Verižna reakcija s polimerazo (PCR) je visoko natančna molekularno-genetska diagnostična metoda, ki vam omogoča prepoznavanje različnih nalezljivih in dednih bolezni pri ljudeh, tako v akutnem kot v kroničnem stadiju in dolgo preden se bolezen manifestira.

Verižno reakcijo s polimerazo (PCR) je leta 1983 razvil Kary Mullis (ZDA), za kar je leta 1993 prejel Nobelovo nagrado za kemijo.

Analiza PCR je postala nekakšen "zlati standard" za večino okužb. Večina specialistov se z njo srečuje skoraj vsak dan in si brez nje ne more predstavljati postavitve končne diagnoze. PCR pogosto postane edina reakcija za identifikacijo aktivnih faz bolezni v času, ko druge bakteriološke, virološke in imunološke diagnostične metode ne delujejo.

Prednosti PCR diagnostike v sodobni medicini:

Neposredno odkrivanje prisotnosti patogena (in sicer specifične regije DNA ali RNA patogena) v testnem vzorcu.
Visoka specifičnost vam omogoča, da določite edinstven odsek DNK ali RNK, ki je značilen za določen patogen, kar odpravlja možnost lažnih reakcij.
Visoka občutljivost metode PCR vam omogoča odkrivanje celo posameznih celic patogenov (virusov, bakterij). Občutljivost PCR analize je 10-1000 celic v testnem vzorcu (npr. občutljivost imunoloških in mikroskopskih testov je le 103-105 celic).
Razvoj univerzalne tehnike PCR za odkrivanje različnih patogenov. Predmet raziskave z metodo PCR je genetski material (DNK, RNK) patogena. Tehnika vam omogoča identifikacijo več patogenov iz enega biološkega vzorca.
Prejmite rezultate analize dokaj hitro. Celoten pregled se opravi v 4-4,5 urah, manj pogosto - malo dlje.
Sposobnost odkrivanja povzročiteljev bolezni pred pojavom simptomov bolezni (predklinična diagnoza) in po prestanku bolezni (retrospektivna diagnoza). Primer predklinične diagnostike bi bil pregled v inkubacijskem obdobju (od trenutka okužbe do pojava pritožb) pa tudi latentna okužba (ko sploh ni simptomov, ampak samo laboratorijski podatki - na primer PCR). Eden od pomembnih vidikov PCR diagnostike je izvajanje PCR v arhivskem gradivu ali bioloških ostankih, ki je pomembno za identifikacijo osebnosti oziroma očetovstva.

Trenutno je diagnostika PCR v pomembnem razvoju. Sama metoda se izboljšuje, vedno znova se pojavljajo nove različice PCR, na medicinski trg vstopajo novi testni sistemi za to reakcijo. Zahvaljujoč temu so stroški študij PCR vsako leto dostopnejši za širok krog bolnikov.

Na čem temelji metoda PCR?

Osnova polimerazne verižne reakcije je ponavljajoče se podvajanje (pomnoževanje) določenega odseka DNK ali RNK z uporabo encimov v laboratoriju. Posledično nastane količina DNK ali RNK, ki zadostuje za vizualno analizo. Med študijo se kopira samo območje, ki ustreza določenim pogojem, in le, če je prisotno v testnem vzorcu.

Na primer, material za raziskave, v katerem se domneva prisotnost fragmentov DNA ali RNA patogena (slina, kri, urin, izcedek iz spolnih organov), se postavi v poseben reaktor (ojačevalnik). Nato se mu dodajo specifični encimi, ki se vežejo na DNK ali RNK povzročitelja in sintetizirajo njegovo kopijo. To kopiranje poteka v več fazah kot "verižna reakcija" in na koncu se lahko iz ene kopije genetskega materiala oblikuje na stotine in tisoče kopij. Nato sledi analiza in primerjava rezultata z obstoječo bazo podatkov o strukturi različnih povzročiteljev bolezni. S pomočjo PCR ne morete le identificirati vrste patogena, temveč tudi zagotoviti kvantitativni rezultat analize, to je, koliko patogenov je v človeškem telesu.

Metoda PCR trenutno širi nabor raziskovalnih možnosti: uvaja mutacije, spajanje fragmentov DNA, razširjena je v medicini, na primer za ugotavljanje očetovstva, pojav novih genov itd.

Katere okužbe lahko odkrijemo s PCR diagnostiko?

1) Okužba s HIV (lahko se odkrije virus humane imunske pomanjkljivosti HIV-1)
2) Virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Infekcijska mononukleoza (DNA virusa Epstein-Barr - EBV)
4) Okužba s citomegalovirusom (DNA-CMV)
5) Okužba s herpesom (DNA herpes simplex virus HSV tipa 1 in 2)
6) SPO (spolno prenosljive okužbe) - ureaplazmoza, gardnereloza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijaza,
7) Tuberkuloza (Mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogeni virusi - okužba s papiloma virusi (humani papiloma virus (vključno z njegovimi onkogenimi tipi 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 in 59)
9) Borelioza, klopni encefalitis
10) Listerioza
11) Kandidiaza (glivice iz rodu Candida)
12) okužba s Helicobacter pylori
in drugi

Glede na vrsto patogenov se diagnostika PCR aktivno uporablja v ginekološki, urološki praksi, praksi nalezljivih bolezni, pulmologiji, ftiziologiji, gastroenterologiji, hematologiji, onkologiji in drugih.

Material za raziskovanje in pravila za njegovo zbiranje

Material za raziskavo PCR, v katerem je mogoče odkriti tujo bakterijsko DNA ali virusno DNA ali RNA, so lahko različni biološki mediji in človeške tekočine: sluz, urin, kri, sputum, ostanki epitelijskih celic, placentno tkivo, kri, sok prostate, amnijska tekočina, plevralna tekočina.

Pri presejalnem pregledu za spolno prenosljive okužbe (SPO) se pri moških in ženskah testirajo genitalni izločki, bris ali strgan iz materničnega vratu, bris ali strgan iz sečnice (sečnice) in urin.

Pri pregledu za okužbe (herpetične okužbe, CMV, mononukleoza, toksoplazmoza, hepatitis B, C, okužba s HIV) se odvzame kri za PCR.

Za diagnosticiranje infekcijske mononukleoze, CMV ali herpetične okužbe se vzame bris iz grla in urin za testiranje na CMV. Pogosto za pregled lezije živčni sistem V številnih študijah se vzame cerebrospinalna tekočina.

V pulmologiji je uporabljen material sputum in plevralna tekočina.

Pri pregledu intrauterinih okužb - amnijske tekočine, placentnega tkiva.

Priprava na dostavo materiala in PCR diagnostiko

Skoraj vsi bolniki, ki so podvrženi diagnostiki PCR, imajo pravico računati na zanesljiv, natančen in hiter rezultat, kar je v veliki meri odvisno od zmogljivosti laboratorija in strokovnosti laboratorijskega zdravnika. Hkrati mnogi ne mislijo, da je ta zanesljivost v veliki meri odvisna od nas samih, in sicer od priporočil lečečega zdravnika, načina življenja in pravilnosti zbiranja materiala. Pri zbiranju materiala so potrebni pogoji, ki izključujejo kontaminacijo (kontaminacijo) materiala in s tem vzbujajo dvom o objektivnosti analize.

