) na may isang matalim at malawak na sapat na karayom \u200b\u200bng lumen na iniksyon na mas malapit sa ekwador. Ang 0.3-0.5 ml ng mga nilalaman ng intraocular ay naisasabik.

Ang nagresultang materyal ay pinag-aralan upang matukoy ang microbe at matukoy ang uri nito (diagnosis ng microbiological). Maaaring pag-aralan ang materyal:

1. sa isang slide slide (paraan ng bacterioscopic);
2. sa mga pananim (aktwal na pamamaraan ng bacteriological);
3. sa isang hayop na eksperimento (biological na pamamaraan).

Paraan ng bakterya

maaaring magamit sa mga kondisyon ng anumang ospital sa mata sa pagkakaroon ng simpleng kagamitan sa laboratoryo at ilang mga reagents.

Upang gawin ito, dapat ay mayroon kang sumusunod:

1. metal loop;
2. ang mga malinis na slide ng baso (sa isang malinis na baso, isang patak ng tubig ay kumakalat, ngunit hindi kumuha ng isang spherical na hugis);
3. isang tray na may mga nakatayo para sa mga slide (glass rods o makapal na tanso na tanso);
4. distilled water;
5. alkohol
6. sipit;
7. filter ng papel;
8. ang solusyon ni Lugol (yodo 1 g, potassium yodo 2 g, distilled water 300 ml);
9. mga solusyon sa pintura (mas mabuti sa mga bote na sarado na may mga pipette na may mga lata ng goma).

Para sa paglilinis, ang mga bagong baso ay pinakuluan sa isang 1% na solusyon sa soda (maaaring magamit ang abo), at pagkatapos ay hugasan ng tubig, mahina na hydrochloric acid at muli gamit ang tubig. Ang mga ginamit na baso ay inilalagay para sa 1-2 oras sa sulpuriko acid, pagkatapos nito ay pinakuluang sa isang solusyon ng soda, hugasan ng tubig at ibinaba sa 96 ° alkohol. Ang mga salamin ay naka-imbak alinman sa alkohol o, pagkatapos na punasan ang alkohol, tuyo, sa mga garapon na may isang pagtigil sa lupa.

Ang pinaka-karaniwang mga pintura: Tsilya carbolic fuchsin (pangunahing fuchsin 1 g, mala-kristal na karbohidrat 5 g, alkohol 96 ° 10 ml, gliserol - ilang patak, distilled water 100 ml). Para sa paglamlam, fuchsin Zilia ay karaniwang natutunaw na may distilled water 10 beses (diluted, o may tubig na fuchsin). Asul na Methylene (methylene asul 10 g, alkohol 96 ° 100 ml). Mula dito, ang Leffler alkalina asul ay handa (solusyon sa alkohol ng asul na 30 ml, 1% potasa o sodium alkali 1 ml, distilled water 100 ml). Carbolic gentian violet (inihanda sa parehong paraan tulad ng karamikong fuchsin ni Tsil).

Ang mga mikrobyo ay pinag-aralan alinman sa pamumuhay (mga pamamaraan ng "durog" at "pabitin" na patak), o pinatay (sa isang stain na paghahanda). Ang isang live na pag-aaral higit sa lahat ay nagpapakita ng kakayahan ng mga microbes upang aktibong ilipat, habang ang mga stain na paghahanda ay nagbibigay-daan sa isang mahusay na pag-aaral ng kanilang morpolohiya.

May mga simpleng pamamaraan ng paglamlam, kung ang isang pintura ay karaniwang ginagamit, at kumplikadong mga pamamaraan ng paglamlam na nagpapakita ng ilang mga tampok ng istrukturang physicochemical ng microbial cell at samakatuwid ay may halaga ng diagnostic na kaugalian.

Ang pamamaraan para sa paghahanda ng mga stain na paghahanda ay ang mga sumusunod. Ang materyal ay inilalapat sa isang malinis na slide ng salamin at pantay na ipinamamahagi sa ibabaw sa anyo ng isang bilog o hugis-itlog. Ang smear ay dapat na manipis na sapat. Sa pagkakaroon ng makapal na pus, ang isang patak ng distilled water ay dapat na unang mailapat sa glass slide at ang materyal na halo-halong sa pagbagsak na ito. Ang smear ay tuyo sa hangin. Ang baso na may tuyo na paghahanda ay kinuha baligtad sa hinlalaki at hintuturo at naayos sa pamamagitan ng tatlong-tiklop na pagdaan sa apoy ng isang burner ng alkohol (sa hangganan ng ilaw at madilim na bahagi nito). Sa sapat na pag-aayos, nadarama ang isang bahagyang nasusunog na pandamdam sa mga daliri. Ang nakapirming smear ay namantsahan. Maraming mga paghahanda ang inihanda, hindi bababa sa dalawa, ang isa sa mga ito ay namantsahan sa isang simpleng paraan (Leffler methylene blue, diluted fuchsin Tsilya), ang iba pa - ayon sa pamamaraan ng Gram.

Paglamlam sa Leffler:

1. maglagay ng isang piraso ng filter na papel sa pahid at ibuhos ang asul na solusyon ni Leffler sa loob ng 3-5 minuto;
2. ang gamot ay hugasan ng distilled water at tuyo.

Paglamlam ng Gram:

1. maglagay ng isang piraso ng filter na papel sa smear, na kung saan ang isang gentian violet solution ay ibinuhos sa loob ng 1-2 minuto;
2. ang pintura ay ibinuhos, isang piraso ng papel ay tinanggal, at nang walang paghuhugas ng tubig, ang gamot ay ibinuhos sa isang solusyon ng Lugolev sa loob ng 1 minuto; habang ang smear ay nagiging itim;
3. ang solusyon ng Lugolevsky ay pinatuyo at ang smear ay nadiskubre ng alkohol (ito ay mas mahusay sa pamamagitan ng paglubog ng gamot sa isang baso na may alkohol hanggang sa ang mga daloy ng violet ay tumigil sa pag-agos);
4. hugasan nang lubusan ng tubig;
5. ibuhos ang pahid na may diluted fuchsin sa loob ng 1-2 minuto;
6. pintura ay pinatuyo, ang paghahanda ay hugasan ng tubig at tuyo.

Ang isang maginhawang pamamaraan ng Gram sa pagbabago ng Sinev, na iminungkahi gamit ang mga pre-handa na piraso ng filter paper, pinapagbinhi ng isang solusyon ng gentian violet at tuyo. Ang 2-3 patak ng tubig ay paunang inilalapat sa pahid at pagkatapos ay ilagay ang mga piraso ng papel na ito. Pagkatapos ay magpatuloy tulad ng inilarawan sa itaas.

Ang mikroskopyo ng mga smear ay ginaganap gamit ang isang lente ng paglulubog. Kapag nasaksihan ayon kay Leffler, ang lahat ng mga microbes ay pininturahan ng asul; kapag may mantsa ayon kay Gram - alinman sa asul-violet (gramo-positibong mikrobyo), o sa pula (gramo-negatibong microbes).

Ang isang limitadong bilang ng mga mikrobyo na kasangkot sa mga sakit sa panlabas na bahagi ng mata, at ang kanilang katangian na mga palatandaan ng morphological, ay madalas na ginagawang posible ang tamang pagsusuri ng microbiological gamit ang pagsusuri ng bacterioscopic lamang.

Paraan ng Bacteriological

nagiging kinakailangan sa mga kaso kung ang pag-aaral sa mga smear ay hindi sapat upang maitaguyod ang uri ng microbe o may pangangailangan upang matukoy ang sensitivity ng napiling pathogen sa mga gamot na antibacterial.

Ang pagpapadala para sa isang detalyadong kakilala sa pamamaraan ng bacteriological sa mga espesyal na manual sa microbiology, nakatira kami dito lamang sa mga prinsipyo ng pamamaraang ito. Ang unang yugto ng trabaho ay ang paghiwalayin ang ilang mga uri ng microbes, i.e., upang makakuha ng purong kultura. Upang magawa ito, gumamit ng mechanical uncoupling ng materyal sa panahon ng paghahasik at sa paggamit ng media na pinaka-angkop para sa pagbuo ng putative pathogens (elective media). Sa pamamagitan ng pagpapatuloy ng mga indibidwal na kolonya na lumago sa medium, nakuha ang isang purong kultura, na napagmasdan sa ilalim ng isang mikroskopyo (inihanda ang mga smear) at inililipat sa kaugalian na diagnostic media upang pag-aralan ang mga biochemical na katangian ng pathogen.

Ang mataas na hinihingi sa karamihan ng mga microbes na pathogen sa mata sa ilalim ng mga kondisyon ng paglilinang ay humantong sa pangunahing paggamit ng pumipili media na naglalaman ng katutubong protina para sa kanilang paghihiwalay. Tulad nito, halimbawa, ang Elschnig medium (isang bahagi ng kabayo serum o ascitic fluid at dalawang bahagi ng sabaw), nakatiklop na Leffler serum (tatlong bahagi ng suwero at isang bahagi ng sabaw na may 1% peptone, 0.5% NaCl at 1% grape sugar), dugo agar Leventhal (agar at 5-10% defibrined na dugo).

