Ang polymerase chain reaction (PCR) ay isang napakatumpak na paraan ng molecular genetic diagnostics, na ginagawang posible upang matukoy ang iba't ibang mga nakakahawang at namamana na sakit sa mga tao, kapwa sa talamak at talamak na yugto, at bago pa man maipakita ang sakit mismo.

Ang polymerase chain reaction (PCR) ay binuo noong 1983 ni Cary Mullis (USA), kung saan siya ay ginawaran ng Nobel Prize sa Chemistry noong 1993.

Ang pagsusuri sa PCR ay naging isang uri ng “gold standard” para sa karamihan ng mga impeksyon. Karamihan sa mga espesyalista ay nahaharap dito halos araw-araw at hindi maisip na gumawa ng pangwakas na diagnosis nang wala ito. Ang PCR ay kadalasang nagiging tanging reaksyon upang makita ang mga aktibong yugto ng sakit sa mga sandaling iyon kapag ang iba pang bacteriological, virological, immunological diagnostic na pamamaraan ay hindi gumagana.

Mga kalamangan ng PCR diagnostics sa modernong gamot:

Direktang pagtuklas ng presensya ng isang pathogen (ibig sabihin, isang partikular na rehiyon ng DNA o RNA ng pathogen) sa sample ng pagsubok.
Ang mataas na pagtitiyak ay ginagawang posible upang matukoy ang isang natatanging katangian ng rehiyon ng DNA o RNA ng isang partikular na pathogen, na nag-aalis ng posibilidad ng mga maling reaksyon.
Ang mataas na sensitivity ng paraan ng PCR ay ginagawang posible upang makita ang kahit na mga solong selula ng mga pathogen (mga virus, bakterya). Ang sensitivity ng PCR analysis ay 10-1000 cells sa test sample (halimbawa, ang sensitivity ng immunological at microscopic tests ay 103-105 cells lang).
Pag-unlad ng isang unibersal na pamamaraan ng PCR para sa pagtuklas ng iba't ibang mga pathogen. Ang object para sa pagsasaliksik ng PCR ay ang genetic material (DNA, RNA) ng pathogen. Ang pamamaraan ay nagbibigay-daan upang makita ang ilang mga pathogens mula sa isang biological sample.
Medyo mabilis na mga resulta ng pagsusuri. Ang isang kumpletong pag-aaral ay isinasagawa sa 4-4.5 na oras, mas madalas - nang kaunti pa.
Ang kakayahang makita ang mga pathogen bago ang pagsisimula ng mga sintomas ng sakit (preclinical diagnosis) at pagkatapos ng nakaraang sakit (retrospective diagnosis). Ang isang halimbawa ng preclinical diagnosis ay isang pagsusuri sa panahon ng pagpapapisa ng itlog (mula sa sandali ng impeksyon hanggang sa pagsisimula ng mga reklamo ng pasyente), pati na rin ang isang nakatagong impeksiyon (kapag walang mga sintomas, ngunit mayroon lamang data ng laboratoryo - PCR , Halimbawa). Isa sa mga mahalagang punto ng PCR diagnostics ay ang PCR sa archival material o biological remains, na mahalaga para sa pagkilala sa isang tao o paternity.

Sa kasalukuyan, ang mga diagnostic ng PCR ay sumasailalim sa makabuluhang pag-unlad. Ang pamamaraan mismo ay pinapabuti, ang mga bagong uri ng PCR ay lilitaw nang paulit-ulit, ang mga bagong sistema ng pagsubok para sa reaksyong ito ay pumasok sa medikal na merkado. Dahil dito, nagiging mas abot-kaya ang halaga ng PCR studies para sa malawak na hanay ng mga pasyente bawat taon.

Ano ang batayan ng pamamaraan ng PCR

Ang batayan ng polymerase chain reaction ay ang paulit-ulit na pagdodoble (amplification) ng isang partikular na seksyon ng DNA o RNA gamit ang mga enzyme sa laboratoryo. Bilang resulta, nabuo ang dami ng DNA o RNA na sapat para sa visual analysis. Sa panahon ng pag-aaral, tanging ang lugar na umaangkop sa tinukoy na mga kondisyon ang kinokopya, at sa sitwasyon lamang ng presensya nito sa sample ng pagsubok.

Halimbawa, ang isang materyal para sa pananaliksik, na ipinapalagay ang pagkakaroon ng mga fragment ng DNA o RNA ng pathogen (laway, dugo, ihi, mga pagtatago mula sa mga genital organ), ay inilalagay sa isang espesyal na reaktor (amplifier). Dagdag pa, ang mga tiyak na enzyme ay idinagdag dito, na nagbubuklod sa DNA o RNA ng pathogen, at isang kopya nito ay na-synthesize. Ang pagkopya na ito ay nagaganap sa ilang yugto tulad ng isang "chain reaction", at sa huli, daan-daan at libu-libong kopya ang maaaring mabuo mula sa isang kopya ng genetic material. Pagkatapos ay darating ang pagsusuri at paghahambing ng resulta sa umiiral na database sa istraktura ng iba't ibang mga pathogen. Sa pamamagitan ng PCR, hindi mo lamang matukoy ang uri ng pathogen, ngunit nagbibigay din ng isang dami ng resulta ng pagsusuri, iyon ay, kung gaano karaming mga pathogen ang nasa katawan ng tao.

Ang paraan ng PCR ay kasalukuyang nagpapalawak ng saklaw ng patuloy na pananaliksik: ang pagpapakilala ng mga mutasyon, pag-splice ng mga fragment ng DNA, at malawakang ginagamit sa medisina, halimbawa, upang magtatag ng paternity, ang paglitaw ng mga bagong gene, at iba pa.

Anong mga impeksyon ang maaaring matukoy gamit ang mga diagnostic ng PCR

1) Impeksyon sa HIV (maaaring matukoy ang human immunodeficiency virus HIV-1)
2) Viral hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Nakakahawang mononucleosis (DNA ng Epstein-Barr virus - EBV)
4) Impeksyon ng Cytomegalovirus (DNA-CMV)
5) Herpetic infection (DNA - herpes simplex virus HSV type 1 at 2)
6) Mga STI (mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik) - ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis,
7) Tuberculosis (mycobacterium tuberculosis)
8) Mga oncogenic na virus - impeksyon sa papillomavirus (human papillomavirus (kabilang ang oncogenic species nito 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, at 59)
9) Borreliosis, tick-borne encephalitis
10) Listeriosis
11) Candidiasis (fungi ng genus Candida)
12) Impeksyon sa Helicobacter pylori (Helicobacter pylori)
at iba pa

Isinasaalang-alang ang spectrum ng mga pathogens, ang mga diagnostic ng PCR ay aktibong ginagamit sa gynecological, urological, infectious disease practice, pulmonology, phthisiology, gastroenterology, hematology, oncology, at iba pa.

Materyal para sa pananaliksik at mga panuntunan para sa koleksyon nito

Ang materyal para sa pananaliksik sa PCR, kung saan maaaring matukoy ang dayuhang DNA ng isang bacterium o DNA o RNA ng isang virus, ay maaaring iba't ibang biological media at likido ng tao: mucus, ihi, dugo, plema, pag-scrape ng mga epithelial cells, placental tissues, dugo , prostate juice, amniotic fluid, pleural fluid.

Kapag nagsusuri para sa mga sexually transmitted infections (STIs), ang mga lalaki at babae ay kumukuha ng mga pagtatago mula sa mga genital organ, isang pahid o pag-scrape mula sa cervix, isang pamunas o pag-scrape mula sa urethra (urethra), ihi.

Kapag sinusuri ang mga impeksyon (mga impeksyon sa herpetic, CMVI, mononucleosis, toxoplasmosis, hepatitis B, C, impeksyon sa HIV), ang dugo ay kinuha para sa PCR.

Para sa diagnosis ng nakakahawang mononucleosis, CMVI, herpetic infection, isang pamunas ay kinuha mula sa lalamunan, para sa pagsusuri para sa CMVI - ihi. Kadalasan para sa pagsusuri para sa mga sugat sistema ng nerbiyos sa isang bilang ng mga pag-aaral, ang cerebrospinal fluid ay kinuha.

Sa pulmonology, ang materyal ay plema, pleural fluid.

Kapag sinusuri ang mga impeksyon sa intrauterine - amniotic fluid, placental tissue.

Paghahanda para sa paghahatid ng materyal at mga diagnostic ng PCR

Halos lahat ng mga pasyente na sumasailalim sa mga diagnostic ng PCR ay may karapatang umasa sa isang maaasahan, tumpak at mabilis na resulta, na nakasalalay sa malaking lawak sa mga kakayahan ng laboratoryo at ang propesyonalismo ng katulong sa laboratoryo. Kasabay nito, marami ang hindi nag-iisip na ang pagiging maaasahan na ito ay higit sa lahat ay nakasalalay sa ating sarili, lalo na sa mga rekomendasyon ng dumadating na doktor, pamumuhay at ang kawastuhan ng materyal na sampling. Kapag nagsa-sample ng materyal, kinakailangan ang mga kundisyon na hindi kasama ang kontaminasyon (kontaminasyon) ng materyal at, nang naaayon, nagdududa sa objectivity ng pagsusuri.