Pravilna priprava na oddajo gradiva ni posebej težka. Obstajajo naslednja priporočila zdravnikov za bolnike:

1) en dan pred oddajo materiala ne biti spolno aktiven;
2) kri za testiranje se daruje zjutraj na prazen želodec (ne jejte in ne pijte);
3) pri dajanju urina se prvi jutranji del zbere v čisto, sterilno posodo.

Čas pripravljenosti za analizo PCR

Končni rezultat je pripravljen 1,5-2 dni po oddaji materiala. V nekaterih primerih je rezultat pripravljen že prvi dan.

Interpretacija rezultatov PCR

Negativno rezultat PCR kaže, da v času dostave v testnem materialu niso bile najdene sledi povzročiteljev okužb. Večina primerov kaže na odsotnost okužbe, ki so jo poskušali odkriti v testnem vzorcu.

Pozitivno rezultat PCR kaže na odkritje sledi okužbe v biološkem vzorcu, ki se testira. Z veliko natančnostjo pozitiven rezultat kaže na prisotnost okužbe v določenem času.

Obstajajo situacije, ko se PCR izkaže za pozitivno, vendar ne moremo govoriti o aktivni okužbi - to je tako imenovani "zdrav prevoz" brez klinični simptomi bolezen, ki ne zahteva zdravljenja, vendar zahteva dinamično spremljanje zdravnika. Pogosteje ga opazimo pri številnih virusnih okužbah (HPV, CMV okužba, EBV okužba, herpetična okužba in drugi) v materialih, kot so slina, ostružki cervikalnega kanala, sečnice, to je iz lokalnega žarišča. Vendar ne smemo pozabiti, da je prenos okužbe z nosilcev na zdrave ljudi možen, tako kot prehod na kronična oblika bolezni z aktivacijo procesa. Če je PCR pozitiven v krvi, potem to ni več nosilec in zahteva specifično zdravljenje.

Kvantitativni rezultat PCR oceni le zdravnik posebej za posamezno okužbo in nima splošnih gradacij. Na podlagi kvantitativnega rezultata PCR lahko zdravnik določi stopnjo aktivnosti okužbe in določi stopnjo bolezni, kar bo zagotovo vplivalo na potek in odmerke predpisanih zdravil.

Eno zadnjih vznemirljivih vprašanj: kako natančna je PCR diagnostika?

Obstajajo 3 definicije PCR analize:

1. Natančnost (z veliko verjetnostjo je mogoče odkriti okužbo ali se ji izogniti).
2. Specifičnost (natančnost odkrivanja določene okužbe).
3. Občutljivost (tudi pri nizki vsebnosti genskega materiala patogenov v testnem vzorcu bo okužba odkrita).

Verižna reakcija s polimerazo praktično ne daje napačnih rezultatov. pozitivne rezultate(torej tam, kjer ni okužbe, ni pozitivnih vzorcev). Lažno negativni rezultati so redki (najpogosteje zaradi odsotnosti aktivne okužbe pri osebi v tem trenutku). Na primer latentna okužba, kronična okužba brez aktivnosti.

Zdravnica za nalezljive bolezni N.I. Bykova

Video o tem, zakaj in kako opraviti PCR test za okužbe

Visoko informativna metoda PCR (verižna reakcija s polimerazo) omogoča zgodnje odkrivanje različnih genetskih in nalezljivih bolezni, ki se pojavljajo akutno ali kronično. Poleg tega jih je mogoče prepoznati tudi v fazi, ko se ne manifestirajo z nobenimi simptomi. Najpogosteje se analiza PCR uporablja za odkrivanje spolno prenosljivih okužb (SPO, SPO).

Analiza PCR se nanaša na molekularno diagnostično metodo, ki temelji na večkratnem povečanju majhnih koncentracij določenih fragmentov nukleinske kisline (DNK) patogena v katerem koli biološkem materialu (bris iz materničnega vratu, nožnice, sečnice, krvi, sline, izpljunka, itd.) in primerjati njegovo DNK ali RNK z zbirko podatkov znanih vrst povzročiteljev okužb.

Tehniko je razvila Američanka Carrie Mullis v 80. letih prejšnjega stoletja. Leta 1993 je znanstvenik prejel Nobelovo nagrado za kemijo. Danes PCR testiranje velja za nekakšen »zlati standard« za diagnosticiranje velike večine okužb. Analiza PCR se v medicinski praksi pogosto uporablja za razjasnitev narave bolezni in natančno diagnozo. Zelo pogosto obstajajo primeri, ko so vsi znani imunološki, virološki in bakteriološke metode ne delaj. Potem PCR postane edini način za identifikacijo aktivne stopnje bolezni.

Prednosti PCR diagnostike pred drugimi metodami

Tehnika PCR je našla široko uporabo v sodobni medicini zaradi številnih nedvomnih prednosti. Pogovorimo se o njih podrobneje.

Sposobnost neposrednega odkrivanja prisotnosti patogena

Številne tradicionalne diagnostične metode temeljijo na določanju markerjev – beljakovin, ki so odpadni produkti patogena. Ta diagnostični princip lahko zagotovi le posredno potrditev patologije. Metoda PCR omogoča neposredno identifikacijo povzročitelja, saj identificira specifične dele DNK patogenih organizmov.

Visoka specifičnost

Tehnika PCR je zelo specifična, saj omogoča detekcijo fragmentov DNA, značilnih le za določenega povzročitelja okužbe. Pri uporabi imunoloških metod še vedno obstaja možnost, da dobite napačen rezultat (napake pri diagnozi so povezane z navzkrižno reagirajočimi antigeni). Kar zadeva PCR, so tukaj napake izključene, saj je specifičnost v tem primeru določena z nukleotidnim zaporedjem primerjev.

Visoka občutljivost

S to metodo se določijo tudi posamezni patogeni mikroorganizmi. Povzročitelji okužb se odkrijejo v človeškem telesu, tudi če druge diagnostične metode ne pojasnijo situacije (govorimo o različnih imunoloških mikroskopskih in bakterioloških raziskovalnih metodah).

Tukaj je nekaj podatkov za primerjavo. Občutljivost mikroskopske in imunološke metode je 103-105 celic, občutljivost PCR pa 10-100 celic na vzorec.

Vsestranskost metode

Tehnika PCR temelji na preučevanju DNK patogenih organizmov. Med študijo se določijo fragmenti RNA ali DNA, ki so specifični za določene povzročitelje okužb. Ker imajo vse nukleinske kisline podobno kemično sestavo, ko laboratorijske analize se lahko uporabijo standardizirane metode. To pomeni, da študija enega vzorca omogoča identifikacijo več patogenov hkrati.

Hitro dobite rezultate

Ta tehnika ne zahteva gojenja kultur patogenov, kar traja precej časa. Zahvaljujoč uporabi enotne tehnologije za obdelavo materiala in identifikacijo reakcijskih produktov ter avtomatiziranega procesa pomnoževanja, celoten raziskovalni postopek traja le nekaj ur.