Tulad ng para sa pagtukoy ng pagiging sensitibo ng microbes sa mga antibiotics, ang pinakasimpleng paraan upang matukoy ito ay ang paggamit ng mga filter na papel ng disk na espesyal na ginawa ng industriya, pinapagbinhi ng mga antibiotic solution at natuyo sa vacuum. Ang materyal para sa pag-aaral (pus, pagbutas, nakuha na banyagang katawan) ay inilalagay sa isang sterile tube na may physiological saline (1.5-2 ml). Matapos ang pag-ilog, ang likido ay ibinuhos sa mga pinggan ng Petri, mas mabuti sa dalawa - isa na may asukal, ang iba pang may dugo agar - at pantay na ipinamamahagi sa ibabaw ng daluyan sa pamamagitan ng pag-ungol. Pagkatapos, ang mga disc na may iba't ibang mga antibiotics ay inilalagay sa ibabaw ng agar sa layo na 2 cm mula sa bawat isa at mula sa gilid ng mga tasa. Ang mga tasa ay inilalagay sa isang termostat (37 °) at sa susunod na araw, ayon sa sukat ng zone ng pag-iwas sa paglago sa paligid ng mga disc, ang antas ng pagiging sensitibo ng microbe sa nasubok na antibiotics ay hinuhusgahan. Ang kawalan ng zone ng pag-iwas sa paglago ay nagpapahiwatig ng isang pagkasensitibo ng microbe sa antibiotic na ito.

Paraan ng biyolohikal

sa pagsasagawa ng mata, ginagamit lamang ito sa mga kaso kung saan, na may mahirap na pagsusuri, ang ari-arian ng toxigenic ay maaaring maging mapagpasya sa pagtukoy ng uri ng microbe (halimbawa, sa diagnosis ng pagkakaiba ng diphtheria bacillus at xerosis bacillus).

Ang diagnosis ng laboratoryo ng mga sakit na viral sa mata

Sa kasalukuyan, ang isang espesyal na pag-aaral ng mga virus, kabilang ang trachoma virus (Fig. 77), ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagsamba sa kanila sa mga kultura ng tisyu (embryo ng manok, ascites carcinoma ng mouse, atbp.) At electron microscopy.

Fig. 77. Mga pagsasama sa cellular sa trachoma.

Sa klinikal na kasanayan, para sa diagnosis ng trachoma, ang paraan ng pag-aaral ng cytological ng conjunctival scraping para sa pagkakaroon o kawalan ng Taurus (inclusions) Provachek - Halberstedter ay ginagamit. Upang magawa ito, ang takip ng epithelial na takip (walang dugo) ay nawala sa isang blunt scalpel o sa gilid ng isang salamin na slide, na inilalapat sa isang manipis na layer sa isang slide slide, pinatuyo sa hangin ng 5 minuto at naayos sa isang baso na may methyl alkohol o pinaghalong Nikiforov sa loob ng 15-20 minuto ( etil eter at ganap na alkohol sa pantay na halaga). Ang pangulay ay isinasagawa sa loob ng 3-4 na oras na may isang bagong inihanda na solusyon sa pintura ng Romanovsky-Giemsa (batay sa isang patak ng pintura bawat 1 ml ng distilled water). Pagkatapos ang gamot ay hugasan ng daloy ng tubig, tuyo sa hangin at sinuri sa ilalim ng isang mikroskopyo. Sa kasong ito, ang nuclei ng mga cell ng epithelial ay lumilitaw na kulay rosas, protoplasm - sa murang asul, mga pagbubuo - sa asul, asul-kulay-lila na kulay (Fig. 77). Ang huli ay kinakatawan sa anyo ng mga pormasyong cocciform na matatagpuan sa gitna ng pinong butil na masa, at kinikilala bilang mga tagadala ng virus ng trachomatous. Mas madalas silang matatagpuan sa mga sariwang kaso ng hindi naalis na trachoma, ngunit maaari ring mangyari sa paratrachomic conjunctivitis.

Ang mga nagdaang pag-aaral ay nagsiwalat ng isang bagong anyo ng nakakahawang sakit sa mata sa mata - epidemya keratoconjunctivitis, at isang pag-aaral ng siktolohikal na pag-scrap ng conjunctival na may sakit na ito ay nagsiwalat ng mga kakaibang mga pagkakasulat sa mga epithelial cells na ganap na naiiba sa mga katawan ng Prsvachek (B.L. Polyak, N.V. Ploshinskaya).

26. Isang pamamaraan ng bacteriological para sa diagnosis ng mga nakakahawang sakit.

Ang pamamaraan ng bacteriological ay binubuo sa paghiwalay ng isang purong kultura ng pathogen (isang populasyon na naglalaman ng bakterya ng parehong species) at ang pagkilala sa pathogen na ito ay ang pangunahing pamamaraan ng pagsasaliksik ng bacteriological

Ang pag-aaral ng mga katangian ng mga microorganism sa isang laboratoryo na bacteriological upang maitaguyod na kabilang sa isang partikular na sistematikong pangkat (species, genus) ay tinatawag na kanilang pagkilala.

Sa pangkalahatan, ang pamamaraan ng pananaliksik na bacteriological ay isang pag-aaral na may maraming yugto, na tumatagal ng 18-24 na oras.

Gamit ang bacteriological na pamamaraan, ang mga anaerobic kultura ay inilalagay sa anaerostat. Ang hangin ay tinanggal mula sa lobo at pinalitan ng isang halo ng gas na hindi naglalaman ng oxygen.

Ang batayan ng pamamaraang bacteriological ay ang paglalaan ng isang dalisay na kultura ng pathogen, na nangyayari sa unang yugto ng pag-aaral. Upang i-highlight ang isang dalisay na kultura ng pathogen, ang paghahasik ng kinuha na materyal ay tapos na. Ang paghahasik ay tapos na, bilang isang patakaran, sa solidong nakapagpapalusog na media, na napili batay sa mga katangian ng inilaan na pathogen.

Kailanman posible, ang pamamaraan ng bacteriological ay gumagamit ng media kung saan lumalaki lamang ang isang tiyak na uri ng bakterya - elective media, o media na maaaring makilala ang putative pathogen mula sa iba pang mga microorganism, o di-pagkakaiba-iba ang diagnostic media.

Sa pamamaraan ng bacteriological, ang materyal ay inihasik sa nutrisyon ng media alinman sa isang baso o metal spatula, o may isang bakterya na loop upang ang mga bakterya sa materyal na pagsubok ay nakakalat sa ibabaw ng daluyan ng nutrisyon. Bilang resulta ng gayong pagpapakalat, ang bawat selula ng bakterya ay pumapasok sa sarili nitong lugar ng daluyan.

Kung sakaling, bilang isang resulta ng pamamaraan ng pagsasaliksik ng bacteriological, ang isang maliit na halaga ng pathogen ay ipinapalagay sa pagsubok na materyal, ang paghahasik ay isinasagawa sa isang likidong nutrient medium para sa akumulasyon, ang tinatawag na medium na pagpapayaman, na pinakamainam para sa isang naibigay na microorganism. Pagkatapos ay isakatuparan ang paglipat mula sa isang likidong nutrient medium sa solidong media na nabubo sa mga pinggan ng Petri. Ang daluyong naihasik kasama ang pathogen ay inilalagay sa isang termostat, karaniwang sa isang tiyak na temperatura, na mahalaga para sa pamamaraan ng bacteriological.

Sa ikalawang yugto ng pamamaraan ng pagsasaliksik ng bacteriological, ang mga kolonya ng bakterya na lumago sa isang solidong nutrient medium at nagmula mula sa isang selula ng bakterya ay pinag-aralan. (Ang kolonya ay isang purong kultura ng pathogen). Ang isang mikroskopiko at macroscopic na pagsusuri ng mga kolonya ay isinasagawa sa makikita at ipinadala na ilaw: kasama ang hubad na mata, sa ilalim ng isang maliit na kadahilanan ng mikroskopyo, gamit ang isang magnifier.

Ang mga katangian ng kultura ng mga kolonya ay nabanggit: ang kanilang hugis, laki, kulay, likas na katangian ng mga gilid at ibabaw, istraktura, texture. Susunod, para sa paghahanda ng mga smear, ginagamit ang isang bahagi ng bawat isa sa itinalagang mga kolonya. Ang mga gram smear ay namantsahan, mikroskopiko, tinutukoy ang tinctorial (may kaugnayan sa kulay) at mga katangian ng morphological ng napiling kultura at sa parehong oras na suriin ang kadalisayan nito.

Ang natitirang bahagi ng kolonya ay subcultured sa mga tubo ng pagsubok na may pinakamainam na daluyan para sa species na ito, halimbawa, beveled agar, upang makaipon ng isang purong kultura para sa isang mas kumpletong pag-aaral. Ang mga tubo ng pagsubok ay inililipat para sa 18-24 na oras sa isang termostat. Sa pangalawang yugto, bilang karagdagan sa mga pag-aaral sa itaas, ang bilang ng mga kolonya na lumago ay madalas na binibilang.

Upang maisagawa ang ganoong pag-aaral, ang mga sunud-sunod na mga panlabas ng materyal na pinag-aralan ay inihanda, mula sa kung saan sila ay inihasik sa mga plato na may daluyan ng nutrisyon, ang bilang ng mga lumalaking kolonya ay kinakalkula, pinarami ng pagbabanto, mula kung saan natutukoy ang nilalaman ng microorganism sa materyal.