Ang tamang paghahanda para sa paghahatid ng materyal ay hindi partikular na mahirap. Mayroong mga sumusunod na rekomendasyon ng mga doktor para sa mga pasyente:

1) hindi mamuhay nang sekswal isang araw bago ang paghahatid ng materyal;
2) dugo para sa pananaliksik ay ibinibigay sa umaga sa isang walang laman na tiyan (huwag kumain, huwag uminom);
3) kapag umihi, ang unang bahagi ng umaga ay kinokolekta sa isang malinis na sterile na lalagyan.

Mga deadline para sa pagsusuri ng PCR

Ang huling resulta ay handa na sa 1.5-2 araw pagkatapos ng paghahatid ng materyal. Sa ilang mga kaso, ang resulta ay handa na sa unang araw.

Interpretasyon ng mga resulta ng PCR

Negatibo ang resulta ng PCR ay nagpapahiwatig na walang mga bakas ng mga nakakahawang ahente ang natagpuan sa materyal na pagsubok sa oras ng paghahatid nito. Karamihan sa mga kaso ay nagpapakita ng kawalan ng impeksiyon na sinubukang matagpuan sa sample ng pagsubok.

Positibo ang resulta ng PCR ay nagpapahiwatig ng pagtuklas ng mga bakas ng impeksyon sa biological sample na pinag-aaralan. Sa mahusay na katumpakan, ang isang positibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng impeksyon sa isang naibigay na oras.

May mga sitwasyon kung ang PCR ay positibo, ngunit imposibleng pag-usapan ang tungkol sa isang aktibong impeksiyon - ito ang tinatawag na "malusog na karwahe" nang walang klinikal na sintomas isang sakit na hindi nangangailangan ng paggamot, ngunit nangangailangan ng dynamic na pagmamasid ng isang doktor. Ito ay mas madalas na sinusunod sa isang bilang ng mga impeksyon sa viral (HPV, CMVI, impeksyon sa EBV, impeksyon sa herpes, at iba pa) sa mga materyales tulad ng laway, pag-scrape ng cervical canal, urethra, iyon ay, mula sa isang lokal na pokus. Gayunpaman, hindi natin dapat kalimutan na ang paghahatid ng impeksyon mula sa mga carrier sa malusog na tao ay posible, tulad ng paglipat sa talamak na anyo mga sakit na may pag-activate ng proseso. Kung positibo ang PCR sa dugo, hindi na ito carrier state at nangangailangan ng partikular na paggamot.

Ang quantitative na resulta ng PCR ay sinusuri lamang ng isang doktor nang paisa-isa para sa isang partikular na impeksyon nang hiwalay at walang mga pangkalahatang gradasyon. Batay sa dami ng resulta ng PCR, matutukoy ng doktor ang antas ng aktibidad ng impeksyon at itakda ang yugto ng sakit, na tiyak na makakaapekto sa kurso at dosis ng mga iniresetang gamot.

Isa sa mga huling kapana-panabik na tanong: gaano katumpak ang mga diagnostic ng PCR?

Mayroong 3 kahulugan para sa pagsusuri ng PCR:

1. Katumpakan (na may mataas na antas ng posibilidad, ang pagtuklas o kawalan ng impeksyon ay posible).
2. Pagtitiyak (katumpakan sa pagtuklas ng isang partikular na impeksiyon).
3. Sensitivity (kahit na may mababang nilalaman ng genetic na materyal ng mga pathogen sa sample ng pagsubok, ang impeksyon ay makikita).

Ang polymerase chain reaction ay halos hindi nagbibigay ng mali positibong resulta(iyon ay, walang mga positibong sample kung saan walang impeksyon). Ang mga maling negatibong resulta ay bihira (mas madalas na ito ay dahil sa kawalan ng aktibong impeksiyon sa isang tao sa ngayon). Halimbawa, nakatagong impeksiyon, talamak na impeksiyon na wala sa aktibidad.

Ang espesyalista sa nakakahawang sakit na si Bykova N.I.

Video kung bakit at paano kumuha ng PCR test para sa mga impeksyon

Ang lubos na nagbibigay-kaalaman na paraan ng PCR (polymerase chain reaction) ay nagbibigay-daan sa maagang pagtuklas ng iba't ibang genetic at nakakahawang sakit na nangyayari nang talamak o talamak. Bukod dito, maaari silang makilala kahit na sa yugto na hindi sila nagpapakita ng anumang mga sintomas. Kadalasan, ginagamit ang pagsusuri ng PCR upang makita ang mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik (STD, STI).

Ang pagsusuri ng PCR ay tumutukoy sa isang molecular diagnostic method, na batay sa maraming pagtaas sa maliliit na konsentrasyon ng ilang mga fragment ng nucleic acid (DNA) ng pathogen sa anumang biological na materyal (pahid mula sa cervix, puki, urethra, dugo, laway, sputum, atbp.) at paghahambing ng DNA o RNA nito sa isang database ng mga kilalang species ng mga nakakahawang ahente.

Ang pamamaraan ay binuo ng American Carrie Mullis noong 80s ng huling siglo. Noong 1993, nanalo ang siyentipiko ng Nobel Prize sa Chemistry. Ngayon, ang pag-aaral ng PCR ay itinuturing na isang uri ng "gold standard" para sa pag-diagnose ng karamihan sa mga impeksyon. Ang pagsusuri sa PCR ay malawakang ginagamit sa medikal na kasanayan upang linawin ang likas na katangian ng sakit at gumawa ng tumpak na pagsusuri. Kadalasan mayroong mga kaso kapag ang lahat ng kilala immunological, virological at mga pamamaraan ng bacteriological huwag magtrabaho. Pagkatapos ay ang PCR ang magiging tanging paraan upang matukoy ang aktibong yugto ng sakit.

Mga kalamangan ng mga diagnostic ng PCR sa iba pang mga pamamaraan

Ang pamamaraan ng PCR ay natagpuan ang malawak na aplikasyon sa modernong gamot dahil sa isang bilang ng mga hindi mapag-aalinlanganang mga pakinabang. Pag-usapan natin ang mga ito nang mas detalyado.

Kakayahang direktang tuklasin ang pagkakaroon ng isang pathogen

Marami sa mga tradisyunal na pamamaraan ng diagnostic ay batay sa pagpapasiya ng mga marker - mga protina na mga basurang produkto ng pathogen. Ang ganitong prinsipyo ng diagnostic ay maaari lamang magbigay ng hindi direktang kumpirmasyon ng patolohiya. Ang paraan ng PCR ay nagbibigay ng direktang pagkakakilanlan ng pathogen, dahil kinikilala nito ang mga partikular na seksyon ng DNA ng mga pathogenic na organismo.

Mataas na pagtitiyak

Ang pamamaraan ng PCR ay lubos na tiyak dahil sa katotohanang pinapayagan nitong makita ang mga fragment ng DNA na katangian lamang para sa isang partikular na nakakahawang ahente. Kapag gumagamit ng mga immunological na pamamaraan, nananatiling posible na makakuha ng maling resulta (ang mga pagkakamali sa diagnosis ay nauugnay sa mga cross-reacting antigens). Tulad ng para sa PCR, ang mga error ay hindi kasama dito, dahil ang pagtitiyak sa kasong ito ay tinutukoy ng pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng mga primer.

Mataas na sensitivity

Sa pamamagitan ng pamamaraang ito, kahit na ang mga solong pathogen ay natutukoy. Ang mga nakakahawang ahente ay napansin sa katawan ng tao kahit na ang ibang mga pamamaraan ng diagnostic ay hindi nilinaw ang sitwasyon (pinag-uusapan natin ang tungkol sa iba't ibang immunological microscopic at bacteriological na pamamaraan ng pananaliksik).

Nagpapakita kami ng data para sa paghahambing. Ang sensitivity ng microscopic at immunological na pamamaraan ay 103-105 na mga cell, at ang sensitivity ng PCR ay 10-100 na mga cell bawat sample.

Universality ng pamamaraan

Ang pamamaraan ng PCR ay batay sa pag-aaral ng DNA ng mga pathogenic na organismo. Sa panahon ng pag-aaral, ang mga fragment ng RNA o DNA ay tinutukoy na partikular sa mga partikular na nakakahawang ahente. Dahil ang lahat ng nucleic acid ay may katulad na komposisyon ng kemikal, kung kailan pagsusuri sa laboratoryo maaaring ilapat ang pinag-isang pamamaraan. Nangangahulugan ito na ang pag-aaral ng isang sample ay ginagawang posible upang makilala ang ilang mga pathogen nang sabay-sabay.

Mabilis na resulta

Ang pamamaraan na ito ay hindi nangangailangan ng paglilinang ng mga kultura ng mga pathogen, na tumatagal ng maraming oras. Salamat sa paggamit ng isang pinag-isang teknolohiya para sa pagproseso ng materyal at pagtukoy ng mga produkto ng reaksyon, pati na rin ang isang awtomatikong proseso ng amplification, ang buong pamamaraan ng pananaliksik ay tumatagal lamang ng ilang oras.