Možnost odkrivanja okužb v latentni obliki

Tehnika PCR omogoča učinkovito izvajanje predklinične diagnostike (identifikacija povzročiteljev pred pojavom simptomov) in retrospektivne diagnostike (identifikacija povzročiteljev po preboleli bolezni). Tako je predklinična diagnostika velikega pomena pri pregledu bolnika v inkubacijska doba možna bolezen - po domnevni okužbi, preden se pojavijo prvi znaki.

Ena od pomembnih prednosti PCR je možnost uporabe bioloških ostankov ali arhivskega materiala za analizo. To omogoča ugotavljanje očetovstva in identitete.

Danes se diagnostične metode PCR še naprej razvijajo. Sama tehnologija analize se izboljšuje, pojavljajo se nove vrste PCR. V medicinsko prakso se uvajajo inovativni testni sistemi za to reakcijo. Zahvaljujoč tako hitremu napredku znanosti se stroški postopka znižujejo, PCR testiranje pa je zdaj mogoče uporabiti za številne kategorije bolnikov.

Ta diagnostična metoda temelji na večkratnem podvajanju določenega dela RNA ali DNA. Ta postopek poteka v laboratoriju s posebnimi encimi. Posledično se oblikuje toliko odsekov DNK (RNA), kolikor je potrebno za vizualni pregled. Med postopkom se kopira le tisto območje, ki izpolnjuje navedene pogoje (če je prisotno v proučevanem vzorcu).

Biološki material, ki ga je treba pregledati na prisotnost DNK ali RNK patogenov, damo v cikler. (Odvisno od specifične situacije se za analizo vzame kri, urin, slina in izcedek iz genitalij). Vzorcem se nato dodajo posebni encimi. Vežejo se na RNK ali DNK patogenih mikrobov in začne se sinteza kopij. Kopiranje je večstopenjski proces, ki poteka kot verižna reakcija. Rezultat je lahko na stotine ali celo tisoče izvodov.

Na naslednji diagnostični stopnji se rezultati analizirajo in primerjajo z zbirko podatkov o povzročiteljih okužb.

Tehnika PCR ne omogoča samo določanja vrste patogena, temveč nam omogoča tudi sklepanje o številu povzročiteljev okužb v človeškem telesu.
Danes uporaba tovrstnih tehnologij odpira široke možnosti pri preučevanju mutacij in spajanja odsekov DNK. V sodobni medicini se je metoda začela uporabljati za ugotavljanje očetovstva, identifikacijo novih genov in še marsikaj.

Metoda PCR je zaradi svoje vsestranskosti našla široko uporabo v urologiji, ginekologiji, pulmologiji, onkologiji, hematologiji, ftiziologiji, praksi nalezljivih bolezni in drugih področjih medicine.

Material za analizo PCR

Za PCR diagnostiko se uporabljajo različni biološki mediji in tekočine, odvzete iz človeškega telesa: sputum, sluz, slina, urin, kri, ostružki epitelijskih celic, placentno tkivo, plevralna tekočina, amnijska tekočina, sok prostate itd.

Pri diagnosticiranju spolno prenosljive bolezni (SPO) se analizira izcedek iz moških in ženskih spolnih organov. Če želite to narediti, opravite bris ali strganje iz sečnice ali materničnega vratu. Za raziskave se uporablja tudi urin.

Za identifikacijo okužb (herpes, mononukleoza, CMV, toksoplazmoza, HIV, hepatitis B in C) se vzame kri za analizo. Če obstaja sum na poškodbo živčnega sistema, se odvzame cerebrospinalna tekočina.

Za pljučne preiskave se uporablja plevralna tekočina in sputum.

Za identifikacijo intrauterinih okužb se analizirajo placentno tkivo in amnijska tekočina.

PCR za SPO in druge okužbe

Katere okužbe lahko odkrijemo s PCR analizo?

Okužba s HIV (lahko se odkrije virus humane imunske pomanjkljivosti HIV-1).

Virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV).

SPO (spolno prenosljive okužbe) - ureaplazmoza, gardnereloza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijaza.

Infekcijska mononukleoza (DNA virusa Epstein-Barr - EBV).

Okužba s citomegalovirusom (DNA-CMV).

Herpetična okužba (DNA herpes simplex virus HSV tipa 1 in 2).

Tuberkuloza (Mycobacterium tuberculosis).

Onkogeni virusi - okužba s papiloma virusi (humani papiloma virus (vključno z njegovimi onkogenimi tipi 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 in 59).

Borelioza, klopni encefalitis.

Listerioza.

Kandidiaza (glivice iz rodu Candida).

okužba z bakterijo Helicobacter pylori
in drugi.

Priprava in dostava PCR analize

Pacientov, ki so darovali material za izvajanje PCR diagnostiko, računajte na hitre in natančne rezultate. V tem primeru je treba upoštevati eno pomembno točko - zanesljivost diagnoze ni odvisna samo od strokovnosti strokovnjakov in zmogljivosti medicinskega laboratorija. Da bi bila študija informativna, se mora sam bolnik potruditi. Zato je treba strogo upoštevati vsa priporočila zdravnika in natančno upoštevati pravila za pripravo na zbiranje materiala. Zelo pomembno je preprečiti kontaminacijo bioloških vzorcev, sicer bodo rezultati preiskav popačeni.

Priprava na analizo PCR

Priprava na postopek ni posebej težka. Samo zapomnite si nekaj pravil:

Za analizo PCR se kri daruje na prazen želodec. Krv se odvzame iz vene običajno zjutraj s sterilno iglo v posebno posodo.

Dan pred odvzemom materiala je spolna abstinenca indicirana pri odvzemu PCR brisa za SPO.

Za testiranje urina za PCR se vzame prvi del, posoda mora biti sterilna.

Kako narediti test PCR pri moških in ženskah

Analiza PCR se odvzame moškim in ženskam v sobi za cepljenje, to je kri iz vene, sline, brisi iz žrela, mandljev, nazofaringealni brisi itd. Način zbiranja ni nič drugačen.

PCR teste za spolno prenosljive bolezni izvajajo v porodnišnici med ginekološkim pregledom pri ženskah, to so brisi iz nožnice, materničnega vratu in sečnice. Za moške med obiskom pri andrologu ali venereologu je to bris iz sečnice.

Sheme za zbiranje materiala za PCR

Koliko časa traja PCR?

Pacientom ni treba dolgo čakati na rezultate PCR preiskave. Celoten postopek analize običajno traja od nekaj ur (PCR v realnem času) do 2-10 dni. Praviloma pacient prejme rezultate testa na roko v 2-5 dneh, do največ 10 dni, odvisno od vrste analize. PCR krvna diagnostika za HIV in hepatitis traja najdlje, brisi in strganja pa najdlje - 2-3 dni.

Negativen rezultat pomeni, da trenutno v biološkem materialu ni sledi povzročiteljev okužb. To pomeni, da okužbe, za katero je bil opravljen pregled, ni.