Ang pagkilala sa nakahiwalay na purong kultura ng pathogen at ang pagpapasiya para sa kulturang ito ng pagiging sensitibo sa mga antibiotics at iba pang mga gamot na chemotherapeutic ay ang pangatlong yugto ng pamamaraang bacteriological. Ang pagkilala sa napiling kultura ng bakterya ay isinasagawa ng tinctorial, morphological, biochemical, cultural, toxigenic, antigenic properties.

Ang unang hakbang ay ang pagkuha ng isang smear mula sa isang kultura na lumago sa agaring, suriin ang morpolohiya ng bakterya at suriin ang kadalisayan ng kultura ng lumalaking bakterya. Pagkatapos ay isagawa ang paghahasik ng napiling dalisay na kultura ng bakterya sa daluyan ng Giss. Maipapayo na maghasik sa ibang media upang matukoy ang mga katangian ng biochemical.

Ang paggamit ng isang reaksyon ng pagkakalong sa lason na may isang antitoxin sa vivo o sa vitro, ang pormasyon ng microbial toxin ay natutukoy. Sa ilang mga kaso, ang iba pang mga kadahilanan ng birtud ay pinag-aaralan din. Ang mga pag-aaral sa itaas, na isinasagawa sa isang laboratoryo ng bacteriological, ay nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang genus o uri ng pathogen.

Ang pamamaraan ng papel disc ay batay sa pagkilala sa zone ng pagsugpo ng pag-aanak ng mga bakterya sa paligid ng mga disc na puspos ng mga antibiotics. Sa kaso ng pag-aaplay ng serial na paraan ng pagbabanto, isang paghahanda ng kemikal - isang antibiotiko na may isang likidong nutrisyon na daluyan ay natunaw sa mga tubo ng pagsubok, pagkatapos kung saan ang parehong dami ng bakterya ay nahasik sa mga tubo. Sa pamamagitan ng kawalan o pagkakaroon ng paglaki ng bakterya, naitala ang mga resulta. Bilang isang resulta ng paraan ng pagsasaliksik ng bacteriological para sa pagtukoy ng pagkakakilanlan ng mga galaw, ang nagresultang antibioticogram ay maaari ding maglingkod sa mga layuning epidemiological.

Ang paulit-ulit na pag-aaral ay maaaring isagawa sa kaso ng pagkilala sa karwahe ng bakterya, dahil ang pathogen ay maaaring hindi napansin sa isang bahagi ng materyal.

ARALIN № 4

PAKSA:  PHYSIOLOGY NG MICROORGANISMS. BACTERIOLOGICAL (CULTURAL) METHOD NG PANANALIKSIK. BIOCHEMICAL PROPERTIES NG MICROORGANISMS.

LISTO NG KONTROLONG TANONG

Nutrisyon ng bakterya. Ang mga nutrisyon ay pinagmumulan ng carbon at nitrogen. Pag-uuri ng bakterya sa pamamagitan ng uri ng nutrisyon Autotrophs at chemoorganotrophs

Mga kadahilanan ng paglago at ang kanilang mga mapagkukunan. Mga mapagkukunan ng mga elemento ng mineral.

Mga pamamaraan at mekanismo para sa paglipat ng mga sustansya sa pamamagitan ng lamad.

Kailangan ng enerhiya ng bakterya. Mga paraan ng pagkuha ng enerhiya mula sa autotrophs (potosintesis, chemosynthesis). Mga mapagkukunan at paraan ng pagkuha ng enerhiya mula sa mga chemorganotrophs.

Aerobic at anaerobic na uri ng biological oksihenasyon sa bakterya. Aerobic, anaerobic, opsyonal na anaerobic at microaerophilic bacteria. Mga paraan upang lumikha ng mga anaerobic na kondisyon.

Mga gawain, yugto, pakinabang at kawalan ng paraan ng pagsasaliksik ng bacteriological (kultural).

Ang paglaki at pagpaparami ng mga microorganism. Mga pamamaraan ng pagpaparami. Binary (simple) division, mekanismo. Pagpapalaganap ng populasyon ng bakterya.

Mga prinsipyo at pamamaraan para sa paglilinang ng bakterya. Ang mga pangangailangan sa nutrisyon ng mikrobyo.

Media ng kultura para sa paglilinang ng bakterya. Mga kinakailangan sa nutrisyon. Pag-uuri ng media media.

Mga kondisyon at pamamaraan para sa paglilinang ng bakterya. Ang pamamaraan ng paghahasik sa nutrient media. Mga pattern at likas na katangian ng paglaki ng bakterya sa solid at likido na nakapagpapalusog na media.

Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura ng aerobic at anaerobic bacteria.

Mga katangian na ginamit upang makilala ang mga napiling pananim.

INDEPENDENT AT LABORATORY WORK

Paraan ng Bacteriological  (mga hakbang):

1 1st yugto  paglalaan ng isang dalisay na kultura ng aerobic bacteria: A) Microscopy ng pathological na materyal.

Gram na mantsa ng mantsa. Sketch ng gamot.

Paghahasik ng materyal na pathological na may isang bacteriological loop sa lamellar meat peptone agar (MPA) upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya.

Pag-uuri ng medium medium ng kultura(ipahiwatig ang mga lugar ng aplikasyon)

  1. Pagkakaugnay:likido (karne at peptone sabaw, apdo, sabaw ng asukal), siksik (2-3% agar) at semi-likido (0.15-0.7% agar) media.

  2. Sa pamamagitan ng pinagmulan:natural -   mula sa gatas, karne. itlog, patatas, serum ng tao, hayop at iba pang mga produkto; artipisyal - 1) likas na balanseng mga halo ng mga sustansya sa mga konsentrasyon at mga kumbinasyon na kinakailangan para sa paglaki at pagpaparami ng mga microorganism, isang unibersal na mapagkukunan ng nitrogen at carbon - peptones - mga produkto ng hindi kumpletong pagkasira ng mga protina na may pepsin o iba't ibang mga hydrolysates (isda, kasein, lebadura, atbp.) gawa ng tao c  ang eksaktong kemikal na komposisyon ng Soton para sa mycobacteria, 199 para sa mga cell.

3. Sa pamamagitan ng komposisyon: simpleng media media (sabaw ng karne at peptone - MPB, karne at peptone agar - MPA) at maling (KA \u003d   MPA + 5-10% ng dugo ng hayop)

4. Sa pamamagitan ng appointment:

A) Pangkalahatang layunin   - unibersal, dinisenyo para sa paglilinang ng anumang mga microorganism   (MPA, KA)

B ) Espesyalpara sa paglilinang ng mga microorganism na hindi lumalaki sa unibersal na media, ang pagkakaiba-iba ng mga species at ang pumipili na paghihiwalay ng ilang mga uri ng mga microorganism:

pili (pumipili)   upang paghiwalayin ang ilang mga uri ng microorganism at sugpuin ang paglaki ng kaakibat - (asin agar para sa staphylococci).

kaugalian diagnostic (DDS)-mga kapaligiran na nagpapahintulot upang makilala sa pagitan ng mga species ng bakterya sa pamamagitan ng aktibidad ng enzymatic; Kasama nila nagtataglay: 1) unibersal na nutrient medium (MPA, KA); 2) isang kadahilanan ng pagkakaiba-iba - isang kemikal na substrate (halimbawa, karbohidrat), isang iba't ibang saloobin na kung saan ay isang diagnostic sign para sa isang naibigay na microbe. 3) Isang tagapagpahiwatig na ang pagbabago ng kulay ay nagpapahiwatig ng isang biochemical reaksyon. (mga kapaligiran Endo, Ploskirev, Giss at iba pa).

kaugalian na pumipili (DS) - nagpapahintulot sa mga kapaligiran magtabi bakterya ng isang tiyak na uri ayon sa kanilang mga katangian ng physiological at magkakaiba sa iba pang mga species sa pamamagitan ng aktibidad na enzymatic    Naglalaman ang mga ito: 1) MPA 2) elective    kemikal na substrate na pumipigil sa paglaki ng iba pang mga uri ng bakterya . 3) pagkakaiba-iba kadahilanan - substrate kung saan ay isang diagnostic sign para sa microbe na ito;) 4.) Ang isang tagapagpahiwatig na ang pagbabago ng kulay ay nagpapahiwatig ng isang reaksyon ng biochemical. (Ang media ng MSA para sa staphylococci, ICA para sa salmonella, Ploskireva para sa shigella at salmonella).

B) Pagpayaman kapaligiran para sa pagpaparami at pag-iipon ng mga bakterya ng isang tiyak na uri sa klinikal na materyal (dugo sa 20% na sabaw ng galon \u003d salmonella, pharynx sa 10% suwero + 2% tellurite \u003d corynebacteria.)

D) Transport media para sa koleksyon at paghahatid (pag-iingat) ng klinikal na materyal \u003d 48 oras (Amies medium - semi-likid na + aktibo na carbon).)