Kakayahang tuklasin ang mga nakatagong impeksyon

Ginagawang posible ng PCR technique na epektibong magsagawa ng preclinical diagnostics (detection of pathogens bago ang simula ng mga sintomas) at retrospective diagnostics (determination of pathogens pagkatapos ng isang sakit). Kaya, ang preclinical diagnosis ay napakahalaga kapag sinusuri ang isang pasyente sa tagal ng incubation posibleng sakit - pagkatapos ng di-umano'y impeksiyon bago ang simula ng mga unang palatandaan.

Isa sa mga mahalagang bentahe ng PCR ay ang posibilidad ng paggamit ng biological residues o archival materials para sa pagsusuri. Ginagawa nitong posible na makilala ang pagka-ama at pagkakakilanlan.

Sa ngayon, patuloy na umuunlad ang mga pamamaraan ng diagnostic ng PCR. Ang teknolohiya ng pagsusuri mismo ay pinapabuti, at ang mga bagong uri ng PCR ay umuusbong din. Ang mga makabagong sistema ng pagsubok para sa reaksyong ito ay ipinakilala sa medikal na kasanayan. Salamat sa mabilis na pag-unlad ng agham, ang gastos ng pamamaraan ay bumababa, at ngayon ang pagsusuri sa PCR ay maaaring ilapat sa maraming kategorya ng mga pasyente.

Ang pamamaraang diagnostic na ito ay batay sa maramihang pagdodoble ng isang partikular na seksyon ng RNA o DNA. Ang prosesong ito ay isinasagawa sa laboratoryo gamit ang mga espesyal na enzyme. Bilang resulta, maraming mga seksyon ng DNA (RNA) ang nabuo kung kinakailangan para sa visual na pagsusuri. Sa panahon ng pamamaraan, tanging ang lugar na naaayon sa tinukoy na mga kondisyon ay kinopya (kung ito ay naroroon sa pinag-aralan na sample).

Ang biological na materyal na kailangang suriin para sa pagkakaroon ng DNA o RNA ng mga pathogen ay inilalagay sa isang amplifier. (Depende sa partikular na sitwasyon, ang dugo, ihi, laway, na lumabas mula sa maselang bahagi ng katawan ay kinuha para sa pagsusuri). Ang mga espesyal na enzyme ay idinagdag sa mga sample. Nagbubuklod sila sa RNA o DNA ng mga pathogenic microbes, at nagsisimula ang synthesis ng mga kopya. Ang pagkopya ay isang multi-stage na proseso na nagpapatuloy tulad ng isang chain reaction. Bilang resulta, maaaring lumabas ang daan-daan o kahit libu-libong kopya.

Sa susunod na yugto ng mga diagnostic, ang mga resulta ay sinusuri at inihambing sa database ng mga nakakahawang ahente.

Ang pamamaraan ng PCR ay hindi lamang ginagawang posible upang matukoy ang uri ng pathogenic na organismo, ngunit nagpapahintulot din sa amin na gumawa ng mga konklusyon tungkol sa bilang ng mga nakakahawang ahente sa katawan ng tao.
Sa ngayon, ang paggamit ng naturang mga teknolohiya ay nagbubukas ng magagandang pagkakataon sa pag-aaral ng mutations, splicing ng mga segment ng DNA. Sa modernong medisina, ang pamamaraan ay nagsimulang gamitin upang matukoy ang pagiging ama, kilalanin ang mga bagong gene, at marami pang iba.

Dahil sa versatility nito, malawak na ginagamit ang PCR method sa urology, gynecology, pulmonology, oncology, hematology, phthisiology, infectious disease practice at iba pang larangan ng medisina.

Materyal para sa pagsusuri ng PCR

Para sa PCR diagnostics, ginagamit ang iba't ibang biological media at fluid na kinuha mula sa katawan ng tao: plema, mucus, laway, ihi, dugo, pag-scrape ng epithelial cells, placental tissues, pleural fluid, amniotic fluid, prostate juice, atbp.

Kapag nag-diagnose ng mga STD (STD), sinusuri ang mga discharge mula sa male at female genital organ. Upang gawin ito, magsagawa ng pahid o pag-scrape mula sa urethra o cervix. Ginagamit din ang ihi sa pananaliksik.

Upang makita ang mga impeksyon (herpes, mononucleosis, CMVI, toxoplasmosis, HIV, hepatitis B at C), ang dugo ay kinuha para sa pagsusuri. Kung may hinala ng pinsala sa nervous system, ang cerebrospinal fluid ay kinuha.

Para sa pulmonological studies, ginagamit ang pleural fluid at plema.

Upang makita ang mga impeksyon sa intrauterine, sinusuri ang mga tisyu ng inunan at amniotic fluid.

PCR para sa mga STI at iba pang impeksyon

Anong mga impeksyon ang maaaring matukoy ng pagsusuri ng PCR

Impeksyon sa HIV (maaaring makita ang human immunodeficiency virus HIV-1).

Viral hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV).

Mga STI (mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik) - ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis.

Nakakahawang mononucleosis (DNA ng Epstein-Barr virus - EBV).

Impeksyon ng Cytomegalovirus (DNA-CMV).

Herpetic infection (DNA - herpes simplex virus HSV type 1 at 2).

Tuberculosis (mycobacterium tuberculosis).

Mga oncogenic na virus - impeksyon sa papillomavirus (human papillomavirus (kabilang ang oncogenic species nito 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, at 59).

Borreliosis, tick-borne encephalitis.

Listeriosis.

Candidiasis (fungi ng genus Candida).

Impeksyon ng Helicobacter pylori
at iba pa.

Paghahanda at pagsusumite ng pagsusuri sa PCR

Mga pasyente na nagsumite ng materyal para sa PCR diagnostic, asahan na makakuha ng mabilis at tumpak na resulta. Kasabay nito, ang isang mahalagang punto ay dapat isaalang-alang - ang pagiging maaasahan ng mga diagnostic ay nakasalalay hindi lamang sa propesyonalismo ng mga espesyalista at ang mga kakayahan ng medikal na laboratoryo. Upang ang pag-aaral ay maging impormasyon, ang pasyente mismo ay dapat gumawa ng pagsisikap. Kaya, kinakailangan na mahigpit na sumunod sa lahat ng mga rekomendasyon ng doktor at maingat na sundin ang mga patakaran para sa paghahanda para sa koleksyon ng materyal. Napakahalaga na maiwasan ang kontaminasyon ng mga biyolohikal na sample, kung hindi, ang mga resulta ng pagsusuri ay mababaluktot.

Paghahanda para sa pagsusuri ng PCR

Ang paghahanda para sa pamamaraan ay hindi nauugnay sa mga espesyal na paghihirap. Tandaan lamang ang ilang mga patakaran:

Ang dugo para sa pagsusuri ng PCR ay kinukuha nang walang laman ang tiyan. Karaniwang kinukuha ang dugo mula sa isang ugat sa umaga gamit ang isang sterile na karayom ​​sa isang espesyal na lalagyan.

Sa araw bago ang pag-sample ng materyal, ipinapakita ang pag-iwas sa pakikipagtalik kapag kumukuha ng PCR smear para sa mga STI.

Para sa pagsusuri ng ihi para sa PCR, ang unang bahagi ay kinuha, ang lalagyan ay dapat na sterile.

Paano kumuha ng pagsusuri sa PCR sa mga kalalakihan at kababaihan

Ang pagsusuri ng PCR ay kinuha mula sa mga kalalakihan at kababaihan sa silid ng pagbabakuna, ito ay dugo mula sa isang ugat, laway, pamunas mula sa pharynx, tonsil, pamunas mula sa nasopharynx, atbp. Ang paraan ng pagkolekta ay hindi naiiba.

Ang PCR para sa mga STI ay kinukuha sa antenatal clinic sa panahon ng gynecological examination sa mga kababaihan, ito ay mga pahid mula sa ari, cervix, at urethra. Sa mga lalaki, sa panahon ng pagbisita sa isang andrologist o venereologist, ito ay isang pahid mula sa urethra.

Mga scheme para sa sampling na materyal para sa PCR

Gaano katagal ang PCR

Ang mga pasyente ay hindi kailangang maghintay ng matagal para sa mga resulta ng pagsusuri sa PCR. Ang buong pamamaraan ng pagsusuri ay karaniwang tumatagal mula sa ilang oras (real-time na PCR) hanggang 2-10 araw. Bilang isang patakaran, natatanggap ng pasyente ang mga resulta ng pagsusuri sa loob ng 2-5 araw, hanggang sa maximum na 10 araw, depende ito sa uri ng pagsusuri. Ang pinakamahabang panahon ay ang pagsusuri ng dugo ng PCR para sa HIV at hepatitis, at ang pinakamaikling ay ang mga pahid at mga scrapings - 2-3 araw.

Ang isang negatibong resulta ay nagpapahiwatig na sa sandaling ito ay walang mga bakas ng mga nakakahawang ahente na nakita sa biological na materyal. Iyon ay, ang impeksiyon kung saan isinagawa ang pagsusuri ay wala.

