Rod Shigella vključuje več kot 40 serotipov. So kratke, nepremične gramnegativne paličice, ki ne tvorijo spor ali kapsul, dobro rastejo na običajnih hranilnih gojiščih in ne rastejo na izčrpanih gojiščih s citratom ali malonatom kot edinim virom ogljika; ne tvorijo H2S, nimajo ureaze; Voges-Proskauerjeva reakcija je negativna; glukoza in nekateri drugi ogljikovi hidrati fermentirajo s tvorbo kisline brez plina (razen nekaterih biotipov Shigella flexneri: S. manchester in S. newcastle); Praviloma ne fermentirajo laktoze (z izjemo Shigella Sonne), adonitola, salicina in inozitola, ne utekočinijo želatine, običajno tvorijo katalazo in nimajo lizin dekarboksilaze in fenilalanin deaminaze. Vsebnost G + C v DNA je 49-53 mol%. Šigele so fakultativni anaerobi, optimalna temperatura za rast je 37 °C, ne rastejo pri temperaturah nad 45 °C, optimalni pH okolja je 6,7-7,2. Kolonije na gostih medijih so okrogle, konveksne, prosojne, v primeru disociacije nastanejo grobe kolonije R-oblike. Rast na MPB v obliki enakomerne motnosti, grobe oblike tvorijo usedlino. Sveže izolirane kulture Shigella Sonne običajno tvorijo kolonije dveh vrst: majhne okrogle konveksne (faza I), velike ploščate (faza II). Narava kolonije je odvisna od prisotnosti (faza I) ali odsotnosti (faza II) plazmida z molekulsko maso 120 MD, ki določa tudi virulenco Shigella Sonne.

Mednarodna klasifikacija šigel temelji na njihovih biokemičnih značilnostih (manitolne fermentirajoče, manitolno fermentirajoče, počasi laktozno fermentirajoče šigele) in značilnostih antigenske strukture.

Šigele imajo O-antigene različne specifičnosti: skupne družini Enterobacteriaceae, generične, vrstne, skupinske in tipske, pa tudi K-antigene; Nimajo N-antigenov.

Razvrstitev upošteva samo skupinske in tipske specifične O-antigene. V skladu s temi značilnostmi je rod Shigella razdeljen na 4 podskupine oziroma 4 vrste in vključuje 44 serotipov. Podskupina A (vrste Shigella dysenteriae) vključuje vrste Shigella, ki ne fermentirajo manitola. Vrsta vključuje 12 serotipov (1-12). Vsak serotip ima svoj specifični tip antigena; antigenske povezave med serotipi, kot tudi z drugimi vrstami Shigella, so šibko izražene. Podskupina B (vrsta Shigella flexneri) vključuje šigele, ki običajno fermentirajo manitol. Šigele te vrste so med seboj serološko sorodne: vsebujejo za tip specifične antigene (I-VI), po katerih jih delimo na serotipe (1-6/" in skupinske antigene, ki se v vsakem serotipu nahajajo v različnih sestavah. in glede na katere se serotipi delijo na subserotipe.Poleg tega ta vrsta vključuje dve antigenski različici - X in Y, ki nimata značilnih antigenov, razlikujeta se v nizih skupinskih antigenov.Serotip S.flexneri 6 nima subserotipov, vendar je razdeljen na 3 biokemične vrste glede na značilnosti fermentacije glukoze, manitola in dulcitola.

Lipopolisaharidni antigen O pri vseh Shigella Flexner vsebuje skupinski antigen 3, 4 kot glavno primarno strukturo, njegovo sintezo nadzira kromosomski gen, ki je lokaliziran blizu his-lokusa. Tipsko specifični antigeni I, II, IV, V in skupinski antigeni 6, 7, 8 so rezultat modifikacije antigenov 3, 4 (glikozilacija ali acetilacija) in jih določajo geni ustreznih pretvornih profagov, mesto integracije. od tega se nahaja v lac-pro regiji kromosoma Shigella.