Pozitiven rezultat kaže na odkritje sledi patogena v bioloških vzorcih. To pomeni, da je trenutno v človeškem telesu okužba.
Obstajajo lahko primeri, ko PCR daje pozitiven rezultat, vendar ni opaziti aktivnega infekcijskega procesa. Govorimo o fenomenu, ki se imenuje "zdrava kočija". Zdravljenje takih bolnikov ni potrebno, vendar morajo biti pod stalnim dinamičnim nadzorom. Takšne situacije so značilne za virusne okužbe: virus Epstein-Barr (EBV), genitalni herpes, okužba s citomegalovirusom (CMVI), humani papiloma virus (HPV), pri katerih se vzorci odvzamejo za raziskave iz lokalnih žarišč (strganje sečnice, cervikalni kanal, slina). Ob tem ne smemo pozabiti, da lahko zdrav prenašalec okužbo prenese na druge ljudi. Poleg tega ni mogoče izključiti aktivacije infekcijskega procesa. V primerih, ko PCR daje pozitiven rezultat krvnega testa, se to ne more več šteti za prevoz. Takšni bolniki potrebujejo specifično zdravljenje bolezni, ki jo povzroča odkriti patogen.

Kvantitativni kazalniki nimajo splošnih gradacij. Ocenjuje jih zdravnik posebej za vsako posamezno okužbo. Kvantitativni rezultat vam omogoča, da ugotovite, kako aktivna je okužba, in ugotovite stopnjo procesa.

Zanesljivost metode PCR

Obstajajo trije kriteriji za oceno učinkovitosti tehnike:

- Natančnost– odkrivanje okužbe (ali odsotnosti le-te) z visoko stopnjo verjetnosti.

- Specifičnost– natančnost identifikacije določenega patogena.

- Občutljivost– sposobnost identifikacije patogena tudi z majhno količino genskega materiala v bioloških vzorcih.

Pri uporabi metode PCR je pridobitev lažno pozitivnih rezultatov skoraj nemogoča (to je, če je patogen odsoten, potem pozitiven test ne bo).

Lažno negativen rezultat je možen, vendar je zelo redek. Podobne situacije se pojavijo, če je okužba v času študije neaktivna. Na primer kronična okužba brez aktivnosti ali latentna okužba.

PCR analiza: video

PCR diagnostika(verižna reakcija s polimerazo) se uporablja za identifikacijo aktivne stopnje bolezni v kombinaciji s tradicionalnimi študijami, ko ni reakcije z uporabo imunoloških in mikrobioloških diagnostičnih metod.

Določeno obdobje se je PCR diagnostika uporabljala le v znanstvene namene, šele od konca 20. stoletja in v začetku 21. stoletja pa je ta analiza postala nekakšen »zlati standard«, ki je prinesel velike koristi na različnih področjih medicine. .

Kaj je bistvo PCR diagnostike?

Diagnostika PCR, za razliko od tiste, ki je sposobna odkriti sledi protiteles (AT), ugotavlja ne le temeljne vzroke patološko stanje, temveč tudi zazna prisotnost DNK ali RNK na določenem območju z uporabo encimov v laboratoriju.

Analiza z metodo PCR je zelo natančna, odpravlja možnost lažnih reakcij, prav tako ni nujno, da jemljete kri iz vene za testiranje, zadostuje majhno število vzorcev tkiva ali biološke tekočine.

Za zgoraj omenjeno različico biološkega okolja materiala za testiranje, ki vsebuje domnevno nalezljivega patogena, se lahko po odločitvi zdravnika dodeli več možnosti hkrati, vključno s tem:

• razmazati(izcedek iz genitalij);
• strganje sluznice(usta, nos, genitalije);
• slina, sputum ali plevralna tekočina;
• sok prostate, pregled izločanja prostate za prisotnost škodljivca;
• tkivo posteljice ali amnijska tekočina;
• splošna analiza urina pregledati usedlino (po centrifugiranju), če je potrebno za identifikacijo Mycobacterium tuberculosis;
• cerebrospinalna tekočina za prepoznavanje nalezljivih lezij centralnega živčnega sistema;
• zbiranje celic ali tkiv(biopsija) iz jeter, dvanajstniku, želodec itd.

Ti vzorci se dajo v poseben reaktor in analizirajo s ponavljajočim se podvajanjem (pomnoževanjem) proučevanih fragmentov DNA, skozi ponavljajoče se cikle replikacije in denaturacije z dodatkom specifičnih encimov za sintezo. Na podlagi vrste verižne reakcije ta metoda identificira vrsto in posamezne značilnosti DNK ali RNK. Navsezadnje postopek PCR pri primerjalni analizi kloniranega genskega materiala omogoča identifikacijo tudi posameznih celic živega virusa, pri čemer lahko ureaplazmo ločimo od mikoplazme oz.

Prednosti in slabosti PCR diagnostike

Ta PCR diagnostika ima tako prednosti kot številne slabosti.

Prednosti diagnostike:

• določitev patogena daje neposreden pokazatelj prisotnosti atipičnega dela DNK ali RNK v genetskem materialu;
• PCR diagnostika je 100% natančna zaradi prisotnosti v testiranem materialu delcev nukleinske kisline (fragmentov DNA ali RNA), značilnih samo za določen virus ali bakterijo;
• visoka občutljivost sistema PCR v primerjavi z drugimi diagnostičnimi metodami. Analiza PCR za ugotavljanje prisotnosti patogena zahteva eno celico živega virusa (10-100 celic v vzorcu), kar omogoča odkrivanje patogenega mikroorganizma v zgodnji fazi bolezni brez izrazitih simptomov in v naprednih oblikah;
• Visokotehnološko avtomatizirano PCR pomnoževanje poveča hitrost analize z izvajanjem testiranja na dan odvzema (dodelitev največ 4-6 ur za diagnozo). To povečuje produktivnost in daje prednost nad kulturnimi raziskovalnimi metodami;
• Vsestranskost analize omogoča odkrivanje več patogenov iz enega biološkega vzorca z uporabo genetskega materiala DNA ali RNA, zbranega na različne načine.

Ko že govorimo o pomanjkljivostih, potem je glede na občutljivost sistema PCR eden od neprijetnih trenutkov:

• variabilnost mikroorganizmov. Pomanjkljivost je, da so za mikroorganizme značilne mutacije, kar vodi do spremembe genotipa proučevanega patogena. In testni sistem PCR v pomnoženi regiji genoma ne more zaznati hibrida že razvijajočega se patogena, tako kot ga ne prepozna človeški imunski sistem, zato ne bo prišlo do reakcije za ugotavljanje prisotnosti nalezljive bolezni. Toda za to potekajo različni dogodki za izboljšanje metode PCR;
• možnost pridobitve lažno pozitivnega ali lažno negativnega rezultata. Da ne bi naleteli na lažne rezultate na eni od stopenj diagnostike PCR, jo je treba izvesti previdno, ne da bi motili postopek, ob upoštevanju pravil za zbiranje materiala. Vzorci lahko spremenijo svojo strukturo ali pa so popolnoma uničeni, kar lahko privede do lažno negativnega ali lažno pozitivnega rezultata. Treba je razumeti, da se ta rezultat lahko pojavi, ko je okužba že uničena, vendar odmrle celice še niso imele časa za obnovo in so bile upoštevane med kloniranjem. Zato na zgodnje faze po zdravljenju se uporabljajo druge metode (na primer), po popolni odstranitvi neaktivnih povzročiteljev okužbe iz telesa pa se izvede kontrolna analiza z metodo PCR. In lečeči zdravnik sprejme končno odločitev o primernosti terapije ob upoštevanju vseh prednosti in slabosti.