Ang isang positibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagtuklas ng mga bakas ng pathogen sa mga biological sample. Nangangahulugan ito na sa panahong ito ay mayroong impeksiyon sa katawan ng tao.
Maaaring may mga kaso kapag ang PCR ay nagbibigay ng isang positibong resulta, ngunit ang isang aktibong nakakahawang proseso ay hindi sinusunod. Ito ay isang phenomenon na tinatawag na "healthy carriage." Ang paggamot sa naturang pasyente ay hindi kinakailangan, ngunit dapat silang nasa ilalim ng patuloy na dynamic na pangangasiwa. Ang ganitong mga sitwasyon ay tipikal para sa mga impeksyon sa viral: Epstein-Barr virus (EBV), genital herpes, cytomegalovirus infection (CMVI), human papillomavirus (HPV), kung saan ang mga sample ay kinuha para sa pananaliksik mula sa lokal na foci (scraping of the urethra, cervical canal, laway). Kasabay nito, hindi natin dapat kalimutan na ang isang malusog na carrier ay maaaring magpadala ng impeksyon sa ibang mga tao. Bilang karagdagan, ang pag-activate ng nakakahawang proseso ay hindi ibinukod. Sa mga kaso kung saan ang PCR ay nagbibigay ng positibong resulta sa isang pagsusuri sa dugo, hindi na ito maituturing na carrier. Ang ganitong mga pasyente ay nangangailangan ng tiyak na paggamot para sa sakit na dulot ng nakitang pathogen.

Ang mga quantitative indicator ay walang mga pangkalahatang gradasyon. Ang mga ito ay sinusuri ng doktor nang paisa-isa para sa bawat partikular na impeksiyon. Ang isang quantitative na resulta ay ginagawang posible upang matukoy kung gaano kaaktibo ang impeksiyon at upang matukoy ang yugto ng proseso.

Ang pagiging maaasahan ng paraan ng PCR

Upang suriin ang pagiging epektibo ng pamamaraan, mayroong tatlong pamantayan:

- Katumpakan- pagtuklas ng impeksiyon (o kawalan nito) na may mataas na antas ng posibilidad.

- Pagtitiyak– ang katumpakan ng pagtukoy ng isang tiyak na pathogen.

- Pagkamapagdamdam– ang posibilidad na makilala ang pathogen kahit na may maliit na halaga ng genetic material sa biological sample.

Kapag gumagamit ng paraan ng PCR, ang pagkuha ng mga maling positibong resulta ay halos imposible (iyon ay, kung ang pathogen ay wala, kung gayon positibong pagsubok hindi magiging).

Posible ang isang maling negatibong resulta, ngunit bihira itong mangyari. Ang mga katulad na sitwasyon ay lumitaw kung ang impeksyon ay hindi aktibo sa oras ng pag-aaral. Halimbawa, isang malalang impeksiyon na walang aktibidad o isang nakatagong impeksiyon.

Pagsusuri ng PCR: video

Mga diagnostic ng PCR(polymerase chain reaction) ay ginagamit upang tuklasin ang aktibong yugto ng sakit kasabay ng mga tradisyonal na pag-aaral, kapag walang reaksyon sa pamamagitan ng immunological at microbiological diagnostic na pamamaraan.

Para sa isang tiyak na panahon, ang mga diagnostic ng PCR ay ginamit lamang para sa mga layuning pang-agham, at simula lamang sa pagtatapos ng ika-20 siglo at simula ng ika-21, ang pagsusuri na ito ay naging isang uri ng "pamantayan ng ginto", na may malaking pakinabang sa iba't ibang larangan. ng gamot.

Ano ang kakanyahan ng PCR diagnostics?

Ang mga diagnostic ng PCR, sa kaibahan sa isang may kakayahang tuklasin ang mga bakas ng antibodies (AT), ay nagtatatag hindi lamang ng mga sanhi ng ugat. pathological kondisyon, ngunit nakikita rin ang pagkakaroon ng DNA o RNA sa isang partikular na lugar gamit ang mga enzyme sa laboratoryo.

Ang pagsusuri ng PCR ay lubos na tumpak, inaalis ang posibilidad ng mga maling reaksyon at hindi kinakailangan na kumuha ng dugo mula sa isang ugat para sa pagsusuri, isang maliit na halaga ng mga sample ng tissue, biological fluid ay sapat.

Sa variant sa itaas ng biological na kapaligiran ng materyal para sa pagsubok na naglalaman ng di-umano'y nakakahawang ahente, maraming mga opsyon ang maaaring italaga nang sabay-sabay sa pamamagitan ng desisyon ng doktor, kabilang ito ay maaaring:

• pahid(paglabas mula sa maselang bahagi ng katawan);
• pag-scrape mula sa mucosa(bibig, ilong, ari);
• laway, plema o pleural fluid;
• katas ng prostate, ang pag-aaral ng pagtatago ng prostate para sa pagkakaroon ng peste;
• placental tissue o amniotic fluid;
• pangkalahatang pagsusuri ng ihi upang pag-aralan ang sediment (pagkatapos ng centrifugation), kung kinakailangan, upang makita ang Mycobacterium tuberculosis;
• cerebrospinal fluid para sa pagtuklas ng mga nakakahawang sugat ng central nervous system;
• koleksyon ng mga cell o tissue(biopsy) mula sa atay, duodenum, tiyan, atbp.

Ang mga sample na ito ay inilalagay sa isang espesyal na reaktor at sinusuri sa pamamagitan ng paulit-ulit na pagdodoble (pagpapalakas) ng mga pinag-aralan na mga fragment ng DNA, sa pamamagitan ng paulit-ulit na mga siklo ng pagtitiklop at denaturation kasama ang pagdaragdag ng mga partikular na enzyme para sa synthesis. Ayon sa uri ng chain reaction, ang pamamaraang ito ay kinikilala ang uri at indibidwal na katangian ng DNA o RNA. Sa huli, ang proseso ng PCR sa panahon ng isang paghahambing na pagsusuri ng naka-clone na genetic na materyal ay ginagawang posible upang makilala kahit na ang mga solong selula ng isang live na virus, na madaling makilala ang ureaplasma mula sa mycoplasma o.

Mga kalamangan at kawalan ng mga diagnostic ng PCR

Ang PCR diagnostic na ito ay may parehong mga pakinabang at ilang mga disadvantages.

Mga pakinabang ng diagnostic:

• ang kahulugan ng pathogen ay nagbibigay ng direktang indikasyon ng presensya sa genetic na materyal ng isang hindi tipikal na seksyon ng DNA o RNA;
• Ang mga diagnostic ng PCR ay nagbibigay ng 100% katumpakan dahil sa pagkakaroon sa materyal ng pagsubok ng mga particle ng nucleic acid (DNA o RNA fragment) na katangian lamang ng isang partikular na virus o bacterium;
• mataas na sensitivity ng PCR system, kumpara sa iba pang mga diagnostic na pamamaraan. Ang pagsusuri ng PCR upang matukoy ang pagkakaroon ng isang pathogen ay sapat para sa isang cell ng isang live na virus (10-100 na mga cell sa isang sample), na ginagawang posible upang makita ang isang pathogenic microorganism sa isang maagang yugto ng sakit sa kawalan ng malubhang sintomas , at sa mga advanced na anyo;
• Ang high-tech na automated PCR amplification ay nagpapataas ng bilis ng pagsusuri sa pamamagitan ng pagsubok sa araw ng sampling (naglalaan ng hindi hihigit sa 4-6 na oras para sa diagnosis). Ito ay nagpapataas ng produktibidad at nagbibigay ng higit na kahusayan sa kulturang pamamaraan ng pananaliksik;
• ang versatility ng pagsusuri ay ginagawang posible, gamit ang genetic material ng DNA o RNA, na kinuha sa iba't ibang paraan, upang makita ang ilang pathogens mula sa isang biological sample.

Speaking of disadvantages, kung gayon, dahil sa pagiging sensitibo ng PCR system, ang isa sa mga hindi kasiya-siyang sandali ay:

• pagkakaiba-iba ng mga microorganism. Ang kawalan ay ang isang mutation ay likas sa mga microorganism, na humahantong sa isang pagbabago sa pinag-aralan na genotype ng pathogen. At ang PCR test system sa amplified region ng genome ay hindi makakahuli ng hybrid ng isang umuusbong na pathogen, tulad ng hindi nakikilala ng immune system ng tao, kaya walang magiging reaksyon sa pagtukoy sa pagkakaroon ng isang nakakahawang sakit. Ngunit para dito, ang iba't ibang mga pag-unlad ay isinasagawa upang mapabuti ang paraan ng PCR;
• ang posibilidad na makakuha ng maling positibo o maling negatibong resulta. Upang hindi makatagpo ng mga maling resulta sa isa sa mga yugto ng mga diagnostic ng PCR, dapat itong isagawa nang maingat, nang hindi lumalabag sa proseso, na sinusunod ang mga patakaran para sa pagkuha ng materyal. Maaaring baguhin ng mga sample ang kanilang istraktura o masira, na maaaring humantong sa isang maling negatibo o maling positibong resulta. Dapat itong maunawaan na ang gayong resulta ay maaaring kapag ang impeksiyon ay napatay na, ngunit ang mga patay na selula ay walang oras upang i-renew ang kanilang sarili at isinasaalang-alang sa panahon ng pag-clone. Samakatuwid, sa maagang mga petsa pagkatapos ng paggamot, ang iba pang mga pamamaraan ay ginagamit (halimbawa,), at pagkatapos ng kumpletong pag-aalis ng mga hindi aktibong pathogens mula sa katawan, isang pagsusuri-kontrol ng PCR ay isinasagawa. At ang dumadating na manggagamot ay gumagawa ng pangwakas na desisyon sa pagiging angkop ng therapy, na isinasaalang-alang ang lahat ng mga argumento "para sa" at "laban".