Media sa kultura(mga halimbawa):

Miyerkules Endo Uri ng katamtaman kaugalian diagnostic para sa enterobacteria Batayan sa nutrisyon MPA Iba't ibang kadahilanan lactose 1% Tagapagpahiwatig pangunahing fuchsin na discolored na may sodium sulfite. E.s oli   mabulok ang lactose sa acid -colony na pula na may metal na sheen, walang pathogen na walang kulay;

Salt agar Uri ng katamtaman pili para sa paghihiwalay ng staphylococci Batayan sa nutrisyon MPA Elective factor sosa klorido 10%

Miyerkules Ploskireva Uri ng katamtaman kaugalian na pumipili  para sa enterobacteria

Batayan sa nutrisyon MPA Elective factor mga asin ng apdo Iba't ibang kadahilanan lactose

Tagapagpahiwatig neutral na pula

Yolk Salt Agar Uri ng katamtaman kaugalian na pumipili para sa S . aureus _

Batayan sa nutrisyon MPA  Elective factor sosa klorido 10%

Iba't ibang kadahilanan pula ng itlog

Tagapagpahiwatig hindi

2 2 yugtoparaan ng pananaliksik ng bacteriological (paghihiwalay ng purong kultura):

A) Ang pag-aaral ng mga nakahiwalay na kolonya (Escherichia, staphylococcus) sa lamellar MPA.

B) Paghahanda ng mga smear mula sa mga napiling kolonya (Gram stain).

C) Pag-aani ng mga nakahiwalay na kolonya sa slanted MPA para sa akumulasyon ng purong kultura.

3 Paghiwalay ng isang purong kultura ng anaerobic bacteria: ang paghahasik ng isang suspensyon ng lupa sa Kitta-Tarozzi medium upang ibukod ang pathogen clostridia

Ang Kitt-Tarozzi medium ay binubuo ng nutrient na sabaw, 0.5% glucose at piraso ng atay o tinadtad na karne upang sumipsip ng oxygen mula sa medium. Bago ang paghahasik, ang medium ay pinainit sa isang tubig na kumukulo ng tubig sa loob ng 20 hanggang 30 minuto upang alisin ang hangin mula sa daluyan. Pagkatapos ng paghahasik, ang nutrient medium ay agad na ibinuhos ng isang layer paraffin wax

Mga pamamaraan para sa paglikha ng anaerobiosis:

1.Pisikal paglabas ng hangin, na nagpapakilala ng isang espesyal na halo na walang oxygen na gas (mas madalas - N 2 - 85%, CO 2 - 10%, H 2 - 5%), pre-kumukulo na nutrisyon ng media, paghahasik sa isang malalim na haligi ng agar, pinupuno ang media ng likidong paraffin upang mabawasan ang suplay ng oxygen, ang paggamit ng hermetically selyadong mga vial at mga tubes ng pagsubok, syringes at mga salamin sa laboratoryo na may inert gas, ang paggamit ng mahigpit na saradong mga desicator sa isang nasusunog na kandila

2. Chemical- ginagamit ang mga scavenger ng oxygen na kemikal.

3. Biolohikal - co-paglilinang ng mahigpit na aerobes at anaerobes (ang mga aerobes ay sumisipsip ng oxygen at lumikha ng mga kondisyon para sa pagpaparami ng anaerobes - ang paraan ng Fortner).

Miyerkules Kitt - Tarozzi   ay binubuo ng nutrient na sabaw, 0.5% glucose at piraso ng atay o tinadtad na karne upang sumipsip ng oxygen mula sa medium. Bago ang paghahasik, ang medium ay pinainit sa isang tubig na kumukulo ng tubig sa loob ng 20 hanggang 30 minuto upang alisin ang hangin mula sa daluyan. Pagkatapos ng paghahasik, ang nutrient medium ay agad na ibinuhos ng isang layerparaffin wax   o likidong paraffin para sa paghihiwalay mula sa pag-access ng oxygen.

4. Hinahalo - Gumamit ng maraming magkakaibang pamamaraan.

Ang mga espesyal na aparato ay ginagamit upang lumikha ng mga anaerobic na kondisyon - anaerostats. Sa kasalukuyan, ang pinaka-simple at epektibong kagamitan para sa paglikha ng anaerobic at microaerophilic na kondisyon ay isang pamamaraan ng kemikal   na may mga espesyal na pakete na kumikilos sa prinsipyo ng pagsipsip ng oxygen sa atmospera sa hermetically selyadong lalagyan .

Wilson-Blair Miyerkules (mga tubo ng pagsubok, tasa):

Batayan sa nutrisyon MPA Panghinga substrate glucose

Pagbabawas ng kadahilanan sodium sulfite at iron dichloride sodium sulfiteNa 2 KAYA 3 → Na 2 S

Para sa daluyan ng Wilson-Blair, ang base ay agar   kasama ang karagdagan glucose , Clostridia   form sa medium na ito mga kolonya   itim dahil sa pagpapanumbalik sulpito   bago sulfide - anion na kumokonekta sa cations bakal   (II) ay nagbibigay ng isang itim na asin. Karaniwan ang itim sa daluyan ng edukasyon na ito mga kolonya lumilitaw nang malalim sa haligi ng agar .

Thioglycol medium (medium para sa control sterility): (mga tubo ng pagsubok):

Batayan sa nutrisyon BCH Panghinga substrate glucose Pagbabawas ng kadahilanan sodium thioglycolate

Tagapagpahiwatig resazurin

Zeissler dugo glucose agar: (tasa): Batayan sa nutrisyon MPA, dugo

Panghinga substrate glucose Pagbabawas ng Hemoglobin

Ang salitang "anaerobes" ay pinahiranLouis Pasteurnatuklasan noong 1861bakteryabutyric pagbuburo.

A  Panayam 3 Ang pisyolohiya ng mga microorganism. Ang metabolismo ng bakterya .

Kasama sa pisyolohiya ng mga microorganism :

mga uri ng pagkain;

mga uri ng paghinga;

paglilinang (mga kondisyon, kapaligiran, kalikasan at rate ng paglago);

aktibidad na biochemical;

pagkakaiba-iba;

ang paglabas ng mga biologically aktibong sangkap, mga toxin at iba pang mga kadahilanan ng pathogenicity;

sensitivity sa antibiotics, bacteriophages, bacteriocins;

iba pang mga biological na katangian.

Ang metabolismo ng bakterya - isang hanay ng mga proseso ng physicochemical (mga pagbabagong-anyo at reaksyon ng kemikal) na naglalayong muling pagpaparami ng mga istruktura at pagbibigay ng mga mahahalagang pag-andar ng isang microbial cell, tulad ng:

paglaki at pagpaparami;

pag-aalis ng reserbang materyal ng pagkain;

sasakyan nutrisyon  sa isang microbial cell;

ang paglalaan ng mga produktong metaboliko (mga toxin, enzymes, antibiotics at iba pang mga aktibong sangkap na biologically);

kilusan

pagbuo ng spore;

pagdirikit sa at pagtagos sa mga sensitibong receptor ng mga host cell;

iba't ibang mga adaptive na reaksyon sa mga pagbabago sa kapaligiran.

Anabolismo- isang hanay ng mga biochemical reaksyon na isinasagawa ang synthesis ng mga sangkap ng cell.

Catabolismo- Isang hanay ng mga reaksyon na nagbibigay ng enerhiya sa cell.

Ang pamamaraan para sa pag-aaral ng metabolismo - mga yugto:

1. Ang paunang (peripheral) na metabolismo - ang pagtagos ng mga sangkap sa cell mula sa labas at pagkabulok sa mga intermediate na produkto.

2. Amphibolism (pansamantalang metabolismo) - ang pagbuo ng mga intermediate na produktong metabolic na karaniwang sa catabolic at anabolic pathway.

3. Ang pangwakas, mahigpit na dalubhasang yugto ng nakabubuo na metabolismo (humantong sa pagtatayo ng mga istruktura ng cell) at metabolismo ng enerhiya (ang pagbuo ng ATP).

Ang mga mekanismo ng pagtagos ng mga sustansya sa cell:

Mga simpleng pagsasabog (para sa mga tunay na solusyon). Hindi madaling pabagu-bago ng proseso.

Pasulong na pagsasabog ("singaw sa ibaba ng agos") - sa direksyon ng gradient ng konsentrasyon sa pakikilahok ng mga protina ng carrier. Madulas na proseso.

Aktibong transportasyon - laban sa konsentrasyon at electrochemical gradient sa pakikilahok ng permeases (amino, hydroxy acid, ionic, atbp.). Ang proseso ay nagsasangkot ng paggasta ng enerhiya ng ATP, depende sa singil ng mga sangkap at kanilang pagbabago sa panahon ng transportasyon.

Ang mga mikroorganismo ayon sa kanilang kakayahang mag-assimilate ng mga mapagkukunan ng carbon ay nahahati sa dalawang grupo: autotrophs (lat. autos - aking sarili trophe - nutrisyon) synthesize ang lahat ng mga sangkap na naglalaman ng carbon mula sa CO 2 bilang nag-iisang mapagkukunan ng carbon at heterotrophs (lat. heteros - isa pa, "kumakain sa gastos ng iba") gumamit ng iba't ibang mga organikong sangkap na naglalaman ng carbon.

Nakasalalay sa mga mapagkukunan ng enerhiya, ang mga microorganism ay nahahati din sa mga phototroph (photosynthesizing), na may kakayahang gumamit ng solar na enerhiya, at chemotrophs (chemosynthesizing), na tumatanggap ng enerhiya dahil sa mga reaksyon ng redox.