V državi se je pojavil v 80. letih. XX stoletje in splošno razširjeni novi podserotip S.flexneri 4 (IV:7, 8) se razlikuje od subserotipa 4a (IV;3,4) in 4b (IV:3, 4, 6), nastal iz različice S.flexneri Y (IV: 3, 4) zaradi lizogenizacije s svojimi pretvornimi profagi IV in 7, 8.

Podskupina C (vrste Shigella boydix) vključuje šigele, ki običajno fermentirajo manitol. Člani skupine se med seboj serološko razlikujejo. Antigenske povezave znotraj vrste so šibko izražene. Vrsta vključuje 18 serotipov (1-18), od katerih ima vsak svoj glavni tip antigena.

V podskupino D (vrste Shigella sonet) sodijo šigele, ki običajno fermentirajo manitol in so sposobne počasne (po 24 urah inkubacije in kasneje) fermentirati laktozo in saharozo. Vrsta 5. sonnei vključuje en serotip, vendar imajo kolonije faz I in II svoje tipsko specifične antigene. Za intraspecifično razvrstitev Shigella Sonne sta bili predlagani dve metodi:

delitev na 14 biokemičnih tipov in podtipov glede na njihovo sposobnost fermentacije maltoze, ramnoze in ksiloze;

delitev na tipe fagov glede na občutljivost na niz ustreznih fagov.

Te metode tipizacije imajo predvsem epidemiološki pomen. Poleg tega sta Shigella Sonne in Shigella Flexner za isti namen podvrženi tipizaciji za sposobnost sintetiziranja specifičnih kolicinov (kolicino-genotipizacija) in za občutljivost na znane kolicine (kolicinotipizacija). Za določitev vrste kolicinov, ki jih proizvaja Shigella, sta J. Abbott in R. Chenon predlagala nize standardnih in indikatorskih sevov Shigella ter za določitev občutljivosti Shigella na znane vrste kolicinov, Set referenčnih kolicinogenih sevov P. Fredericka. se uporablja.

Dizenterija je nalezljiva bolezen, za katero je značilna splošna zastrupitev telesa, driska in posebna lezija sluznice debelega črevesa. Je ena najpogostejših akutnih črevesnih bolezni na svetu. Dizenterija je že od antičnih časov znana pod imenom "krvava driska", vendar se je izkazalo, da je njena narava drugačna. Leta 1875 je ruski znanstvenik F. A. Lesh je pri bolniku s krvavo drisko izoliral amebo Entamoeba histolytica, v naslednjih 15 letih je bila ugotovljena samostojnost te bolezni, za katero se je ohranilo ime amebiaza.

Povzročitelji same griže so velika skupina biološko podobnih bakterij, združenih v rod Shigella. Prvič patogen sta ga leta 1888 odkrila A. Chantemes in F. Vidal; leta 1891 ga je opisal A. V. Grigoriev, leta 1898 pa K. Shiga s pomočjo prejeli identificiran serum pacienta patogena pri 34 bolnikih z dizenterijo, kar dokončno dokazuje etiološko vlogo te bakterije. . Vendar pa so v naslednjih letih odkrili druge patogene dizenterija : leta 1900 - S. Flexner, leta 1915 - K. Sonne, leta 1917 - K. Stutzer in K. Schmitz, leta 1932 - J. Boyd, leta 1934 - D. Large, leta 1943 - A. Sax.

Odpornost na šigele

Shigella ima precej visoko odpornost na okoljske dejavnike. Na bombažni tkanini in papirju preživijo do 0-36 dni, v posušenih iztrebkih - do 4-5 mesecev, v zemlji - do 3-4 mesece, v vodi - od 0,5 do 3 mesece, na sadju in zelenjavi - do 2 tedna, v mleku in mlečnih izdelkih - do nekaj tednov; pri temperaturi 60 C poginejo v 15-20 minutah. Občutljivo na raztopine kloramina, aktivni klor in druga razkužila.