Priprava na PCR diagnostiko in pogoji za opravljanje testov

Vredno je pozornosti enostavna priprava za PCR, je za to potrebno dosledno upoštevati vsa priporočila lečečega zdravnika in upoštevati vsaj več neizpodbitnih pogojev za natančnejši rezultat.

Glede na način zbiranja materiala za pregled je treba upoštevati, da:

• za diagnostiko z uporabo venske krvi bolnik mora biti testiran na prazen želodec, pri čemer je izključena celo poraba tekočine;
• za preiskavo brisa Vsaj nekaj dni se je treba vzdržati spolnih odnosov, zvečer je dovoljeno izvajati higieno genitalij, vendar ne na dan testa. Vredno je izbrati optimalen čas za izvedbo študije ob upoštevanju: dva dni pred ali po menstrualnem ciklusu;
• za kateri koli način zbiranja materiala nekaj tednov pred testom po posvetovanju z zdravnikom prenehajte uporabljati antibakterijska zdravila, saj lahko to vpliva na zanesljivost rezultata;
• za urinski test Za ugotavljanje prisotnosti patogenov je potrebno ne le vzdrževati sterilnost in higieno, temveč tudi zagotoviti kakovost zbranega materiala za raziskave, ki daje natančnejše informacije. Zato je dovoljeno počakati 2-3 ure od zadnjega uriniranja pred zbiranjem urina ali uporabiti jutranji vzorec, ki daje veliko verjetnost, da pokaže prisotnost vnetnega procesa.

Aplikacija PCR in odkrite bolezni

Pri iskanju povzročiteljev številnih bolezni ne smemo zanemariti zgoraj navedenih priporočil, predpisan pregled pri zdravniku z diagnostično metodo PCR pa lahko zaščiti ne le odraslega, ampak tudi majhnega, še nerojenega otroka v maternici. resni zapleti.

Dejansko je pogosteje ženska polovica prebivalstva tista, ki trpi za določenimi vrstami virusov (HPV), kar znatno poveča verjetnost raka materničnega vratu ali neplodnosti. In glede na možne negativne vplive na potek nosečnosti in razvoj ploda je treba upoštevati, da je različne skupine mikroorganizmov, ki se prenašajo spolno ali imajo imunsko pomanjkljivost, težko uvrstiti v eno ali drugo skupino patogenov, saj so zelo medsebojno povezani (na primer okužbe s TORCH in SPO). Toda verižna reakcija s polimerazo lahko najde tujo strukturo in identificira specifično vrsto virusne DNK v ženskem telesu.

Dešifriranje rezultatov analize vam omogoča, da potrdite ali ovržete prisotnost bolezni. Ker zajema širok spekter patogenov, je takšna analiza zelo pomembna za pravočasno odkrivanje številnih okužb, kot so:

• odkrivanje okužbe s HIV. Huda okvara imunosti zaradi okužbe, ki prizadene predvsem imunokompetentne celice, prisotne na površini imunskega sistema na receptorjih CD4, ki nato izgubijo sposobnost zaščite pred okužbami in se prenehajo odzivati ​​na prisotnost virusne RNA v krvni plazmi. V primeru pozitivnega rezultata pri anonimnem pregledu se ponovi z dodatkom dodatnih študij;
• virusni hepatitis, najpogosteje hepatitis C(ki vsebuje RNA patogena), ki ga je zaradi enostavne prenosljivosti težko diagnosticirati z drugimi metodami, saj je PCR metoda bolj optimalna za prepoznavanje povzročitelja v krvi ali biopsiji jeter. se manifestira v pozni fazi in tvori maligni vnetni proces. Vendar je vredno upoštevati, da če je pri testiranju na prisotnost protiteles v krvi (AB) rezultat pozitiven, analiza PCR pa daje negativen rezultat, lahko to kaže na prisotnost virusa v telesu v zelo nizki količini ali pa so prizadete celice v čakalni fazi v genomu jetrnih celic, ne da bi izstopile v krvni obtok. V takih primerih bo za končno diagnozo in metodo zdravljenja opravljena vrsta ponovljenih študij;
• onkogeni virusi, kot je HPV(humani papiloma virus), ki ima več kot 100 različnih vrst virusov, spolno prenosljivih ali med medicinskimi posegi, okužba novorojenčka od matere poteka skozi porodni kanal, če je prenašalka okužbe s papiloma virusom;
• SPO(spolno prenosljive okužbe);
• primeren za odkrivanje vseh spolno prenosljivih bolezni(, gardnerellosis,) in TORCH okužbe;
• kaže z veliko natančnostjo prisotnost okužbe z mononukleozo, za katero je značilna poškodba limfnega in retikuloendotelijskega sistema (povečane bezgavke, vranica, jetra), je mogoče odkriti z diagnostiko PCR, pri čemer kot testni material vzamemo krvni serum. Glede na zunanje parametre se lahko Filatovova bolezen kaže kot izpuščaji, žolčnost kože, bel premaz na jeziku.
• , ki prodre v kri bolnikov z aidsom in tistih, ki so bili podvrženi presaditvi organov z uporabo zdravil za zatiranje imunskega sistema;
• herpetična okužba, ki predstavlja eno ali drugo vrsto herpesa, ki lahko prizadene genitalije, sluznico oči ali kožo;
• tuberkuloza. Če so prisotni glavni simptomi bolezni, je po rezultatih bronhoskopije predpisan PCR test, ki omogoča diagnosticiranje aktivne stopnje tuberkuloze veliko hitreje kot z bakteriološko ali bakterioskopsko metodo;
• virusne nalezljive bolezni, kot je npr klopni encefalitis(Borelioza). Zanj so značilne poškodbe celic živčnega sistema, zastrupitev, vnetje možganov in kasnejši razvoj paralize. Za odkrivanje antigena z diagnostiko PCR se vzame kri in cerebrospinalna tekočina za izolacijo virusa RNA.
• odkrivanje okužbe s Helicobacter pylori(ki vodi do kroničnega gastritisa, peptičnega ulkusa, želodčnega tumorja) z uporabo PCR diagnostike vam omogoča odkrivanje DNK (genskega materiala) Helicobacter pylori v biopsiji, blatu, slini, razlikovanje sevov glede na stopnjo malignosti.

PCR diagnostika okužb se razvija pospešeno in se uspešno uporablja v onkologiji, ginekologiji, urologiji, gastroenterologiji, virologiji, seznam pa se nenehno povečuje, vendar ni omejen na iskanje povzročiteljev nalezljivih bolezni. Med drugimi praktičnimi aplikacijami metode PCR lahko izpostavimo tudi uporabo raziskav za ugotavljanje očetovstva in identifikacijo posameznikov.