Paghahanda para sa mga diagnostic ng PCR at mga kondisyon para sa pagsusuri

Ito ay nagkakahalaga ng pagbibigay pansin sa simpleng pagsasanay sa PCR, para dito kinakailangan na mahigpit na sundin ang lahat ng mga rekomendasyon ng dumadating na manggagamot at obserbahan ang hindi bababa sa ilang hindi maikakaila na mga kondisyon para sa isang mas tumpak na resulta.

Depende sa paraan ng sampling na materyal para sa pagsusuri, dapat tandaan na:

• para sa mga diagnostic na may venous blood ang pasyente ay dapat na masuri sa walang laman na tiyan, hindi kasama ang paggamit ng likido;
• para magbigay ng pahid kinakailangang pigilin ang pakikipagtalik sa loob ng hindi bababa sa ilang araw, pinapayagan na magsagawa ng kalinisan ng mga genital organ sa gabi, ngunit hindi sa araw ng pagsubok. Ito ay nagkakahalaga ng pagpili ng pinakamainam na oras para sa pag-aaral, na isinasaalang-alang: dalawang araw bago o pagkatapos ng menstrual cycle;
• para sa anumang paraan ng sampling dapat mong ihinto ang paggamit ng mga antibacterial na gamot ng ilang linggo bago ang paghahatid, pagkatapos kumonsulta sa iyong doktor, dahil maaaring makaapekto ito sa pagiging maaasahan ng resulta;
• para sa urinalysis upang matukoy ang pagkakaroon ng mga pathogens, kinakailangan hindi lamang upang obserbahan ang sterility at kalinisan, kundi pati na rin ang kalidad ng nakolektang materyal para sa pananaliksik, na nagdadala ng mas tumpak na impormasyon. Samakatuwid, ito ay katanggap-tanggap na maghintay ng 2-3 oras mula sa huling pag-ihi hanggang sa koleksyon ng ihi, o gumamit ng sample ng umaga, na nagbibigay ng mas mataas na posibilidad na magpakita ng pagkakaroon ng isang nagpapasiklab na proseso.

Paggamit ng PCR at nakitang mga sakit

Upang maghanap para sa mga sanhi ng mga ahente ng maraming mga sakit, ang mga rekomendasyon sa itaas ay hindi dapat balewalain, at ang inireseta na pagsusuri ng isang doktor gamit ang PCR diagnostic na pamamaraan ay maaaring maprotektahan hindi lamang ang isang may sapat na gulang, kundi pati na rin ang isang maliit, hindi pa isinisilang na bata sa sinapupunan mula sa malubhang komplikasyon. .

Sa katunayan, ang babaeng kalahati ng populasyon ang kadalasang dumaranas ng ilang uri ng mga virus (HPV), na makabuluhang pinatataas ang posibilidad ng cervical cancer o kawalan ng katabaan. At, dahil sa posibleng negatibong epekto sa kurso ng pagbubuntis at sa pag-unlad ng fetus, dapat tandaan na ang iba't ibang grupo ng mga mikroorganismo na nakukuha sa sekswal o may immunodeficiency ay mahirap maiugnay sa isa o ibang grupo ng pathogen. , dahil magkaugnay ang mga ito (halimbawa, mga impeksyon sa TORCH at mga STI ). Ngunit ang polymerase chain reaction ay nakakahanap ng isang dayuhang istraktura sa pamamagitan ng pagtukoy sa partikular na uri ng viral DNA sa babaeng katawan.

Ang pag-decipher sa mga resulta ng pagsusuri ay nagbibigay-daan sa iyo upang kumpirmahin o pabulaanan ang pagkakaroon ng mga sakit. Sumasaklaw sa isang malawak na hanay ng mga pathogen, ang naturang pagsusuri ay napakahalaga para sa napapanahong pagtuklas ng maraming mga impeksiyon, tulad ng:

• pagtuklas ng impeksyon sa HIV. Matinding kapansanan ng kaligtasan sa sakit sa pamamagitan ng isang impeksiyon na pangunahing nakakaapekto sa mga immunocompetent na selula na nasa ibabaw ng immune system sa mga CD4 receptor, na kasunod ay nawawala ang kanilang kakayahang ipagtanggol ang kanilang sarili laban sa mga impeksyon at huminto sa pagtugon sa pagkakaroon ng virus RNA sa plasma ng dugo. Sa kaso ng isang positibong resulta sa panahon ng isang hindi kilalang pagsusuri, ito ay paulit-ulit na may pagdaragdag ng mga karagdagang pag-aaral;
• viral hepatitis, kadalasang hepatitis C(naglalaman ng RNA pathogen), na, dahil sa madaling pagpapaubaya nito, ay mahirap i-diagnose sa pamamagitan ng iba pang mga pamamaraan, dahil ang paraan ng PCR ay mas pinakamainam para sa pagkilala sa pathogen sa biopsy ng dugo o atay. nagpapakita ng sarili sa isang huling yugto, na bumubuo ng isang malignant na proseso ng pamamaga. Gayunpaman, nararapat na isaalang-alang na kung ang resulta ay positibo sa panahon ng pagsusuri para sa pagkakaroon ng mga antibodies sa dugo (AT), at ang pagsusuri sa PCR ay nagbibigay ng negatibong resulta, ito ay maaaring magpahiwatig ng pagkakaroon ng isang virus sa katawan sa isang napaka mababang halaga, o ang mga apektadong selula ay nasa isang nakabinbing yugto sa genome ng mga selula ng atay na walang access sa daluyan ng dugo. Sa ganitong mga kaso, isang bilang ng mga paulit-ulit na pag-aaral ay isasagawa para sa panghuling pagsusuri at mga pamamaraan ng paggamot;
• mga oncogenic na virus tulad ng HPV(human papillomavirus) na may higit sa 100 iba't ibang uri ng virus, sexually transmitted o sa panahon ng mga medikal na pamamaraan, ang isang bagong panganak ay nahawaan sa pamamagitan ng birth canal mula sa ina kung siya ay carrier ng papillomavirus infection;
• STI(mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik);
• angkop para sa pagtuklas ng lahat ng STD(, gardnerellosis,) at mga impeksyon sa TORCH;
• ay nagpapahiwatig na may mataas na antas ng katumpakan pagkakaroon ng impeksyon sa mononucleosis, na nailalarawan sa pamamagitan ng pinsala sa mga lymphatic at reticuloendothelial system (pinalaki ang mga lymph node, pali, atay), ay maaaring makita gamit ang mga diagnostic ng PCR, ang pagkuha ng serum ng dugo bilang materyal sa pagsubok. Ang sakit na Filatov, ayon sa mga panlabas na parameter, ay maaaring magpakita mismo bilang mga pantal, biliousness ng balat, puting patong sa wika.
• , tumatagos sa dugo ng mga pasyente ng AIDS at mga tatanggap ng organ transplant sa paggamit ng mga gamot upang sugpuin ang immune system;
• impeksyon sa herpetic, na kumakatawan sa isa o ibang uri ng herpes na maaaring makaapekto sa maselang bahagi ng katawan, mauhog lamad ng mga mata o balat;
• tuberkulosis. Sa pagkakaroon ng mga pangunahing sintomas ng sakit, ang isang pagsusuri sa PCR ay inireseta pagkatapos ng mga resulta ng bronchoscopy, na nagpapahintulot sa iyo na masuri ang aktibong yugto ng tuberculosis nang mas mabilis kaysa sa paggamit ng isang bacteriological o bacterioscopic na pamamaraan;
• viral infectious disease tulad ng tick-borne encephalitis(Borreliosis). Ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng pinsala sa mga selula ng sistema ng nerbiyos, pagkalasing, pamamaga ng utak at kasunod na pag-unlad ng paralisis. Upang makita ang antigen gamit ang PCR diagnostics, ang dugo at cerebrospinal fluid ay kinukuha upang ihiwalay ang RNA virus.
• pagtuklas ng impeksyon sa Helicobacter pylori(na humahantong sa talamak na gastritis, peptic ulcer, mga bukol sa tiyan) sa pamamagitan ng PCR diagnostics ay nagbibigay-daan sa iyo upang makita ang Helicobacter pylori DNA (genetic material) sa isang biopsy, feces, laway, pagkilala sa mga strain ayon sa antas ng malignancy.

Ang mga diagnostic ng PCR ng mga impeksyon ay umuunlad sa isang pinabilis na bilis at matagumpay na ginagamit sa oncology, ginekolohiya, urolohiya, gastroenterology, virology, at ang listahan ay patuloy na ina-update, ngunit hindi limitado sa paghahanap para sa mga pathogen ng mga nakakahawang sakit. Sa iba pang praktikal na aplikasyon ng paraan ng PCR, maaari ding isa-isa ang paggamit ng pananaliksik upang maitaguyod ang pagiging ama at makilala ang isang tao.