Dejavniki patogenosti

Najpomembnejša biološka lastnost šigel, ki določa njihovo patogenost, je sposobnost, da vdrejo v epitelijske celice, se v njih razmnožijo in povzročijo njihovo smrt. Ta učinek je mogoče odkriti s keratokonjunktivnim testom (vnos ene zanke kulture Shigella (2-3 milijarde bakterij) pod spodnjo veko morskega prašička povzroči razvoj serozno-gnojnega keratokonjunktivitisa), pa tudi z okužbo celice. kulturah (citotoksični učinek) ali piščančjih zarodkih (njihova smrt) ali intranazalno pri belih miših (razvoj pljučnice). Glavne dejavnike patogenosti Shigella lahko razdelimo v tri skupine:

dejavniki, ki določajo interakcijo z epitelijem sluznice;

dejavniki, ki zagotavljajo odpornost na humoralne in celične obrambne mehanizme makroorganizma in sposobnost razmnoževanja šigel v njegovih celicah;

sposobnost proizvajanja toksinov in strupenih produktov, ki določajo razvoj samega patološkega procesa.

V prvo skupino spadajo adhezijski in kolonizacijski dejavniki: njihovo vlogo igrajo pili, proteini zunanje membrane in LPS. Adhezijo in kolonizacijo spodbujajo encimi, ki uničujejo sluz - nevraminidaza, hialuronidaza, mucinaza. Druga skupina vključuje dejavnike invazije, ki spodbujajo prodiranje Shigella v enterocite in njihovo razmnoževanje v njih in v makrofagih s hkratnim pojavom citotoksičnega in (ali) enterotoksičnega učinka. Te lastnosti nadzirajo geni plazmida z molekulsko maso 140 MD (kodira sintezo proteinov zunanje membrane, ki povzročajo invazijo) in kromosomski geni šigel: ksr A (povzroča keratokonjunktivitis), cyt (odgovoren za uničenje celic). ), kot tudi drugi geni, ki še niso identificirani. Zaščito šigel pred fagocitozo zagotavljajo površinski K-antigen, antigeni 3,4 in lipopolisaharid. Poleg tega ima lipid A endotoksina Shigella imunosupresivni učinek: zavira aktivnost celic imunskega spomina.

V tretjo skupino dejavnikov patogenosti spadajo endotoksin in dve vrsti eksotoksinov, ki jih najdemo v šigelah - šiga in šigi podobni eksotoksini (SLT-I in SLT-II), katerih citotoksične lastnosti so najmočneje izražene pri S. dysenteriael. Šigi in šigi podobni toksini se nahajajo tudi v drugih serotipih S. dysenteriae, proizvajajo pa jih tudi S.flexneri, S. sonnei, S. boydii, EHEC in nekatere salmonele. Sintezo teh toksinov nadzirajo tox geni pretvorbenih fagov. Enterotoksine tipa LT najdemo pri Shigella Flexner, Sonne in Boyd. Njihovo sintezo LT nadzirajo plazmidni geni. Enterotoksin stimulira aktivnost adenilat ciklaze in je odgovoren za nastanek driske. Šiga toksin ali ne-irotoksin ne reagira s sistemom adenilat ciklaze, ima pa neposreden citotoksični učinek. Šiga in šigi podobni toksini (SLT-I in SLT-II) imajo m.m. 70 kDa in je sestavljen iz podenot A in B (slednja iz 5 enakih majhnih podenot). Receptor za toksine je glikolipid celične membrane. Virulenca Shigella Sonne je odvisna tudi od plazmida z molekulsko maso 120 MD. Nadzoruje sintezo približno 40 polipeptidov zunanje membrane, od katerih jih je sedem povezanih z virulenco. Shigella Sonne, ki ima ta plazmid, tvori kolonije faze I in je virulentna. Kulture, ki so izgubile plazmid, tvorijo kolonije faze II in nimajo virulence. Plazmidi glej m.120-140 MD so bili najdeni pri Shigella Flexner in Boyd. Shigella lipopolisaharid je močan endotoksin.