V našem sodobnem času se molekularna genetika pogosto uporablja v različnih vejah medicine. Od svojega začetka je postal eden najbolj učinkovite načine diagnozo ter omogočil hitro in natančno prepoznavanje okužb v človeškem telesu. Če morate opraviti DNK diagnostiko v Moskvi, vas vabimo, da uporabite storitve klinike Euromedprestige. Strokovnjaki našega centra imajo bogate izkušnje na področju genetske analize in zagotavljajo visoko natančno testiranje DNK materiala v najkrajšem možnem času!

Zakaj se DNK diagnostika izvaja v Moskvi?

Diagnostika DNK se nanaša na širok spekter študij, ki se uporabljajo v mikrobiologiji za prepoznavanje nalezljivih bolezni. V zadnjih letih se virusi in bakterije pospešeno razvijajo in razvijajo, vse več jih je, vse težje jih je prepoznati. Uporaba genetskih metod omogoča, da v testnem vzorcu najdemo že posamezne mikroorganizme in v enem biološkem vzorcu identificiramo več patogenov hkrati.

Najpogostejša tehnika, ki se uporablja za DNK diagnostiko v Moskvi na naši kliniki, je PCR (verižna reakcija s polimerazo). Pri njegovem izvajanju pride do večkratnega selektivnega kopiranja posameznih delov nukleinske kisline DNA, ki se izvaja s pomočjo encimov (kompleksnih beljakovinskih molekul). Reakcija se izvaja v posebnem aparatu - termičnem ciklerju, ki periodično segreva in ohlaja epruvete z vzorcem, nato pa informacije v realnem času prikazuje na zaslonu v obliki grafov.

Možnosti raziskav, ki potekajo, so precej velike. Z njegovo pomočjo je mogoče določiti veliko število bolezni, vključno s skoraj vsemi spolno prenosljivimi okužbami:

• ureaplazma;
• klamidija;
• glive Candida;
• gardnerela;
• trihomonas;
• gonokoki in drugi.

Pogosto se pojavijo situacije, ko mora zdravnik ugotoviti učinkovitost terapije ali stopnjo ozdravitve bolezni - in v tem primeru DNK diagnostika v Moskvi postane preprosto nenadomestljiva. Šteje se, da je še posebej pomembno v prisotnosti skritih okužb, ki jih je težko odkriti z mikroskopom.

Metoda PCR je preprosta za izvedbo in ima številne prednosti:

• Visoka specifičnost - pri testiranju se v vzorcu izolira fragment DNK, ki je značilen le za določenega povzročitelja.
• Preobčutljivost - okužbo lahko odkrijemo tudi, če testni material vsebuje samo eno celico virusa ali bakterije.
• Vsestranskost - za postavitev diagnoze lahko uporabimo kateri koli biološki material, saj se okužba pogosto nahaja v vseh tkivih.
• Neposredno odkrivanje - za razliko od mnogih drugih metod PCR pomaga identificirati patogena ne s posrednimi znaki, temveč z njegovo neposredno prisotnostjo v zbranem materialu.
• Možnost predkliničnega testiranja DNK v Moskvi - patogene je mogoče odkriti še preden se pojavijo simptomi, tudi med inkubacijsko dobo.

0Array ( => Analize) Array ( => 2) Array ( =>.html) 2

Kako se pripraviti na pregled

Za identifikacijo patogena je dovoljeno uporabiti različne materiale - kri, sputum, urin, strganje epitelija iz nožnice, materničnega vratu ali sečnice. Natančnost analize je v veliki meri odvisna od sterilnosti pri zbiranju materiala. Ker ima PCR povečano občutljivost, lahko vsaka kontaminacija vzorca popači dobljeni rezultat.

Pomembno vlogo pri zanesljivosti diagnoze igra predhodna priprava bolnika na študijo. Ne povzroča težav in zagotavlja naslednja priporočila:

• 1 mesec pred testom je treba prenehati jemati antibiotike.
• Kri za DNK diagnostiko v našem centru v Moskvi darujemo na tešče zjutraj.
• Pri darovanju urina zberite prvi jutranji del urina v sterilno posodo po skrbni higieni genitalij.
• Pri pregledu na spolno prenosljive okužbe je treba 72 ur pred odvzemom izključiti intimno življenje in uriniranje 3-4 ure. Od prejšnjega dne včeraj ne smete izvajati higiene genitalij.

Natančnost diagnostike DNK v Moskvi v našem centru

Vse teste v stenah našega centra izvajajo izključno certificirani strokovnjaki. Laboratorij je opremljen z najnovejšimi dosežki na področju DNK testiranja, kar zmanjšuje možnost človeške napake. Visokotehnološka oprema, ki jo uporabljajo specialisti Euromedprestige za DNK diagnostiko v Moskvi, omogoča pridobivanje rezultatov z natančnostjo do 97%.

Zahvaljujoč naprednemu znanstvenemu in tehničnemu razvoju metoda nima analogov v razmerju med kakovostjo in ceno. Z nizkimi stroški dobi bolnik možnost, da hitro ugotovi svojo diagnozo in začne zdravljenje ugotovljene bolezni, še preden začne povzročati zaplete.

gastroenterologija diagnostični kompleks - 5360 rubljev

SAMO V MARCU prihranek - 15%

PCR (verižna reakcija s polimerazo) je dosežek molekularne biologije, ena glavnih metod klinične laboratorijske diagnostike poznega 20. in zgodnjega 21. stoletja, ki prinaša ogromno koristi na različnih področjih medicinske znanosti.

Torej, tudi če med milijoni celic človeškega telesa ni izgubljen sam živi virus, ampak le delček njegove DNK, potem bo PCR, če ga nič ne moti, verjetno kos nalogi in poroča o prisotnosti »tujca« s pozitivnim rezultatom. To je bistvo PCR in njegova glavna prednost.

Prednosti in slabosti

Za laboratorij, ki izvaja PCR diagnostiko, veljajo najvišje zahteve glede opreme, testnih sistemov in usposobljenosti zdravstvenega osebja. To je visokotehnološki laboratorij, ki ima arzenal zelo občutljivih in zelo specifičnih reagentov, zato nima posebnih pomanjkljivosti. Razen če daje pozitiven rezultat v odsotnosti kliničnih manifestacij in s tem zdravnika postavi v dilemo: ali je vredno začeti zdravljenje ali ne?

Zdravnik, ki opazuje bolnika, začne dvomiti v zanesljivost rezultatov testa, saj ne vidi nobenih znakov bolezni. Toda glede na visoko občutljivost sistema PCR je treba spomniti, da zazna patogen tudi v predklinični fazi, pozitiven rezultat pa je v tem primeru bolj prednost kot slabost. Na podlagi tega se mora lečeči zdravnik sam odločiti o primernosti terapije ob upoštevanju drugih argumentov za in proti.