Sa ating modernong panahon, ang molecular genetics ay malawakang ginagamit sa iba't ibang sangay ng medisina. Mula nang mabuo, ito ay naging isa sa mga pinaka mabisang paraan diagnosis at pinapayagan ang mabilis at tumpak na pagtuklas ng mga impeksyon sa katawan ng tao. Kung kailangan mong sumailalim sa mga diagnostic ng DNA sa Moscow, inaanyayahan ka naming gamitin ang mga serbisyo ng klinika ng Euromedprestige. Ang mga espesyalista ng aming sentro ay may malawak na karanasan sa larangan ng genetic analysis at ginagarantiyahan ang mataas na katumpakan na pagsubok ng materyal ng DNA sa pinakamaikling posibleng panahon!

Bakit isinasagawa ang mga diagnostic ng DNA sa Moscow

Ang mga diagnostic ng DNA ay nauunawaan bilang isang malawak na hanay ng mga pag-aaral na ginagamit sa microbiology upang tuklasin ang mga nakakahawang sakit. Sa mga nagdaang taon, ang mga virus at bakterya ay mabilis na umuunlad at umuunlad, sila ay dumarami, at nagiging mas mahirap na makilala ang mga ito. Ang paggamit ng mga genetic na pamamaraan ay ginagawang posible na makahanap ng kahit iisang microorganism sa sample ng pagsubok at upang makilala ang ilang mga pathogen nang sabay-sabay sa isang biological sample.

Ang pinakakaraniwang pamamaraan na ginagamit para sa mga diagnostic ng DNA sa Moscow sa aming klinika ay PCR (polymerase chain reaction). Kapag ito ay isinasagawa, maraming pumipili na pagkopya ng mga indibidwal na seksyon ng DNA nucleic acid ay nagaganap, na ginagawa gamit ang mga enzyme (kumplikadong molekula ng protina). Ang reaksyon ay isinasagawa sa isang espesyal na apparatus - isang amplifier, na pana-panahong nagpapainit at nagpapalamig sa mga test tube na may isang sample, at pagkatapos ay ipinapakita ang impormasyon sa real time sa isang scoreboard sa anyo ng mga graph.

Ang mga posibilidad ng pagsasaliksik na isinasagawa ay medyo malaki. Nakakatulong ito upang matukoy malaking bilang ng mga sakit, kabilang ang halos lahat ng mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik:

• ureaplasma;
• chlamydia;
• mushroom Candida;
• gardnerella;
• Trichomonas;
• gonococci at iba pa.

Kadalasan mayroong mga sitwasyon kung kailan kailangang itatag ng isang doktor ang pagiging epektibo ng therapy o ang antas ng pagpapagaling ng sakit - at sa kasong ito, ang mga diagnostic ng DNA sa Moscow ay nagiging hindi maaaring palitan. Ito ay itinuturing na lalong mahalaga sa pagkakaroon ng mga nakatagong impeksyon na mahirap tuklasin sa pamamagitan ng mikroskopya.

Ang pamamaraan ng PCR ay simple upang maisagawa at may maraming mga pakinabang:

• Mataas na pagtitiyak - kapag sinusuri ang isang sample, ang isang fragment ng DNA ay nakahiwalay na likas lamang sa isang partikular na pathogen.
• Hypersensitivity - ang impeksyon ay maaaring matukoy kahit na mayroon lamang isang cell ng virus o bakterya sa materyal ng pagsubok.
• Universality - anumang biological na materyal ay maaaring gamitin upang gumawa ng diagnosis, dahil ang impeksiyon ay madalas na matatagpuan sa lahat ng mga tisyu.
• Direktang pagtuklas - hindi tulad ng maraming iba pang mga pamamaraan, ang PCR ay tumutulong upang makilala ang pathogen hindi sa pamamagitan ng hindi direktang mga palatandaan, ngunit sa pamamagitan ng direktang presensya nito sa nakolektang materyal.
• Ang posibilidad ng preclinical DNA testing sa Moscow - ang mga pathogen ay maaaring makita kahit na bago ang simula ng mga sintomas, kabilang ang sa panahon ng pagpapapisa ng itlog.

0Array ( => Mga Pagsusuri) Array ( => 2) Array ( =>.html) 2

Paano maghanda para sa pagsusulit

Upang matukoy ang pathogen, pinapayagan na gumamit ng iba't ibang mga materyales - dugo, plema, ihi, pag-scrape ng epithelium mula sa puki, leeg ng matris o urethra. Ang katumpakan ng pagsusuri na isinagawa ay higit sa lahat ay nakasalalay sa sterility ng materyal na kinuha. Dahil ang PCR ay lubos na sensitibo, ang anumang kontaminasyon ng sample ay maaaring masira ang resulta.

Ang isang mahalagang papel sa pagiging maaasahan ng diagnosis ay nilalaro ng paunang paghahanda ng pasyente para sa pag-aaral. Hindi ito nagiging sanhi ng anumang mga paghihirap at nagbibigay para sa pagpapatupad ng mga sumusunod na rekomendasyon:

• Kinakailangang ihinto ang pag-inom ng antibiotic 1 buwan bago ang pagsusuri.
• Ang dugo para sa mga diagnostic ng DNA sa aming sentro sa Moscow ay kinukuha nang walang laman ang tiyan sa umaga.
• Kapag umihi, kolektahin ang unang bahagi nito sa umaga sa isang sterile na lalagyan pagkatapos ng maingat na kalinisan ng mga ari.
• Kapag sinusuri ang mga impeksyong sekswal, ang intimate life ay hindi kasama sa loob ng 72 oras at pag-ihi 3-4 na oras bago kunin ang materyal. Mula kahapon, noong nakaraang araw, hindi dapat gawin ang genital hygiene.

Ang katumpakan ng mga diagnostic ng DNA sa Moscow sa aming sentro

Ang lahat ng mga pagsubok sa loob ng mga dingding ng aming sentro ay eksklusibong isinasagawa ng mga sertipikadong espesyalista. Ang lab ay nilagyan ng makabagong pagsusuri sa DNA, na pinapaliit ang posibilidad ng pagkakamali ng tao. Ang high-tech na kagamitan na ginagamit ng mga espesyalista ng Euromedprestige para sa mga diagnostic ng DNA sa Moscow ay ginagawang posible na makakuha ng resulta na may katumpakan hanggang sa 97%.

Salamat sa mga advanced na pang-agham at teknikal na pag-unlad, ang pamamaraan ay walang mga analogue sa mga tuntunin ng kalidad at presyo. Sa mababang gastos, ang pasyente ay nakakakuha ng pagkakataon na mabilis na malaman ang kanyang diagnosis at simulan ang paggamot sa natukoy na sakit kahit na bago ito magsimulang magbigay ng mga komplikasyon.

gastroenterology diagnostic complex - 5 360 rubles

SA MARTEsave LANG - 15%

Ang PCR (polymerase chain reaction) ay isang tagumpay ng molecular biology, isa sa mga pangunahing pamamaraan ng clinical laboratory diagnostics ng huling bahagi ng ika-20 at unang bahagi ng ika-21 siglo, na nagdadala ng malaking benepisyo sa iba't ibang larangan ng medikal na agham.

Kaya, kahit na kabilang sa milyun-milyong mga selula ng katawan ng tao ay hindi ang buhay na virus mismo ang nawala, ngunit isang butil lamang ng DNA nito, kung gayon ang PCR, kung walang makagambala dito, ay malamang na makayanan ang gawain at iulat ang pananatili ng "stranger" na may positibong resulta. Ito ang kakanyahan ng PCR at ang pangunahing bentahe nito.

Mga kalamangan at kahinaan

Ang laboratoryo na nagsasagawa ng PCR diagnostics ay napapailalim sa pinakamataas na kinakailangan sa mga tuntunin ng kagamitan, mga sistema ng pagsubok at mga kwalipikasyon ng mga medikal na tauhan. Ito ay isang high-tech na laboratoryo na may arsenal ng napakasensitibo at napakaspesipikong reagents, kaya wala itong partikular na mga disbentaha. Maliban kung ito ay nagbibigay ng isang positibong resulta sa kawalan ng mga klinikal na pagpapakita, at sa gayon ay inilalagay ang clinician sa harap ng isang problema: ito ba ay nagkakahalaga ng pagsisimula ng paggamot o hindi?

Ang doktor na nagmamasid sa pasyente ay nagsisimulang mag-alinlangan sa pagiging maaasahan ng mga resulta ng pagsusulit, dahil wala siyang nakikitang anumang mga palatandaan ng sakit. Ngunit gayon pa man, dahil sa mataas na sensitivity ng PCR system, dapat itong alalahanin na nakikita nito ang pathogen kahit na sa preclinical stage, at ang isang positibong resulta sa kasong ito ay higit na isang kalamangan kaysa sa isang kawalan. Batay dito, ang dumadating na manggagamot ay dapat magpasya mismo sa pagiging angkop ng therapy, na isinasaalang-alang ang iba pang mga argumento para sa at laban.