Nakasalalay sa mga donor na elektron na ginamit, ang bakterya ay nahahati sa lithotrophs (gamit ang mga tulagay na donor na elektron) at mga organotroph (gamit ang mga organikong compound).

Mga Prototroph- Ang mga microorganism na may kakayahang synthesizing ang lahat ng mga organikong compound na kailangan nila mula sa mga glucose ng glucose at ammonium.

Mga Auxotroph- microorganism na hindi magagawang synthesize ang anumang mga organikong compound. Natatanggap nila ang mga compound na ito sa tapos na form mula sa kapaligiran o sa katawan ng tao.

Mga Enzim(mula sa Greek culture fermentum-starter) - lubos na tiyak na mga katalista ng protina na naroroon sa lahat ng mga buhay na selula, kung wala ang buhay at pag-aanak ay hindi posible. Kinikilala ng mga enzymes ang kanilang mga kaukulang mga metabolite (mga substrate), nakikipag-ugnay sa kanila at mapabilis ang mga reaksyon ng kemikal. Ang mga enzyme ay mga protina.

Ang komposisyon ng enzymatic ng microorganism ay natutukoy ng genome at isang medyo matatag na pag-sign. Ang kahulugan ng mga enzyme ay malawakang ginagamit para sa pagkilala sa biochemical ng mga bakterya.

Ang mga endozymes ay nagpapagal sa metabolismo na nagaganap sa loob ng cell.

Ang mga exoenzyme ay tinatago ng cell sa kapaligiran.

Konstitusyonalang mga enzyme ay patuloy na synthesized sa ilang mga konsentrasyon.

Hindi mawariang mga enzim ay mga enzyme na ang pagtaas ng konsentrasyon sa pagtanggap ng naaangkop na substrate.

Mga enzim ng pagsalakay:hyaluronidase, fibrinolysin, neuraminidase, collagenase, lecithinase (lycitovitellase), coagulase, urease, amino acid decarboxylase, deoxyribonuclease.

Paglinang- pagkuha ng mga kultura ng mga microorganism sa isang artipisyal na daluyan ng nutrisyon.

Mga layunin sa paglilinang:

pagkuha ng purong kultura ng mga pathogenic microorganism at ang kanilang pagkilala;

pag-iipon ng biomass ng mga prodyusyong biologically aktibong sangkap (mga bitamina, hormones, amino acid, antibiotics, atbp.);

pagkuha ng mga diagnostic at prophylactic na gamot (bakuna, diagnosticums);

imbakan ng mga kultura ng sangguniang museo;

sa sanitary microbiology upang matukoy ang sanitary na nagpapahiwatig ng mga microorganism - mga tagapagpahiwatig ng polusyon sa kapaligiran.

Kultura- isang populasyon ng mga microorganism na lumago sa isang daluyan ng nutrient.

Purong kultura- isang populasyon ng isang uri ng microorganism na lumago mula sa isang nakahiwalay na kolonya sa isang daluyan ng nutrisyon.

Karamihan sa mga pathogen microbes ay lumaki sa nutrient media sa temperatura na 37 ° C sa loob ng 1-2 araw.

Pag-uuri ng medium medium ng kultura

Pagkakaugnay:likido, semi-likido, siksik.

Ayon sa pinagmulan:natural (gatas, patatas), artipisyal, semi-synthetic, synthetic

Sa pamamagitan ng komposisyon:simple (MPA, MPB, gulay, gatas), kumplikado (1% glucose, 10-20% suwero ng dugo, 20-30% ascitic fluid, 5-10% defibrinated na dugo).

Sa pamamagitan ng appointment:

unibersal - mga kapaligiran na kung saan maraming uri ng bakterya ay lumago nang maayos. Kabilang dito ang sabaw ng meat-peptone (MPB) at agar-peptone agar (MPA);

espesyal - media na espesyal na inihanda para sa paglaki ng bakterya na hindi lumalaki sa unibersal na media;

pagkakaiba-iba diagnostic - mga kapaligiran na nagbibigay-daan upang makilala ang ilang mga uri ng bakterya mula sa iba sa pamamagitan ng aktibidad ng enzymatic;

pumipili - media na naglalaman ng mga sangkap na ginagamit ng mga microorganism ng ilang mga uri at pumipigil sa paglaki ng iba pang mga microorganism. Ginagawang posible ang mapiling media na piliin ang ilang mga uri ng bakterya mula sa materyal na pagsubok;

kaugalian-pumipili - media na pinagsasama ang mga katangian ng kaugalian diagnostic at pumipili media;

pagpapanatili;

pagpayaman.

Pagpapalaganap ng bakterya sa likido at solidong nakapagpapalusog na media.

Paglago coordinated reproduction ng lahat ng mga sangkap ng isang bacterial cell at isang pagtaas sa biomass nito. Pag-aanak- pagpaparami at pagtaas sa bilang ng mga cell, na humahantong sa pagbuo ng isang populasyon ng bakterya.

Ang bakterya ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang mataas na rate ng pagpaparami. Ang rate ng pag-aanak ay nakasalalay sa mga species, ang komposisyon ng daluyan ng nutrisyon, pH, temperatura, pag-average.

Sa solidong nutrient media, ang mga bakterya ay bumubuo ng mga kumpol ng mga selula na tinatawag na mga kolonya. Ang mga kolonya ng iba't ibang mga species ay naiiba sa laki, hugis, pagkakapare-pareho, kulay, likas na katangian ng mga gilid, likas na katangian ng ibabaw, transparency.

Ang pattern ng paglago sa likidong nakapagpapalusog media: pelikula (sa pamamagitan ng pagbuo ng pelikula sa ibabaw ng daluyan ng nutrient), nagkakalat ng opacification, ilalim (sediment).

Mga yugto ng pag-unlad ng populasyon ng bakterya

Paunang nakatigil na yugto (~ 1-2 oras). Ang bilang ng mga bakterya ay hindi tataas, ang mga cell ay hindi lumalaki.

Lag o pag-antala ng phase ng pagkaantala (~ 2 oras).

Phase phase - logarithmic o exponential phase (~ 3-5 oras). Ang populasyon ay nahahati sa maximum na bilis at mayroong isang pagtaas sa mga indibidwal na kadalasan.

Negatibong pagbilis ng phase (~ 2 oras). Ito ay nauugnay sa pag-ubos ng paglilimita ng metabolite o ang akumulasyon ng nakakalason na mga produktong metaboliko.

Ang nakatigil na yugto ng maximum. Ang bilang ng nabuo at namamatay na mga cell ay pareho.

Ang yugto ng pinabilis na kamatayan (~ 3 oras).

Logarithmic na yugto ng kamatayan (~ 5).

Ang yugto ng pagbawas sa rate ng kamatayan - ang natitirang mga indibidwal na nabubuhay ay pumapasok sa isang estado ng pahinga.

Enerhiya metabolismo ng bakterya

Mga Aerobes- microorganism gamit ang aerobic (oxidative) uri ng biological oksihenasyon ng mga substrates. Ang metabolismo ng aerobic ay isinasagawa lamang kung mayroong isang mataas na konsentrasyon ng libreng oxygen sa kapaligiran, na kumikilos bilang pangwakas na tumatanggap ng mga electron na kinuha mula sa substrate. Ang paglilinang ng mga aerobes ay isinasagawa sa mga kapaligiran na may ganap na pag-access sa oxygen sa atmospera.

Obligatory Anaerobes- microorganism gamit ang anaerobic na uri ng biological oksihenasyon (pagbuburo). Ang metabolismo ay isinasagawa lamang sa mga kapaligiran na may mababang potensyal na redox sa kawalan ng oxygen.

Ang isang pagtaas sa konsentrasyon ng oxygen sa medium ay humahantong sa pagkamatay ng mga vegetative form.

Ang halaga ng enerhiya na nakuha sa pagbuburo ay maliit, kaya obligadong anaerobes ay pinipilit na mag-ferment ng isang malaking halaga ng substrate.

Facilitative anaerobes- Ang mga microorganism na may kakayahang kunin ang enerhiya mula sa mga substrate ng aerobic (oksihenasyon) at anaerobic (pagbuburo) na mga landas ng biological oksihenasyon. Ang metabolismo ay maaaring isagawa pareho sa mga kondisyon ng kumpletong pag-access ng oxygen sa kapaligiran, at sa mga kondisyon ng anaerobiosis.

Mga pamamaraan para sa paglikha ng anaerobiosis

Pisikal

paghahasik sa isang haligi ng MPA ng asukal;

kumukulo (pagbabagong-buhay) ng likidong nutrienteng media na sinusundan ng isang patong ng langis;

mekanikal na pag-alis ng oxygen sa anaerostats;

kapalit ng oxygen sa pamamagitan ng isang walang malasakit na gas;

mga tubo ng Veyon-Vignal.

Chemical

aristovsky patakaran ng pamahalaan;

omelyansky kandila ( solusyon sa alkalina  pyrogallol);

ang paggamit ng mga natanggap na oxygen oxygen: glucose, pyruvic acid, sodium formate, atbp.