Postinfekcijska imunost

Kot so pokazala opazovanja opic, po preboleli dizenteriji ostane močna in dokaj dolgotrajna imuniteta. Povzročajo jo protimikrobna protitelesa, antitoksini, povečana aktivnost makrofagov in T-limfocitov. Lokalizacija črevesne sluznice, posredovana z IgA, ima pomembno vlogo. Vendar pa je imunost tipsko specifična; do močne navzkrižne imunosti ne pride.

Epidemiologija dizenterije

Edini vir okužbe je. Nobena žival v naravi ne zboli za grižo. V eksperimentalnih pogojih je grižo mogoče reproducirati le pri opicah. Način okužbe je fekalno-oralni. Poti prenosa: voda (predvsem za Shigello Flexner), hrana, zlasti mleko in mlečni izdelki (prevladujoča pot okužbe za Shigello Sonne), in gospodinjski stik, zlasti za vrsto S. dysenteriae.

Značilnost epidemiologije dizenterije je sprememba vrstne sestave patogenov, pa tudi biotipov Sonne in serotipov Flexner v določenih regijah. Na primer, do konca 30. XX stoletje S. dysenteriae 1 je predstavljal do 30-40% vseh primerov dizenterije, nato pa je ta serotip postajal vse manj pogost in skoraj izginil. Vendar pa je v letih 1960-1980. S. dysenteriae se je znova pojavila na zgodovinskem odru in povzročila vrsto epidemij, ki so vodile do nastanka treh hiperendemičnih žarišč – v Srednji Ameriki, Srednji Afriki in Južni Aziji (Indija, Pakistan, Bangladeš in druge države). Vzroki za spremembo vrstne sestave povzročiteljev dizenterije so verjetno povezani s spremembami kolektivne imunosti in spremembami lastnosti bakterij dizenterije. Zlasti vrnitev S. dysenteriae 1 in njena razširjena distribucija, ki je povzročila nastanek hiperendemičnih žarišč dizenterije, sta povezana z njenim pridobivanjem plazmidov, kar je povzročilo multidrug in povečano virulenco.

Simptomi dizenterije

Inkubacijska doba dizenterije je 2-5 dni, včasih manj kot en dan. Tvorba infekcijskega žarišča v sluznici padajočega dela debelega črevesa (sigmoidnega in rektuma), kjer prodre povzročitelj dizenterije, je ciklične narave: adhezija, kolonizacija, vnos Shigella v citoplazmo enterocitov, njihova intracelularna razmnoževanje, uničenje in zavrnitev epitelijskih celic, sproščanje patogenov v lumen črevesja; po tem se začne naslednji cikel - adhezija, kolonizacija itd. Intenzivnost ciklov je odvisna od koncentracije patogenov v parietalni plasti sluznice. Zaradi ponavljajočih se ciklov žarišče vnetja raste, nastale razjede, ki se povezujejo, povečajo izpostavljenost črevesne stene, zaradi česar se v blatu pojavijo kri, mukopurulentne grudice in polimorfonuklearni levkociti. Citotoksini (SLT-I in SLT-II) povzročajo uničenje celic, enterotoksini – drisko, endotoksini – splošno zastrupitev. Klinična slika dizenterije je v veliki meri odvisna od vrste eksotoksina, ki ga patogen v večji meri proizvaja, stopnje njegovega alergenega učinka in imunskega statusa telesa. Vendar pa mnoga vprašanja patogeneze griže ostajajo nejasna, zlasti: značilnosti poteka griže pri otrocih prvih dveh let življenja, vzroki za prehod akutne griže v kronično, pomen preobčutljivosti, mehanizem lokalne imunosti črevesne sluznice itd. Najbolj značilne klinične manifestacije dizenterije so driska, pogost nagon: v hudih primerih do 50-krat ali večkrat na dan, tenezmi (boleči krči rektuma) in splošna zastrupitev. Naravo blata določa stopnja poškodbe debelega črevesa. Najhujšo grižo povzroča S. dysenteriae 1, najblažjo grižo Sonne.