Ang mga bentahe ng diagnostic gamit ang polymerase chain reaction ay halata:

• Mataas na pagtitiyak, na umaabot sa 100%, dahil sa pagkakaroon sa napiling sample ng mga particle ng nucleic acid na likas sa isang partikular na organismo, ngunit dayuhan sa mga tao;
• Mataas na pagganap, pagkatapos ng lahat, ang PCR ay isang high-tech na automated na pamamaraan na nagbibigay ng pagkakataon na magsagawa ng pagsubok sa araw ng materyal na sampling at sa gayon ay mapupuksa ang pasyente ng mga hindi kinakailangang alalahanin;
• Ang PCR, na nagtatrabaho sa isang sample, ay nakakapagsagawa ng ilang pag-aaral at tungkol sa tuklasin ang maraming mga pathogen kung mayroon siyang ganoong gawain. Halimbawa, kapag nag-diagnose ng impeksyon sa chlamydial, kung saan ang PCR ay isa sa mga pangunahing pamamaraan, kasama ang chlamydia, ang Neisseria (gonococcus) ay maaari ding makita - ang pathogen. Bukod dito, hindi ito negatibong nakakaapekto sa pagiging maaasahan ng mga resulta;
• Pagsusuri sa PCR nagpapakita ng mga mapanganib na mikroorganismo sa panahon ng pagpapapisa ng itlog kapag wala pa silang oras upang magdulot ng nasasalat na pinsala sa katawan, iyon ay, maagang pagsusuri nagbabala sa paparating na pag-unlad ng proseso ng pathological, na ginagawang posible upang maghanda para dito at dalhin ito nang ganap na armado.

Bilang karagdagan, upang maiwasan ang mga hindi pagkakaunawaan na kung minsan ay lumitaw sa panahon ng mga diagnostic, pinoprotektahan din ng PCR ang sarili sa pamamagitan ng katotohanan na ang mga resulta nito ay maaaring maitala (litrato, computer) upang magamit ang mga ito para sa mga layunin ng eksperto, kung kinakailangan.

Ang pamantayan sa mga tugon sa PCR ay itinuturing na isang negatibong resulta., na nagpapahiwatig ng kawalan ng mga fragment ng mga dayuhang nucleic acid, ang isang positibong tugon ay magpahiwatig ng pagkakaroon ng isang impeksyon sa katawan, ang mga digital na halaga ay nagpapahiwatig ng estado ng virus at ang konsentrasyon nito sa oras ng pagsubok. Gayunpaman, ang isang kumpletong transcript ng pagsusuri ay isinasagawa ng isang doktor na sumailalim sa espesyal na pagsasanay sa paksang "PCR". Ang pagsisikap na bigyang-kahulugan ang mga resulta sa iyong sarili ay walang kahulugan, dahil posible, na malamang na mangyari, na hindi maunawaan at magsimulang mag-alala nang maaga.

Ano ang "natatakot" ng PCR, ano ang magagawa nito at paano ito paghahandaan?

Tulad ng ibang pag-aaral, minsan ang mga resulta ng pagsusulit ay maling positibo o maling negatibo kung saan ang PCR ay walang pagbubukod. Ito ay maaaring mangyari sa mga sumusunod na kaso:

1. Mga paglabag sa teknolohikal na proseso sa isa sa mga yugto ng reaksyon;
2. Pagkabigong sumunod sa mga patakaran para sa koleksyon ng materyal, imbakan o transportasyon nito;
3. Ang pagkakaroon ng mga dayuhang impurities sa materyal.

Ito ay nagpapahiwatig na ang PCR - ang diagnosis ng mga impeksyon ay dapat na lapitan nang maingat, maingat at tumpak, kung hindi, ang mga sample ng materyal ay maaaring magbago ng kanilang istrukturang istruktura o kahit na bumagsak.

Mga yugto ng PCR diagnostics. Ang mga maling resulta ay maaaring magbigay ng mga paglabag sa anumang yugto ng pag-aaral

Ang mga diagnostic ng PCR ng mga impeksyon ay kabilang sa kategorya ng "mga pamantayang ginto" bukod sa iba pang mga pamamaraan ng laboratoryo, kaya maaari itong magamit upang maghanap ng mga pathogen ng maraming sakit na sa unang tingin ay walang pagkakatulad sa bawat isa:

• Tuberculosis ng iba't ibang lokalisasyon, pneumonia (kabilang ang hindi tipikal, sanhi ng chlamydia);
• Mga impeksyon sa pagkabata (tigdas rubella, parotitis, tigdas);
• Dipterya;
• salmonellosis;
• Zoonotic infectious disease - listeriosis (ang sakit ay nailalarawan sa pamamagitan ng iba't ibang mga sintomas na may pinsala sa mga lymph node, central nervous system, mga panloob na organo);
• Mga sakit na sanhi ng pagtagos ng Epstein-Barr virus (nakakahawang mononucleosis, atbp.);
• Oncological pathology na pinukaw ng impeksyon sa papillomavirus (HPV at mga uri nito);
• Borreliosis (Lyme disease, tick-borne encephalitis);
• Helicobacter pylori infection, ang causative agent kung saan ay ang bacterium Helicobacter pylori na naninirahan sa tiyan ng tao. Napatunayan na ang Helicobacter ay nagiging sanhi ng pag-unlad ng kanser sa tiyan o duodenal;
• at halos lahat.

Ang mga diagnostic ng PCR ng mga impeksyon na nakukuha sa pakikipagtalik ay partikular na kahalagahan, dahil ang mga sakit na sanhi sa ganitong paraan ay madalas na nagpapatuloy nang walang anumang mga klinikal na pagpapakita sa loob ng mahabang panahon, ngunit sa panahon ng pagbubuntis ay nagsisimula silang maging mas aktibo at, sa gayon, nagbabanta sa kalusugan at maging sa buhay ng bata. . At kumilos nang katulad. Ang ilan sa mga ito ("torch") ay sabay-sabay na nauugnay sa mga STI, kaya ang huli ay nangangailangan ng mas detalyadong pagsasaalang-alang. Makikilala ng mambabasa ang mga pinakasikat na pamamaraan sa mga sumusunod na seksyon ng artikulo.

Paano maayos na maghanda upang makakuha ng isang maaasahang resulta?

Napansin namin kaagad na ang paghahanda para sa PCR ay medyo simple, na hindi nangangailangan ng mga espesyal na pagsisikap sa bahagi ng pasyente. Kailangan mo lamang kumpletuhin ang tatlong simpleng gawain:

1. Huwag makipagtalik 24 oras bago kumuha ng pagsusulit;
2. Upang kumuha at pag-aralan ang dugo mula sa isang ugat, kailangan mong dumating sa isang walang laman na tiyan, sa pamamagitan ng paraan, hindi ka rin maaaring uminom;
3. Ang ihi ay dapat ipasa sa gabi (sa umaga - sa isang sterile na garapon na binili noong araw bago sa isang parmasya).

Maaaring gumana ang PCR sa anumang biological na kapaligiran

Ang paraan ng PCR ay hindi "uhaw sa dugo", samakatuwid tinatanggap nito ang anumang biyolohikal na kapaligiran na naglalaman ng pinaghihinalaang nakakahawang ahente. ang pagpipilian - kung ano ang kailangan mong gawin para sa pananaliksik, nananatili sa doktor.

Kaya, sa paghahanap ng isang pathogen, bilang karagdagan sa isang pagsusuri sa dugo (bagaman ito ay angkop din at sa karamihan ng mga kaso na kinuha kahanay sa iba pang materyal), maaari mong gamitin ang:

• (paglabas ng urogenital tract);
• Pag-scrape ng mauhog lamad ng oral cavity, conjunctiva, nasopharynx, genital tract (sa mga kababaihan ay kinuha mula sa cervix at puki, sa mga lalaki - mula sa urethra);
• laway;
• semilya;
• katas ng prostate;
• Mga tisyu ng inunan at amniotic fluid (amniotic fluid);
• Ang sediment ng ihi (pagkatapos ng centrifugation), halimbawa, para makita ang ilang partikular na STI at Mycobacterium tuberculosis;
• plema at pleural fluid para sa parehong layunin;
• exudate;
• Ang cerebrospinal fluid sa kaso ng pinaghihinalaang nakakahawang sugat ng central nervous system;
• Biopsy material (biopsy) na kinuha mula sa atay, duodenum, tiyan, atbp.

Nais kong idagdag sa itaas na sa lahat ng mga kaso, kahit na sa mga pag-scrape at pagtatago, magkakaroon ng sapat na materyal para sa pagsubok, dahil ang pagsusuri sa PCR ay hindi nangangailangan ng malalaking volume, sapat na ang ilang microliter para sa pagsusuri, na kadalasang kinuha sa isang Eppendorf type microtube at ipinadala sa pag-aaral.