Biolohikal

miyerkules Kitta-Tarozzi

paraan ng fortner

Anaerobes - mga organismo na tumatanggap ng enerhiya sa kawalan ng pag-access oxygen   sa pamamagitan ng substrate posporusasyon , ang pangwakas na mga produkto ng hindi kumpletong oksihenasyon ng substrate ay maaaring ma-oxidized upang makakuha ng mas maraming enerhiya sa formATP   sa pagkakaroon ng isang panghuling tatanggap ng proton ng mga organismo na isinasagawa .

Anaerobic na paghinga- pinagsama-sama mga reaksyon ng biochemicaldumadaloy sa mga selula ng mga nabubuhay na organismo kapag gumagamit ng mga proton bilang panghuling tatanggap oxygeniba pang mga sangkap (hal. nitrates) at nauugnay sa mga proseso palitan ng enerhiya(catabolismo,pagkapukaw), na kung saan ay nailalarawan oksihenasyonkarbohidrat,lipidat amino acidsa mababang mga molekular na timbang ng timbang.

A erobic at anaerobic bacteria ay nauna nang nakilala sa isang likidong nutrient medium sa pamamagitan ng gradient ng konsentrasyon ng O2:

1. Obligasyon aerobic(nangangailangan ng oxygen) na bakterya ay nakolekta sa tuktok ng tubo upang sumipsip ng pinakamataas na halaga ng oxygen. (Pagbubukod: mycobacteria - paglaki ng pelikula sa ibabaw dahil sa wax-lipid membrane.)

2. Obligado anaerobicnagtitipon ang bakterya sa ilalim upang maiwasan ang oxygen (o maiwasan ang paglaki). 3. Opsyonal na bakteryahalos lahat sa itaas ( oxidative phosphorylationay mas kapaki-pakinabang kaysa sa glycolysis), gayunpaman, maaari silang matagpuan sa buong daluyan, dahil sila ay independiyenteng ng O 2. 4 . Microaerophilesnakolekta sa tuktok ng tubo, ngunit ang kanilang pinakamabuting kalagayan ay isang mababang konsentrasyon ng oxygen. 5. Aerotolerantang mga anaerob ay hindi tumugon sa mga konsentrasyon ng oxygen at pantay na ipinamamahagi sa buong tubo ng pagsubok.

D para sa pagsukat ng kapasidadkapaligiran M. Clarkiminungkahing gamit ang isang halaga pH20 - negatibo logarithmbahagyang presyonmapang-uyam haydrodyen. Ang saklaw ay kumikilala sa lahat ng antas ng saturation ng may tubig na solusyon na may hydrogen at oxygen. Ang mga aerobes ay lumalaki sa mas mataas na potensyal, anaerobes ng facultative, at obligado ang mga pinakamababa.)

Pag-uuri ng Anaerobesmakilala sa pagitan ng:

Facilitative anaerobes

Mga kapneist anaerobes at microaerophiles

Aerotolerant Anaerobes

Moderately malubhang anaerobes

Obligatory Anaerobes

Kung ang katawan ay maaaring lumipat mula sa isang metabolic pathway sa isa pa (halimbawa, mula sa anaerobic na paghinga hanggang aerobicat kabaligtaran), kung gayon ito ay kondisyon na tinutukoy bilang mga anaerob ng facultative .

Hanggang sa 1991, ang isang klase ng capneistic anaerobes ay kinakailangan sa microbiology, na nangangailangan ng isang mababang konsentrasyon oxygenat nadagdagan ang konsentrasyon ng carbon dioxide (Brucella bovine type - B. abortus)

Ito ang pangunahing pamamaraan na ginagamit sa diagnosis ng laboratoryo ng mga nakakahawang sakit. Ang kakanyahan ng bacteriological na pamamaraan ng pananaliksik ay ang paghahasik ng mga pathological na materyal mula sa mga pasyente at ang paghihiwalay ng isang purong kultura ng pathogen na may kasunod na pagkilala sa pamamagitan ng morphological, kultura, tinctorial, biochemical at antigenic na mga katangian.

Ang pamamaraan ng paghihiwalay ng mga dalisay na kultura, na nagpapahintulot sa paghiwalay ng ilang mga uri ng microbes mula sa isa o iba pang likas na kapaligiran ng kanilang tirahan, ay ang pinakamahalagang pamamaraan ng pagsasaliksik ng microbiological. Ang una na magmungkahi ng isang pamamaraan para sa paghiwalayin ang purong kultura ay si L. Pasteur.

Ang pamamaraan ni Pasteur, batay sa paggamit ng likido na nakapagpapalusog na media, ay nagbigay ng pag-ihiwalay ng isang purong kultura higit sa lahat mula sa materyal na naglalaman ng isang uri ng microbe (halimbawa, mula sa dugo na may septicemia, atbp.). Hindi gaanong epektibo ang mga kaso kung saan kinakailangan na ibukod ang ilang mga uri ng mga microorganism mula sa kanilang pinaghalong. Samantala, sa materyal na vivo para sa pananaliksik ng bacteriological (plema, nana, lupa, tubig, atbp.) Madalas na naglalaman ng isang halo ng iba't ibang mga microorganism.

Ang matagumpay na paghihiwalay ng mga mixtures ng bakterya at ang nakahiwalay na pag-aaral ng mga indibidwal na species ay naging posible salamat sa pagpapabuti ng paraan ng paghihiwalay ng mga dalisay na kultura ni Robert Koch (R. Kosh), na nag-apply para sa hangaring ito noong 1881 solidong nutrient media  kung saan, kapag inoculated, posible na ipamahagi ang materyal sa paraang ang mga indibidwal na mga cell ng microbial ay matatagpuan sa paghihiwalay mula sa bawat isa. Sa ilalim ng naaangkop na mga kondisyon (kultura medium, optimal temperatura), ang pag-aanak ng mga nakahiwalay na selula ay gumagawa ng mga supling ng parehong species, i.e. purong kultura ng ganitong uri ng microbes.

Matapos ang isang tiyak na tagal (kadalasan sa isang araw) sa mga lugar na iyon ng isang siksik na daluyan ng nutrient na kung saan natagpuan ang mga nakahiwalay na selula, populasyon ng napakaraming microbes - ang tinatawag na mga kolonya  nakikita sa mata. Hindi sila kumakatawan sa isang magulong akumulasyon ng mga mikrobyo, na maaari nang hatulan sa pamamagitan ng katotohanan na para sa maraming uri ng mga mikrobyo, ang mga kolonya ay may katangian na istraktura, dahil sa kung saan posible na matukoy ang payat ng flora ng pinag-aralan na materyal at piliin ang mga kolonya na napapailalim sa karagdagang pag-aaral. Ang pag-aani ng naturang mga kolonya sa isang naaangkop na medium ng nutrisyon ay ang paghihiwalay ng isang purong kultura.

Ang paghihiwalay ng mga dalisay na kultura sa kanilang kasunod na pagkilala ay pinakamahalaga sa pagsusuri ng mga nakakahawang sakit, na tinitiyak ang kanilang mabilis na pagkilala, napapanahong paggamot at pag-iwas. Hindi gaanong mahalaga sa pagtukoy ng microflora sa pag-aaral ng sanitary-hygienic state ng mga bagay sa kapaligiran (hangin, tubig, lupa, atbp.), Pati na rin sa pagsasagawa ng pang-agham na pananaliksik.

Sa kasalukuyan, maraming mga pamamaraan para sa paghiwalayin ang mga purong pananim. Ang ilan sa mga ito ay ginagamit sa isang limitadong lawak, ang iba ay malawakang ginagamit. Ang pinaka-unibersal ay ang mga pamamaraan na inilarawan sa ibaba para sa paghihiwalay ng mga purong kultura ng bakterya (Drigalski paraan). Habang ang iba pang mga microorganism - spirochetes, protozoa - ay nangangailangan ng paggamit ng mga espesyal na pamamaraan ng paghihiwalay o hindi maaaring ihiwalay sa lahat ng artipisyal na nutrisyon ng media (ilang protozoa, rickettsiae, mga virus).

Ang mga pamamaraan para sa paghiwalay ng mga purong kultura mula sa microbial mixtures ay karaniwang nahahati sa dalawang pangunahing mga grupo: ang mga pamamaraan batay sa prinsipyo ng mekanikal na paghihiwalay ng mga microbes sa isang daluyan ng nutrisyon, at mga pamamaraan batay sa paggamit ng mga biological na katangian ng microbes. Kasama sa unang pangkat ang mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga indibidwal na selula: 1) malalim sa nutrisyon medium; 2) sa ibabaw ng daluyan; at 3) sa ilalim ng kontrol ng mata. Ang pangalawang pangkat ay gumagamit ng mga naturang katangian ng microbes bilang kanilang motility, na may kaugnayan sa temperatura, oxygen at kanilang mga pathogenic na katangian.

Paghahasik at pagpapatuloy na pamamaraan

Paghahasik  sa pagsasagawa ng microbiological, ang pagpapakilala sa isang sterile na daluyan ng nutrisyon ng anumang materyal ng pagsubok para sa pagtuklas ng mga microorganism ay tinatawag.

Reseeding  - Ito ang paglipat ng mga lumalaking microorganism sa isang maayos na kapaligiran. Ang pag-aasikaso at pagpapatuloy ng mga microbes ay isa sa mga pinaka-karaniwang pamamaraan sa pagsasagawa ng microbiological.