Laboratorijska diagnoza dizenterije

Glavna metoda je bakteriološka. Material za raziskavo je iztrebki. Shema izolacije patogena: inokulacija na diferencialno diagnostičnih gojiščih Endo in Ploskirev (vzporedno na obogatitvenem mediju, ki ji sledi inokulacija na gojiščih Endo in Ploskirev) za izolacijo izoliranih kolonij, pridobivanje čiste kulture, proučevanje njenih biokemičnih lastnosti in ob upoštevanju slednjih identifikacijo z uporabo polivalentnih in monovalentnih diagnostičnih aglutinacijskih serumov. Proizvajajo se naslednji komercialni serumi.

Za šigele, ki ne fermentirajo manitola:

na S. dysenteriae 1 in 2 (polivalentni in monovalentni),

na S. dysenteriae 3-7 (polivalenten in monovalenten),

na S. dysenteriae 8-12 (polivalenten in monovalenten).

Za Shigella, ki fermentira manitol: za tipične antigene S. flexneri I, II, III, IV, V, VI, za skupinske antigene S. flexneri 3, 4, 6,7,8 - polivalentne, za antigene S. boydii 1-18 ( polivalentni in monovalentni), na antigene S. sonnei faza I, faza II, na antigene S. flexneri I-VI + S. sonnei - polivalentni.

Za hitro identifikacijo šigel je priporočljiva naslednja metoda: sumljivo kolonijo (negativno na laktozo na gojišču Endo) subkulturiramo na gojišču TSI (trojno sladkorno železo) - trojni sladkorni agar (glukoza, laktoza, saharoza) z železom, da določimo produkcijo H2S; ali na medij, ki vsebuje glukozo, laktozo, saharozo, železo in sečnino.

Vsak organizem, ki razgrajuje sečnino po 4 do 6 urah inkubacije, je najverjetneje član rodu Proteus in ga je mogoče izključiti. Organizem, ki proizvaja H, S ali ima ureazo ali proizvaja kislino na sklepu (fermentira laktozo ali saharozo), je mogoče izključiti, čeprav je treba seve, ki proizvajajo H2S, raziskati kot možne člane rodu Salmonella. V vseh drugih primerih je treba kulturo, vzgojeno na teh gojiščih, pregledati in, če fermentira glukozo (sprememba barve kolone), izolirati v čisti obliki. Hkrati ga lahko testiramo v reakciji aglutinacije stekla z ustreznimi antiserumi proti rodu Shigella. Po potrebi se opravijo še drugi biokemični testi, da se preveri, ali pripadajo rodu Shigella, ter prouči gibljivost.

Za odkrivanje antigenov v krvi (tudi kot del CEC), urinu in blatu lahko uporabimo naslednje metode: RPGA, RSK, koaglutinacijsko reakcijo (v urinu in blatu), IFM, RAGA (v krvnem serumu). Te metode so zelo učinkovite, specifične in primerne za zgodnjo diagnozo.

Za serološko diagnostiko lahko uporabimo: RPHA z ustrezno diagnostiko eritrocitov, imunofluorescenčno metodo (posredna modifikacija), Coombsovo metodo (določanje titra nepopolnih protiteles). Diagnostično vrednost ima tudi alergijski test z dizenterinom (raztopina beljakovinskih frakcij Shigella Flexner in Sonne). Reakcija se upošteva po 24 urah.Pozitivna je v prisotnosti hiperemije in infiltrata s premerom 10-20 mm.

Zdravljenje dizenterije

Glavna pozornost je namenjena obnovitvi normalnega metabolizma vode in soli, racionalni prehrani, razstrupljanju, racionalni antibiotični terapiji (ob upoštevanju občutljivosti patogena na antibiotike). Dober učinek se doseže z zgodnjo uporabo polivalentnega dizenterijskega bakteriofaga, zlasti tablet s pektinsko oblogo, ki ščiti fag pred delovanjem želodčnega soka HC1; V tankem črevesu se pektin raztopi, fagi se sprostijo in začnejo delovati. V preventivne namene je treba fag dati vsaj enkrat na tri dni (obdobje njegovega preživetja v črevesju).