Prednosti diagnostike z uporabo verižne reakcije s polimerazo so očitne:

• Visoka specifičnost, ki doseže 100%, zaradi prisotnosti v izbranem vzorcu delcev nukleinske kisline, ki so lastne določenemu organizmu, vendar so tuje ljudem;
• Visokozmogljivo, ker je PCR visokotehnološka avtomatizirana tehnika, ki omogoča testiranje opraviti na dan vzorčenja in s tem pacienta razbremeniti nepotrebnih skrbi;
• PCR, ki deluje na enem vzorcu, je sposoben izvesti več študij in odkrivanje več patogenov, če ima tako nalogo. Na primer, pri diagnosticiranju klamidijske okužbe, kjer je PCR ena glavnih metod, poleg klamidije lahko odkrijemo tudi povzročitelja Neisseria (gonokok). Poleg tega to ne vpliva negativno na zanesljivost rezultatov;
• PCR testiranje med inkubacijsko dobo razkrije nevarne mikroorganizme, ko še niso imeli časa, da povzročijo znatno škodo telesu, tj. zgodnja diagnoza opozarja na prihajajoči razvoj patološkega procesa, kar vam omogoča, da se nanj pripravite in ga sprejmete v celoti.

Poleg tega, da bi se izognili nesporazumom, ki včasih nastanejo pri diagnostiki, se PCR ščiti tudi s tem, da lahko rezultate posname (foto, računalnik) in jih po potrebi uporabi v strokovne namene.

Norma za odgovore PCR je negativen rezultat., kar kaže na odsotnost fragmentov tujih nukleinskih kislin, bo pozitiven odgovor pokazal prisotnost okužbe v telesu, digitalne vrednosti kažejo na stanje virusa in njegovo koncentracijo v času testiranja. Vendar pa popolno interpretacijo analize opravi zdravnik, ki je opravil posebno usposabljanje na temo "PCR". Nima smisla poskušati sami razlagati rezultatov, saj lahko, kar se najverjetneje zgodi, narobe razumete in začnete vnaprej skrbeti.

Česa se PCR »boji«, kaj zmore in kako se nanj pripraviti?

Kot pri vseh drugih raziskavah, včasih so rezultati testa lažno pozitivni ali lažno negativni, kjer PCR ni izjema. To se lahko zgodi v naslednjih primerih:

1. Kršitve tehnološkega procesa na eni od stopenj reakcije;
2. Neupoštevanje pravil zbiranja materiala, njegovega shranjevanja ali transporta;
3. Prisotnost tujih nečistoč v materialu.

To pomeni, da je treba k PCR diagnostiki okužb pristopiti previdno, previdno in natančno, sicer lahko vzorci materiala spremenijo svojo strukturno strukturo ali popolnoma propadejo.

Faze PCR diagnostike. Napačne rezultate lahko povzročijo kršitve na kateri koli stopnji študije.

PCR diagnostika okužb spada med druge laboratorijske metode v kategorijo »zlatih standardov«, zato je z njo mogoče iskati povzročitelje številnih bolezni, ki na prvi pogled med seboj nimajo nič skupnega:

• Tuberkuloza različnih lokalizacij, pljučnica (vključno z atipično, ki jo povzroča klamidija);
• Okužbe v otroštvu (ošpice, rdečke, mumps, ošpice);
• davica;
• salmoneloza;
• Zoonotska nalezljiva bolezen - listerioza (za bolezen so značilni različni simptomi s poškodbo bezgavk, centralnega živčnega sistema in notranjih organov);
• Bolezni, ki jih povzroča virus Epstein-Barr (infekcijska mononukleoza itd.);
• Onkološka patologija, ki jo povzroča okužba s humanim papiloma virusom (HPV in njegove vrste);
• borelioza (lajmska bolezen, klopni encefalitis);
• Okužba s Helicobacter pylori, katere povzročitelj je mikrob Helicobacter pylori, ki živi v človeškem želodcu. Dokazano je, da Helicobacter povzroča nastanek raka želodca ali dvanajstnika;
• in skoraj vse.

PCR diagnostika spolno prenosljivih okužb je še posebej pomembna, saj tako povzročene bolezni pogosto potekajo dolgo časa brez kliničnih manifestacij, med nosečnostjo pa začnejo postajati vse bolj aktivne in tako ogrožajo zdravje in celo življenje otroka. otrok. Podobno se obnašajo. Nekateri izmed njih (»bakla«) se nanašajo tudi na SPO, zato je slednje treba podrobneje obravnavati. Bralec se bo lahko seznanil z najbolj priljubljenimi metodami v naslednjih razdelkih članka.

Kako se pravilno pripraviti za zanesljive rezultate?

Naj takoj opozorimo, da je priprava na PCR precej preprosta in ne zahteva posebnih naporov s strani bolnika. Izpolniti morate le tri preproste naloge:

1. 24 ur pred testom nimate spolnih odnosov;
2. Če želite vzeti in testirati kri iz vene, morate priti na prazen želodec, mimogrede, tudi ne morete piti;
3. Urin je treba darovati ponoči (zjutraj - v sterilnem kozarcu, kupljenem dan prej v lekarni).

PCR lahko deluje v katerem koli biološkem okolju

Metoda PCR ni "krvoločna" in zato sprejme vsak biološki medij, ki vsebuje domnevno povzročitelja okužbe. Izbira, kaj vzeti za raziskavo, ostaja pri zdravniku.

Tako lahko pri iskanju patogena poleg krvnega testa (čeprav je tudi ta primeren in se v večini primerov odvzame vzporedno z drugim materialom) uporabite:

• (izcedek iz urogenitalnega trakta);
• Strganje sluznice ustne votline, veznice, nazofarinksa, genitalnega trakta (za ženske, vzete iz materničnega vratu in nožnice, za moške - iz sečnice);
• slina;
• sperma;
• sok prostate;
• Placentalno tkivo in amnijska tekočina (amnijska tekočina);
• Sediment urina (po centrifugiranju), na primer za odkrivanje nekaterih SPO in Mycobacterium tuberculosis;
• Sputum in plevralna tekočina za isti namen;
• izločki;
• Cerebrospinalna tekočina, če sumite na okužbo centralnega živčnega sistema;
• Biopsijski material (bioptat), odvzet iz jeter, dvanajstnika, želodca itd.

K zgoraj navedenemu bi dodal, da bo materiala za testiranje v vseh primerih dovolj, tudi v strganih in izločkih, saj testiranje s PCR ne zahteva velikih količin, za analizo zadostuje že nekaj mikrolitrov, ki jih običajno vzamemo. v Eppendorfovo mikrocevko in poslana v testiranje.