Mga sakit at paggamit ng PCR

HIV at ang polymerase chain reaction

Karaniwan, kapag pumasa sa isang hindi kilalang pagsusuri sa kaso ng mga positibong resulta ng immunoblotting, ang diagnosis ay inuulit muli. Kung ang diagnosis ay nakumpirma, ang pasyente ay inireseta ng karagdagang pag-aaral:

1. Ang pagtukoy, gamit ang mga immunological na reaksyon, ang mga ganap na halaga ng bilang ng CD 4 lymphocytes (immunocompetent cells - T-helpers o helpers), kung saan ang impeksyon ay nahawahan sa unang lugar, pagkatapos nito nawala ang kanilang mga pangunahing katangian at hindi makilala sa pagitan ng " pagmamay-ari" at ng iba. Kinukuha nila ang RNA ng virus na nagpapalipat-lipat sa plasma ng dugo para sa mga normal na selula ng katawan at hindi tumutugon sa kanila;
2. Ang pagtuklas ng viral RNA sa pamamagitan ng PCR at pagkalkula ng konsentrasyon ng mga particle ng viral upang maitaguyod ang yugto, kalubhaan ng proseso ng pathological at pagbabala batay sa mga datos na ito. Siyempre, ang salitang "karaniwan" sa bagay na ito ay hindi umiiral, dahil ang reaksyon ay palaging positibo, at ang pag-decode ng mga digital na halaga ay nasa loob ng kakayahan ng doktor.

PCR at hepatitis

Ang paraan ng PCR ay maaaring makakita ng mga pathogen, kadalasan ang pagsubok ay ginagamit upang masuri ang hepatitis C, na hindi gaanong napansin ng iba pang mga pamamaraan.

Ang hepatitis C virus (na naglalaman ng RNA) sa pag-uugali nito sa katawan ng tao ay kahawig ng HIV. Naka-wedging sa genome ng mga selula ng atay (hepatocytes), siya ay nananatili doon naghihintay sa mga pakpak, na maaaring dumating ng hindi bababa sa 2 taon, hindi bababa sa 20 taon, kaya tinawag siya ng mga doktor na "gentle killer." Ang Hepatitis C ay humahantong sa pagbuo ng isang malignant na proseso sa hepatic parenchyma, na nagpapakita ng sarili sa mga huling yugto. Hindi napapansin ng immune system ang lahat ng mga pangyayaring ito, napagkakamalang isang hepatocyte ang virus. Totoo, ang mga antibodies sa virus ay ginawa sa ilang dami, ngunit hindi sila nagbibigay ng isang disenteng tugon sa immune. Para sa pag-diagnose ng hepatitis C, ang ELISA ay hindi masyadong nagbibigay-kaalaman, dahil ito ay nagpapahiwatig na ang virus ay nag-iwan ng mga bakas, at hindi alam kung ito ay umalis mismo. Sa HCV, ang mga kaso ng pagpapagaling sa sarili ay nalalaman, habang ang mga antibodies laban sa virus ay nananatili at patuloy na umiikot habang buhay (immunological memory). Ang PCR ay kapansin-pansing nauuna sa pagbuo ng mga antibodies at maaaring makakita ng isang viral particle kasing aga ng 1-1.5 na linggo, habang ang mga antibodies ay maaaring lumitaw sa hanay mula 2 buwan hanggang anim na buwan

Ang mga diagnostic ng PCR sa kaso ng pinaghihinalaang talamak na hepatitis C virus sa katawan ng tao ay ang pinakamainam na paraan ng pananaliksik, dahil ito lamang ang nakakakilala sa pagkakaroon ng isang "magiliw na kaaway" sa dugo o atay na biopsy ng pasyente.

Gayunpaman, minsan may mga kaso kapag ang AT ay positibo, at ang resulta ng PCR ay negatibo. Minsan ito ay nangyayari kapag ang dami ng virus ay napakababa o kapag ito ay natutulog sa atay nang hindi pumapasok sa daluyan ng dugo. Upang mahanap pa rin ang katotohanan, ang pasyente ay muling sinusuri, o higit pa sa isa.

Impeksyon ng papillomavirus

Kung hindi magaganap ang pagpapagaling sa sarili, maaari rin itong, nang hindi nagpapakita ng sarili, ay manatili nang mahabang panahon sa katawan ng host, na hindi man lang ito pinaghihinalaan, dahil hindi pa nagagawa ang PCR, at walang mga sintomas ng sakit. Gayunpaman, ang pagkakaroon ng impeksyon sa papillomavirus, kahit na nakatago, ay malayo sa pagiging walang malasakit sa kalusugan ng tao, kung saan ang ilang mga uri ng virus na nagdudulot ng mga sakit na oncological ay partikular na panganib (mga uri 16, 18).

Mas madalas, ang kalahating babae ng populasyon ay naghihirap mula sa HPV, dahil mas mahal ng virus ang babaeng genital area, at lalo na ang cervix, kung saan ang ilang mga uri ng mga virus ay nag-aambag sa pagbuo ng mga dysplastic na proseso, at pagkatapos ay ang cervical cancer, kung ang dysplasia ay hindi. ginagamot at ang virus ay inilabas. Kaya, ang polymerase chain reaction ay makakakita ng viral DNA, at pagkatapos ay ipahiwatig ang "masama" o "mabuti" (oncogenic o non-oncogenic) na uri na nanirahan sa katawan ng babae.

Iba pang mga impeksyon sa STI at TORCH

Malinaw, ang polymerase chain reaction ay makakahanap ng anumang dayuhang istraktura na binubuo ng mga nucleic acid, kaya ang pagsubok na ito ay angkop para sa pag-detect ng lahat ng mga STD at TORCH na impeksyon, gayunpaman, hindi ito palaging ginagamit. Bakit, sabihin nating, magsagawa ng gayong mamahaling pananaliksik upang matukoy o gonococcus, kung mayroong mas abot-kaya at mas mura?

Ang mga impeksyon sa TORCH at mga STI ay magkakaugnay na kung minsan ay mahirap matukoy kung saang grupo dapat italaga ang isang partikular na pathogen. Sa pangkalahatan, maaaring mahirap unawain ang mga ito, dahil ang mga ito ay medyo magkakaibang grupo ng mga mikroorganismo na maaaring palaging nakukuha sa pakikipagtalik o sa ilalim lamang ng ilang partikular na kondisyon (immunodeficiency), at maaaring maging interesado lamang sa panahon ng pagbubuntis, dahil sa posibleng negatibong epekto sa takbo nito at sa fetus.

Ang PCR ay ang pangunahing paraan para makita ang mga nakatagong impeksyon

Ang pagbuo ng mga klinikal na pagpapakita ay batay sa iba't ibang mga pathogen, na matatagpuan lamang ng PCR, na siyang pangunahing gawain nito, kung minsan kasama ang ELISA, at kung minsan. bilang ang tanging confirmatory test, lalo na kung walang sintomas ng sakit. Ang ganitong mahirap na sitwasyon ay maaaring malikha ng isang impeksiyong polymicrobial, na, bilang karagdagan sa mga halatang pathogen, ay kinabibilangan din ng mga oportunistikong pathogen.

Ang Ureaplasma ay madalas na nakikita kasabay ng mycoplasma. At hindi ito aksidente. Ang mga species na ito, tulad ng chlamydia, ay hindi mga virus o bakterya, nabubuhay sila sa loob ng mga selula at nabibilang sa mga STI, bagaman ang kanilang presensya sa isang malusog na katawan ay malayo rin sa hindi pangkaraniwan. Kaya, upang makilala ang isang malusog na carrier mula sa isang taong may sakit, kinakailangan ang mga espesyal na pamamaraan, kung saan ang PCR ay itinuturing na pinaka maaasahan, dahil, dahil sa mga kakaibang istraktura at pag-uugali ng mga microorganism na ito, ang iba pang mga pag-aaral ay hindi epektibo.

Tulad ng para sa (uri 1, 2) at, na kabilang din sa mga herpes virus (uri 5), ang sitwasyon dito ay hindi maliwanag din. Ang rate ng impeksyon ng populasyon sa mundo ay papalapit na sa 100%, samakatuwid, sa kasong ito, ang pagkakakilanlan ng virus at ang dosis nito ay napakahalaga, na lalong mahalaga sa panahon ng pagbubuntis, dahil para sa isang may sapat na gulang, ang virus na nag-ugat sa kanyang Ang katawan ay madalas na hindi nagiging sanhi ng anumang problema at hindi nagbibigay ng mga palatandaan ng sakit.

Samakatuwid, ang naturang pagsusuri na inireseta ng isang doktor ay hindi dapat balewalain, dahil sa ilang mga kaso ang polymerase chain reaction ay isang obligado at kinakailangang paraan ng mga diagnostic sa laboratoryo na maaaring maprotektahan hindi lamang ang isang babae, kundi pati na rin ang isang maliit, hindi pa isinisilang na lalaki mula sa malubhang komplikasyon.

Sa konklusyon, nais kong tandaan na ang napakagandang pamamaraan tulad ng PCR ay naglilingkod sa sangkatauhan nang higit sa 30 taon. Kasabay nito, ang mga gawain ng pagsubok ay hindi limitado sa paghahanap ng mga pathogens ng mga nakakahawang sakit. Ang polymerase chain reaction, na ipinanganak sa lupa ng molecular biology, ay hindi mapaghihiwalay na nauugnay sa genetics, ito matagumpay na ginamit sa forensics para sa personal na pagkakakilanlan, sa forensic medicine upang magtatag ng paternity, sa beterinaryo na gamot, kung ang klinika ng hayop ay may kakayahang bumili ng mamahaling kagamitan, gayundin sa ibang mga lugar (industriya, agrikultura, atbp.).

Video: PCR - kakanyahan at aplikasyon