Specifično preprečevanje dizenterije

Za ustvarjanje umetne imunosti proti dizenteriji so uporabljali različna cepiva: od ubitih bakterij, kemična, alkoholna, vendar so se vsa izkazala za neučinkovita in so bila ukinjena. Cepiva proti Flexnerjevi griži so bila ustvarjena iz žive (mutirane, od streptomicina odvisne) Shigelle Flexner; ribosomska cepiva, vendar tudi ta niso našla široke uporabe. Zato ostaja problem specifične dizenterije nerešen. Glavni način za boj proti dizenteriji je izboljšanje sistema oskrbe z vodo in kanalizacije, zagotavljanje strogih sanitarnih in higienskih režimov v živilskih podjetjih, zlasti v mlečni industriji, v otroških ustanovah, na javnih mestih in pri vzdrževanju osebne higiene.

Prvega povzročitelja dizenterije je odkril A. V. Grigoriev (1891), leta 1898 pa ga je proučeval in opisal japonski znanstvenik Shiga. V naslednjih letih so bili izolirani in opisani drugi predstavniki tega rodu: Flexner (1900), Sonne (1915), Stutzer-Schmitz (1917), Large-Sachs (1934).

Po mednarodni klasifikaciji so vse bakterije, ki povzročajo grižo, združene v en rod v čast Shige - Shigella.

Morfologija. Shigella so majhne (2-3 × 0,4-0,6 µm) paličice z zaobljenimi konci. Od drugih predstavnikov družine Enterobacteriaceae se razlikujejo po odsotnosti flagel. Nimajo trosov ali kapsul. po Gramu negativno.

Gojenje. Šigele so fakultativni anaerobi. Nezahteven do hranilnih medijev. Na MPA in MPB se razmnožujejo pri temperaturi 37° C in pH 7,2-7,4. Elektivna in diferencialno diagnostična sredstva zanje so sredstva Ploskirev, Endo in EMS. Rastejo v obliki majhnih, prosojnih, sivkastih, okroglih kolonij, velikih 15-2 mm v obliki črke S. Izjema je Shigella Sonne, ki pogosto disociira in tvori velike, ploščate, motne kolonije v obliki črke R z nazobčanimi robovi (slika 44). V tekočih hranilnih medijih Shigella proizvaja enakomerno motnost, R-oblike tvorijo usedlino.

Encimske lastnosti. Encimske lastnosti Shigella so manj izrazite kot pri drugih predstavnikih Enterobacteriaceae: razgrajujejo ogljikove hidrate brez nastajanja plinov in ne razgrajujejo laktoze in saharoze. Izjema je Shigella Sonne, ki te ogljikove hidrate razgradi 2-3. dan.

Proteolitske lastnosti Shigella niso zelo izrazite - tvorba indola in vodikovega sulfida je nedosledna, sesirijo mleko in ne utekočinijo želatine.

Glede na manitol delimo vse šigele na cepljive in necepljive (tabela 37).

Opomba. k - cepitev s tvorbo kisline.

Trenutno je Shigella Sonne razdeljena na štiri encimske vrste. Razlikujeta se po sposobnosti razgradnje ramnoze in ksiloze (tabela 38).

Opomba. + cepljenje; (+) cepljenje po 3-5 dneh; - se ne spremeni.

Tvorba toksinov. Shigella ima endotoksin. Izjema je Shigella Shigi, ki poleg endotoksina proizvaja še eksotoksin, ki deluje nevrotoksično.

Antigenska struktura in klasifikacija. Shigella vsebuje somatske antigene, ki vključujejo skupinske in tipske antigene. Po mednarodni klasifikaciji so šigele razdeljene v štiri skupine, označene z velikimi črkami A, B, C, D.