Bolezni in uporaba PCR

HIV in verižna reakcija s polimerazo

Običajno se pri anonimnem pregledu v primeru pozitivnih rezultatov imunoblotinga diagnoza ponovi. Če je diagnoza potrjena, se bolniku predpišejo dodatni testi:

1. Določitev z imunološkimi reakcijami absolutnih vrednosti števila limfocitov CD 4 (imunokompetentnih celic - T-pomočnikov ali pomočnic), ki jih okužba najprej prizadene, nato pa izgubijo svoje osnovne lastnosti in ne morejo razlikovati med »samo« in "tuje". Virusno RNA, ki kroži v krvni plazmi, zamenjajo za normalne telesne celice in se nanje ne odzovejo;
2. Odkrivanje virusne RNA s PCR in izračun koncentracije virusnih delcev za določitev stopnje, resnosti patološkega procesa in prognoze na podlagi teh podatkov.. Seveda v zvezi s tem beseda "norma" ne obstaja, saj je reakcija vedno pozitivna, dešifriranje digitalnih vrednosti pa je v pristojnosti zdravnika.

PCR in hepatitis

Metoda PCR lahko odkrije patogene, najpogosteje se test uporablja za diagnosticiranje hepatitisa C, ki ga je z drugimi metodami težko odkriti.

Virus hepatitisa C (vsebuje RNA) po svojem obnašanju v človeškem telesu spominja na HIV. Zagozden v genom jetrnih celic (hepatocitov) tam ostaja in čaka na svoja vrata, ki lahko pridejo čez vsaj 2 leti, tudi čez 20 let, zato so ga zdravniki poimenovali »nežni morilec«. Hepatitis C povzroči nastanek malignega procesa v jetrnem parenhimu, ki se manifestira v kasnejših fazah. Imunski sistem vseh teh dogodkov ne opazi in virus zamenja za hepatocit. Res je, protitelesa proti virusu se proizvajajo v določenih količinah, vendar ne zagotavljajo dostojnega imunskega odziva. Za diagnosticiranje hepatitisa C ELISA ni zelo informativen, saj kaže, da je virus pustil sledi, vendar ni znano, ali je izginil sam. Pri HCV so znani primeri samoozdravitve, protitelesa proti virusu pa ostanejo in krožijo vse življenje (imunološki spomin). PCR je opazno pred nastankom protiteles in lahko zazna virusni delec v 1-1,5 tednih, protitelesa pa se lahko pojavijo v intervalu od 2 mesecev do šest mesecev.

PCR diagnostika v primeru suma na razširjenost virusa hepatitisa C v človeškem telesu je najbolj optimalna raziskovalna metoda, saj lahko le ta prepozna prisotnost "nežnega sovražnika" v pacientovi krvi ali biopsiji jeter.

Vendar pa včasih obstajajo primeri, ko so protitelesa pozitivna, vendar je rezultat PCR negativen. To se včasih zgodi, ko je količina virusa zelo majhna ali ko je v "mirujočem" stanju v jetrih, ne da bi vstopil v krvni obtok. Da pacient še vedno najde resnico, dobi še drugi test ali celo več kot enega.

Okužba s humanim papiloma virusom

Če do samoozdravitve ne pride, lahko tudi, ne da bi se kakor koli izkazalo, dolgo časa vztraja v telesu lastnika, ki tega niti ne sumi, saj PCR ni bil opravljen in ni bilo simptomov bolezen. Vendar pa prisotnost papilomavirusne okužbe, čeprav latentne, še zdaleč ni brezbrižna za zdravje ljudi, pri čemer nekatere vrste virusov, ki povzročajo raka (tipa 16, 18), predstavljajo posebno nevarnost.

Ženska polovica prebivalstva pogosteje trpi za HPV, saj virus raje prizadene žensko spolno področje, zlasti maternični vrat, kjer nekatere vrste virusov prispevajo k razvoju displastičnih procesov in nato raka materničnega vratu, če se displazija ne zdravi. in virus dobi prosto pot. Torej bo verižna reakcija s polimerazo zaznala virusno DNK in nato pokazala, da se je v telesu ženske naselil "slab" ali "dober" (onkogen ali neonkogen) tip.

Druge SPO in okužbe s TORCH

Očitno je, da lahko verižna reakcija s polimerazo najde katero koli tujo strukturo, sestavljeno iz nukleinskih kislin, zato je ta test primeren za identifikacijo vseh spolno prenosljivih bolezni in okužb s TORCH, vendar se ne uporablja vedno. Zakaj bi recimo izvajali tako drage študije za odkrivanje gonokokov, če obstajajo bolj dostopne in cenejše?

Okužbe TORCH in SPO so tako povezane, da je včasih težko določiti, v katero skupino je treba uvrstiti določenega patogena. Na splošno jih je težko razumeti, saj gre za precej raznolike skupine mikroorganizmov, ki so lahko spolno prenosljivi vedno ali samo pod določenimi pogoji (imunska pomanjkljivost), zanimivi pa so lahko le med nosečnostjo, zaradi možnega negativnega vpliva na njen potek in na plod.

PCR je glavna metoda za odkrivanje skritih okužb

Razvoj kliničnih manifestacij temelji na različnih patogenih, ki jih je mogoče odkriti le s PCR, ki je njegova glavna naloga, včasih skupaj z ELISA, včasih pa kot edini potrditveni test, zlasti če ni simptomov bolezni. Tako težko situacijo lahko ustvari polimikrobna okužba, ki poleg očitnih povzročiteljev vključuje tudi oportunistične patogene.

Ureaplazmo pogosto obravnavamo v povezavi z mikoplazmo. In to ni brez razloga. Te vrste, tako kot klamidija, niso ne virusi ne bakterije; živijo v celicah in so razvrščene kot spolno prenosljive bolezni, čeprav tudi njihova prisotnost v zdravem telesu ni neobičajna. Torej, da bi razlikovali zdravega nosilca od bolne osebe, so potrebne posebne metode, kjer se PCR šteje za najbolj zanesljivo, saj so zaradi strukturnih značilnosti in obnašanja teh mikroorganizmov druge študije neučinkovite.

Kar zadeva (tip 1, 2) in, ki prav tako spada med viruse herpesa (tip 5), je situacija tudi tukaj dvoumna. Stopnja okužbe svetovnega prebivalstva se približuje 100 %, zato je v tem primeru zelo pomembna identifikacija virusa in njegovega odmerka, kar je še posebej pomembno med nosečnostjo, saj je za odraslega virus, ki se je ukoreninil v njegovem telesu. pogosto ne povzroča težav in ne daje znakov bolezni.

Zato ne smemo zanemariti takšnega pregleda, ki ga predpiše zdravnik, saj je v nekaterih primerih verižna reakcija s polimerazo obvezna in potrebna metoda laboratorijske diagnostike, ki lahko zaščiti ne le žensko, ampak tudi majhno, nerojeno osebo pred resnimi zapleti.

Na koncu bi rad omenil, da tako čudovita metoda, kot je PCR, služi človeštvu že več kot 30 let. Hkrati cilji testa niso omejeni na iskanje povzročiteljev nalezljivih bolezni. Verižna reakcija s polimerazo, rojena na podlagi molekularne biologije, je neločljivo povezana z genetiko. uspešno uporablja v forenziki za osebno identifikacijo, v sodni medicini za ugotavljanje očetovstva, v veterini, če ima klinika za živali možnost nakupa drage opreme, pa tudi na drugih področjih (industrija, kmetijstvo itd.).

Video: PCR - bistvo in uporaba