Ang pag-aani ay isinasagawa upang ang mga dayuhang microorganism ay hindi makapasok sa daluyan ng nutrisyon mula sa hangin o mula sa ibabaw ng mga nakapalibot na bagay. Upang gawin ito, dapat mong mahigpit na sundin ang mga sumusunod na pamamaraan:

1) Ang paghahasik ay isinasagawa nang direkta malapit sa lit burner, sa apoy kung saan ang mga bisagra, sipit, koton na plug, mga gilid ng tubo ay isterilisado;

2) sa kaliwang kamay ay kumuha ng isang pagsubok na tubo na may transplanted na kultura, ang iba pa (na may daluyan na medium medium) ay pinananatili sa isang hilig na posisyon sa pagitan ng hinlalaki at daliri;

3) ang loop ay gaganapin sa isang patayo na posisyon sa itaas ng siga ng burner at ang metal na bahagi nito ay pula-mainit, at pagkatapos ay ito ay ikiling pahalang at ang may-hawak ng loop ay isterilisado;

4) kinuha nila ang mga plug ng cotton at hawakan sila ng singsing na daliri at maliit na daliri ng kanang kamay; ang paglalagay ng mga corks sa isang mesa o sa isang bagay ay hindi inirerekomenda;

5) sunugin ang mga gilid ng parehong tubes;

6) gumawa ng isang loop sa test tube na may kultura na mailipat nang mabuti, nang hindi hawakan ang mga dingding, makunan ang isang patak ng likido o isang maliit na halaga ng plaka sa isang solidong daluyan at paglipat, pag-iingat na huwag hawakan ang mga dingding, sa pangalawang tubo ng pagsubok na may ibinigay na nutrient medium;

7) alisin ang loop, sunugin ang mga gilid ng tubes at ang mga panloob na dulo ng mga tubes. Kung ang plug ng cotton plug up, pagkatapos ay isara ang tubo kasama nito, at puksain ang panlabas na dulo na may isang kamay o sipit;

8) ang loop ay muling sinunog sa isang siga, ang kaukulang inskripsyon ay ginawa sa test tube: ang pangalan ng kultura at petsa ng paghahasik.

Paghahasik sa isang likidong daluyan  maaaring magawa gamit ang isang pasteurized o nagtapos na pipette. Kapag gumagamit ng isang Pasteur pipette na may sinusunog na sipit, basagin ang selyadong dulo at bahagyang sunugin ang buong pipette. Ang tubo ng pagsubok na may pinag-aralan na kultura ay inilalagay sa kaliwang kamay, at ang pipette sa kanan sa pagitan ng hinlalaki at gitnang daliri, na may hawak na itaas na butas gamit ang daliri ng index.

Ang pagkuha ng isang cotton stopper mula sa isang tubo ng pagsubok, sunugin ang mga dulo ng huling. Maingat na ibaba ang pipette sa tubo at alisin ang hintuturo. Pagkatapos, gamit ang hintuturo, isara ang itaas na butas ng pipette, dalhin ito sa tubo. Ang cotton plug at ang mga gilid ng tubo ay pinaputok bago isara. Ang materyal ng pagsubok ay inililipat sa isang daluyan ng likido. Pagkatapos ng seeding, ang mga pipette ay inilalagay sa isang solusyon ng disimpektante.

Paghahasik sa siksik na kapaligiran.  Kapag inoculated sa pahilig agar, inilapat ang isang tuwid o zigzag stroke. Upang gawin ito, ang isang loop na may binhi na itinanim ay ipinakilala sa isang tubo ng pagsubok hanggang sa naipon ang tubig ng paghalay sa ilalim at maingat na inilapat ang isang stroke, nang walang pag-alis ng agar. Ang patuloy na paghahasik ay nakuha sa pamamagitan ng pagkalat ng binhi sa buong ibabaw ng pahilig na agar.

Sa isang solidong daluyan sa isang ulam sa Petri, ang paghahasik ay isinasagawa bilang mga sumusunod. Ang daluyan ng nutrisyon sa mga tubo ng pagsubok ay natutunaw sa isang tubig na kumukulo ng tubig, pinalamig sa 48-50 ° C at ibinuhos ng kahit na layer na 3-5 mm mataas sa mga sterile tasa. Ang frozen medium ay natuyo sa isang termostat sa mga saradong tasa sa loob ng 20-30 minuto. Ang mga bukas na tasa ay inilalagay baligtad sa mga termostat istante na natatakpan ng payat na papel. Ang mga labi ay inilalagay sa tabi ng mga tasa. Sa panahon ng pagpapatayo, ang tubig ng paghalay ay sumingaw mula sa ibabaw ng daluyan ng nutrisyon at panloob na ibabaw ng mga tasa. Ang paghahasik ay ginagawa gamit ang isang loop sa anyo ng kahanay na mga stroke o may isang spatula ng salamin.

Kapag tinutukoy ang uri ng microbe at para sa lumalagong mga anaerobes paghahasik sa pamamagitan ng iniksyon sa isang haligi ng agar o gelatin. Upang gawin ito, buksan ang tubo na baligtad at gumamit ng isang mahabang tuwid na karayom \u200b\u200bna may buto upang itusok ang haligi ng daluyan mula sa itaas hanggang sa ibaba. Pagkatapos ang karayom \u200b\u200bay maingat na tinanggal at ang tubo ay sarado na may nasusunog na plug ng cotton. Kung kinakailangan ang mga espesyal na pag-iingat laban sa impeksiyon, ang mga pananim ay pinananatili sa isang espesyal na gabinete para sa pagpapatuloy ng malinis na pananim. Ang mga inoculated tubes at Petri pinggan ay inilalagay sa isang thermostat ng paglago.

Ang mga mikrobyo at spores na nasa loob ng daluyan ng nutrisyon o sa kanilang ibabaw ay hindi maaaring ilipat, ngunit manatili sa lugar kung saan sila ay sa oras ng solidification. Ang bawat cell o spore ay nagsisimula na dumami at sa 2-3 araw na form kolonya -  isang malaking bilang ng mga cell ng isang uri. Kung ang kolonya ay nabuo mula sa isang cell, kung gayon ito ay magiging isang purong kultura ng microorganism mula sa kung aling cell ang lumaki.

Ang mga lumalaking kolonya ay tiningnan muna gamit ang hubad na mata, at pagkatapos ay may isang magnifier o sa ilalim ng isang mikroskopyo. Dapat pansinin na ang mga kolonya ay naiiba sa hitsura, kulay, istraktura, atbp.

Ang paggamit ng bacteriological na pamamaraan ay ginagawang posible upang ibukod ang pathogen sa isang dalisay na kultura mula sa materyal na nakuha mula sa pasyente, at upang makilala ito batay sa pag-aaral ng kumplikadong mga katangian. Karamihan sa mga bakterya ay may kakayahang paglilinang sa iba't ibang artipisyal na nutrienteng media (maliban sa chlamydia at rickettsia), samakatuwid ang pamamaraan ng bacteriological ay mahalaga sa pagsusuri ng maraming mga nakakahawang sakit.

Sa kaso ng isang positibong resulta, ang pamamaraan ng bacteriological ay nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang sensitivity ng napiling pathogen sa mga ahente ng antimicrobial. Gayunpaman, ang pagiging epektibo ng pag-aaral na ito ay nakasalalay sa maraming mga parameter, partikular sa mga kondisyon ng koleksyon ng materyal  at kanyang transportasyon  sa lab.

Sa pangunahing kinakailanganipinakita sa pagpili at transportasyon ng materyal para sa pananaliksik na bacteriological ay kasama ang:

• pagkuha ng materyal bago magsimula ang paggamot ng etiotropic;
• pagsunod sa mga kondisyon ng sterility kapag nangolekta ng materyal;
• teknikal na kawastuhan ng koleksyon ng materyal;
• isang sapat na dami ng materyal;
• tinitiyak ang rehimen ng temperatura ng imbakan at transportasyon ng materyal;
• pag-minimize ng agwat ng oras sa pagitan ng koleksyon ng materyal at paghahasik sa solidong nakapagpapalusog na media.

Ang materyal ay dapat na maipadala sa laboratoryo sa lalong madaling panahon, ngunit hindi hihigit sa 1-2 na oras pagkatapos ng koleksyon. Ang mga halimbawa ng materyal ay dapat na sa isang tiyak na temperatura; sa partikular, karaniwang mga sterile na materyales (dugo, cerebrospinal fluid) ay naka-imbak at naihatid sa laboratoryo sa 37 ° C. Ang mga hindi materyal na sterile (ihi, daanan ng hangin, atbp.) Ay nakaimbak sa temperatura ng silid nang hindi hihigit sa 1-2 oras o hindi hihigit sa isang araw sa 4 ° C (mga kondisyon ng isang domestic ref). Kung imposible na maihatid ang mga sample sa laboratoryo sa loob ng inireseta na tagal ng oras, inirerekumenda na gumamit ng transport media na idinisenyo upang mapanatili ang posibilidad ng mga pathogens sa ilalim ng mga kondisyon ng pangangalaga.