Skupina A S. dysenteriae: 1 - Grigorieva - Shigi; 2 - Stutzer - Schmitz; 3-7 - Velika - Saksa in 8-10 - začasno. Predstavniki te skupine imajo samo tipične antigene, označene z arabskimi številkami.

Skupina B S. flexneri. Mikrobi te skupine imajo bolj zapleteno antigensko strukturo - vsebujejo tipične antigene, označene z rimskimi številkami, in skupinske antigene, označene z arabskimi številkami. Shigella Flexner ima 6 serovarjev. Shigella Flexner 6 je bila prej označena kot podvrsta S. newcastle.

Skupina C S. boydii. Ima samo tipične antigene. V tej skupini je 15 seroloških tipov.

Skupina D S. sonnei ima svoj specifični antigen (Tabela 39).

Pri mikrobiološki preiskavi odgovori nakazujejo serovarianto in subserovarianto izolirane kulture. Na primer, izolirana je bila kultura Shigella Flexner 1a.

Odpornost na okoljske dejavnike. Temperatura 100 °C takoj ubije Shigello. Temperatura 60°C jih ubije v 20-30 minutah. Shigella je odporna na nizke temperature - v rečni vodi vztrajajo do 3 mesece, na zelenjavi in ​​sadju - do 10-15 mesecev. Sončna svetloba jih ubije v 2-3 urah, Shigella Shiga pa v 20 minutah. Običajno uporabljene koncentracije dezinfekcijskih raztopin jih uničijo v 20-30 minutah. Najmanj odporne na zunanje dejavnike so šigele skupine A, najbolj odporne pa šigele Sonne.

Občutljivost živali. Živali niso občutljive na povzročitelje dizenterije, z izjemo opic. Eksperimentalna okužba kuncev in belih miši povzroči njihovo opijanje in pogin.

Viri okužbe. Oseba z akutno in kronično obliko dizenterije in nosilec bakterij.

Prenosne poti. hrana. Zelo pomembna je vodna pot, zelenjava, sadje, razni predmeti, okuženi s šigelami, in muhe.

Patogeneza. Ko v črevesju s hrano, Shigella prodre v epitelijske celice sluznice debelega črevesa, kjer se razmnožujejo. Delno umrejo. Endotoksin, ki nastane med uničenjem bakterij, senzibilizira sluznico, poveča se prepustnost krvnih žil, endotoksin se absorbira v kri in povzroči zastrupitev. Poškodbo sluznice spremlja otekanje, nekroza in krvavitev. Poleg tega toksin vpliva na centralni živčni sistem, kar vodi do trofičnih motenj. Posebno huda je bolezen, ki jo povzroča Shigella Shiga, ki prodre globoko v sluznico debelega črevesa in povzroča močno hiperemijo, oteklino in krvavo drisko. Eksotoksin, ki ga proizvajajo, povzroči hudo zastrupitev.

Za nastanek bolezni je pomembna velikost kužne doze.

Imuniteta. Ljudje imamo naravno odpornost na okužbo z dizenterijo. Po bolezni je imuniteta nestabilna, po dizenteriji Sonne pa je praktično odsotna. V primeru bolezni, ki jo povzroča dizenterija Shigella 1 (Grigorieva - Shigi), se razvije stabilnejša protitoksična imunost.

Preprečevanje. Splošni sanitarni in protiepidemični ukrepi: izolacija, zgodnja diagnoza, dezinfekcija.

Specifična preventiva ni našel široke uporabe. Osebe, ki so bile v stiku z bolniki, dobijo polivalentni dizenterijski bakteriofag.

Zdravljenje. Kompleks, sulfonamidi z antibiotiki. Specifičnega zdravljenja ni.

Kontrolna vprašanja

1. Poimenujte predstavnike rodu Shigella - povzročitelje griže.

2. Odnos do katerega ogljikovega hidrata je osnova za delitev šigel v dve skupini? Katere vrste Shigella so vključene v vsako od teh skupin?