Dugo para sa pananaliksikdapat kunin mula sa pasyente sa panahon ng pagtaas ng temperatura ng katawan, sa simula ng simula ng lagnat. Inirerekomenda na pag-aralan ang mga 3-4 sample ng dugo na kinuha sa pagitan ng 4-6 na oras, na kung saan ay nabigyan ng katwiran mula sa punto ng pagbabawas ng panganib ng "nawawala" na palabas na bakterya at pagtaas ng kakayahang kumpirmahin ang etiological na papel ng kondisyon na pathogenic microflora na nakahiwalay mula sa dugo kung ang mikropono na ito ay natagpuan sa maraming mga kagandahang halimbawa dugo. Ang isang sample ng dugo sa isang halagang 10 ml sa isang may sapat na gulang at 5 ml sa mga bata ay binubuo ng hindi bababa sa dalawang bote na may daluyan para sa aerobic at anaerobic microorganism sa isang ratio na 1:10. Ang isang pag-aaral ng arterial dugo ay ipinapayong.

Kumuha likido sa cerebrospinal  (CSF) ay isinasagawa ng isang doktor na may lumbar puncture sa halagang 1-2 ml sa isang dry sterile tube. Ang sample ay kaagad na naihatid sa laboratoryo, kung saan ito ay sinisiyasat din agad. Kung hindi ito posible, ang materyal ay nakaimbak sa 37 ° C sa loob ng maraming oras. Makabuluhang tumataas positibong resulta  pagsusuri sa bacteriological, inoculation ng 1-2 patak ng CSF sa isang test tube na naglalaman ng isang semi-likidong daluyan na may glucose, at sa isang ulam na Petri na may agaring "dugo". Para sa paglipat ng materyal gamit ang mga isothermal box, mga pad ng pag-init, thermoses o anumang iba pang mga pakete kung saan pinapanatili ang temperatura sa mga 37 ° C.

Paggalaw ng bitukapara sa pagsusuri ng bacteriological, ang 3-5 g ay pinili gamit ang sterile na kahoy na spatulas sa isang sterile vessel na may isang mahigpit na angkop na takip. Ang pag-aaral ng kinuha na materyal ay dapat na magsimula nang hindi lalampas sa 2 oras. Kung imposibleng simulan ang pag-aaral sa oras na ito, isang maliit na halaga ng materyal ang dapat mapili, na inilalagay sa naaangkop na daluyan ng transportasyon. Kapag pumipili ng feces, dapat magsikap ang isa na magpadala ng mga impeksyon sa pathological (uhog, pus, epithelial particle, atbp.) Para sa pananaliksik, kung mayroon man, pag-iwas sa ingress ng mga dumi ng dugo na may mga katangian ng bactericidal sa materyal.

Upang kunin ang materyal ay maaaring magamit ang mga rectal tampon (na may isang tip ng cotton). Ang pamunas ay dapat na moistened na may isang sterile isotonic sodium chloride solution o sasakyan (ngunit hindi sa isang gel ng langis). Ipinakilala ang bawat tumbong sa lalim ng 5-6 cm at, pag-on ang tampon, maingat na alisin ito, kinokontrol ang hitsura ng fecal coloration sa tampon. Ang tampon ay inilalagay sa isang dry tube kung ang pag-aaral ng materyal ay nagsimula sa loob ng 2 oras, kung hindi man sa transport medium.

Piss(ang average na bahagi ng malayang inilabas na ihi) sa isang halaga ng 3-5 ML ay nakolekta sa mga sterile pinggan pagkatapos ng isang masusing banyo ng panlabas na genitalia. Mas mainam na kumuha ng mga bahagi sa umaga ng ihi.

Bilena nakolekta sa tunog ng duodenal sa silid ng paggamot nang hiwalay sa mga bahagi A, B at C sa tatlong sterile tubes, na sinusunod ang mga patakaran ng asepsis.

Gastric lavage  na nakolekta sa mga sterile garapon sa isang halaga ng 20-50 ml. Dapat tandaan na sa mga kasong ito, ang gastric lavage ay isinasagawa lamang sa walang malasakit (hindi pagkakaroon ng bacteriostatic o bactericidal na epekto sa mga microorganism) na mga solusyon - mas mabuti ang pinakuluang tubig (nang walang pagdaragdag ng soda, potassium permanganate, atbp.).

Sputum. Ang sputum ng umaga na inilabas sa panahon ng pag-ubo ay nakolekta sa isang sterile jar. Bago ang pag-ubo, ang pasyente ay nagsisipilyo ng kanyang mga ngipin at pinunasan ang kanyang bibig ng pinakuluang tubig upang awtomatikong alisin ang mga labi ng pagkain, desquamated epithelium at microflora ng oral cavity.

Mga paghuhugas ng bronchial. Kapag ang bronchoscopy, hindi hihigit sa 5 ml ng isotonic sodium chloride solution ay pinangangasiwaan, na sinusundan ng pagsipsip nito sa isang sterile tube.

Natatanggal na pharynx, bibig, at ilong. Ang materyal mula sa bibig na lukab ay nakuha sa isang walang laman na tiyan o 2 oras pagkatapos kumain kasama ang isang sterile cotton swab o kutsara mula sa mauhog lamad at ang mga apektadong lugar sa pumapasok na mga duct ng salivary glandula, ang ibabaw ng dila, at mula sa mga sugat. Sa pagkakaroon ng isang pelikula, ang huli ay tinanggal na may sterile forceps. Ang materyal mula sa lukab ng ilong ay kinuha gamit ang isang dry sterile cotton swab, na ipinakilala nang malalim sa lukab ng ilong. Ang materyal mula sa nasopharynx ay kinunan gamit ang isang sterile posterior pharyngeal cotton swab, na maingat na naipasok sa pamamagitan ng pagbubukas ng ilong sa nasopharynx. Kung ang isang ubo ay nagsisimula, ang pamunas ay hindi tinanggal hanggang matapos ang ubo. Upang magsagawa ng pagsusuri ng dipterya, ang mga pelikula at uhog mula sa ilong at pharynx ay sabay-sabay na sinuri, na kumukuha ng materyal na may iba't ibang mga tampon.

Ang pinag-aralan na materyal ay nahasik sa solidong nutrient media na gumagamit ng mga espesyal na pamamaraan upang makuha ang paglaki ng mga indibidwal na kolonya ng mga microorganism, na kung saan ay pagkatapos ay ibinaba upang maihiwalay ang isang dalisay na kultura ng pathogen.

Ang ilang mga uri ng bakterya ay nakahiwalay gamit ang elective (selective) media na pumipigil sa paglaki ng mga dayuhang microorganism o naglalaman ng mga sangkap na pinasisigla ang paglaki ng ilang mga pathogen microbes.

Ang mga mikroorganismo ay nakahiwalay sa nutrient media makilala, i.e. matukoy ang kanilang mga species o uri ng ugnayan. Kamakailan lamang, ang mga microtest system, na mga panel na may isang hanay ng mga pagkakaiba-iba ng mga diagnostic na kapaligiran, ay ginamit para sa pagkilala sa kasanayan sa pangangalagang pangkalusugan, na nagpapabilis sa pag-aaral. Ginagamit din ang mga microtest system upang matukoy ang pagiging sensitibo ng mga microorganism sa mga ahente ng antimicrobial sa pamamagitan ng paraan ng pag-dilute ng isang antibiotic sa isang daluyan na nutrient medium.

Pagtatasa ng mga resulta ng isang pag-aaral ng bacteriological, dapat isaalang-alang ng doktor na ang isang negatibong resulta ay hindi palaging nangangahulugang kawalan ng isang pathogen at maaaring maiugnay sa paggamit ng mga ahente ng antimicrobial, mataas na aktibidad ng dugo sa microcidal, at mga pagkakamali sa teknikal. Ang pagtuklas ng isang pathogen microbe sa materyal mula sa pasyente na walang koneksyon sa klinikal na larawan ay posible sa kaso ng pagkumbinse, malusog o lumilipas na karwahe ng bakterya.

Ang paghihiwalay ng mga kondisyon na microorganismo ng pathogen (epidermal staphylococcus, Escherichia coli) at kahit saprophyte mula sa dugo, napapailalim sa lahat ng mga patakaran ng aseptiko, dapat isaalang-alang na isang paghahayag ng bakterya, lalo na kung ang mga mikrobyong ito ay matatagpuan sa higit sa isang materyal na sample o sa iba't ibang mga substrate (dugo, ihi), mula pa ang isang pagbawas sa immunoreactivity ng katawan, ang mga ito at iba pang mga "non-pathogenic" microorganism ay maaaring maging ahente ng sanhi ng mga nakakahawang proseso, kabilang ang sepsis.

Mayroong kahirapan interpretasyon ng mga resulta ng mga pag-aaral ng bacteriological ng mga di-sterile na kapaligiran, ibig sabihin, katibayan ng etiological na papel ng mga oportunistang microorganism. Sa kasong ito, isinasaalang-alang ng kumplikado ang mga naturang tagapagpahiwatig tulad ng uri ng mga nakahiwalay na kultura, ang bilang ng mga microbial cells ng ganitong uri sa materyal, ang kanilang paulit-ulit na paghihiwalay sa panahon ng sakit, ang pagkakaroon ng monoculture o ang samahan ng isang microorganism.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.