3. Kakšne so poti prodiranja šigel in kateri del črevesja prizadenejo?

4. Katera vrsta Shigella pogosto raste v R-obliki?

5. Katere vrste šigel imajo tipske in skupinske antigene?

Mikrobiološka preiskava

Namen študije: odkrivanje in identifikacija Shigella za diagnozo; prepoznavanje nosilcev bakterij; odkrivanje šigel v živilih.

Material za raziskovanje

1. Gibanje črevesja.

2. Sekcijski material.

3. Živilski izdelki.

Osnovne raziskovalne metode

1. Mikrobiološki.

2. Serološki.

Napredek študije

Drugi dan študija

Zasajene skodelice se odstranijo iz termostata in pregledajo s prostim očesom ali skozi povečevalno steklo. Sumljive kolonije (brezbarvne) v količini 4-6 odsejemo na Russellovem gojišču in manitolu. Inokulacijo izvedemo s potezami po poševni površini in vbrizgavanjem v kolono agarja. Inokulirano Russellovo gojišče postavimo v termostat za 18-24 ur (hkrati izvedemo ponovno setev iz selenitnega gojišča v diferencialna gojišča).

Tretji dan študija

Odstranite pridelke, narejene na Russellovem mediju, iz termostata. Kulture, ki ne razgradijo laktoze, so podvržene nadaljnjim raziskavam: naredijo se brisi, obarvajo po Gramu in mikroskopsko pregledajo. V prisotnosti gramnegativnih palic se inokulacija izvede na Hiss gojiščih, juhi z indikatorskimi papirji (za odkrivanje indola in vodikovega sulfida) in lakmusovem mleku. Inokulirana gojišča postavimo v termostat za 18-24 ur.

Četrti dan raziskovanja

Odstranite pridelke iz termostata in upoštevajte rezultat. Kulture, sumljive zaradi svojih encimskih in kulturnih lastnosti v zvezi s Shigella (glej tabelo 37), se serološko identificirajo. Če takšnih kultur ni, je podan negativen odgovor.

Serološka identifikacija

Vrsta, serovar in subserovar izolirane kulture se določijo z uporabo adsorbiranih serumov. Analiza antigenske strukture se začne z reakcijo aglutinacije na steklu z mešanico št. 1. Ta mešanica vključuje serume s protitelesi proti Shigella Sonne, Newcastle in polivalentni serum proti Shigella Flexner. Če je reakcija aglutinacije z mešanico pozitivna, se izolirana kultura aglutinira ločeno z vsakim serumom, vključenim v mešanico.

Pozitivna reakcija aglutinacije z adsorbiranim serumom na Shigella Sonne in Newcastle daje pravico do odgovora. Za določitev serovarja in subserovarja Shigella Flexner je potrebno dodatno opraviti aglutinacijske reakcije s standardnimi (I, II, III, IV, V) in skupinskimi (1-3, 4-6-7, 8) serumi. Na primer, izolirana kultura je dala pozitivno reakcijo s serumom tipa II in serumom skupine 3, 4. Kot je razvidno iz tabele, je bila izolirana kultura Shigella Flexner, serovar 2, subserovar 1a. Odgovor: Izolirana je bila Shigella Flexner 2a.

Če ni aglutinacije z mešanico št. 1, se izvede reakcija aglutinacije z drugimi polivalentnimi serumi.

Pri izvajanju aglutinacijske reakcije je treba upoštevati odnos kulture, ki jo proučujemo, do manitola in glede na to uporabiti enega ali drugega seruma. Tako se kulture, ki ne razgradijo manitola, testirajo s polivalentnimi serumi proti dizenteriji Shigella Grigoriev-Shiga in Stutzer-Schmitz (1, 2), Large-Sachs (3-7), začasni tipi (8-10).

Kulture, ki razgrajujejo manitol, testiramo z mešanico št. 1 in polivalentnimi serumi proti Boydovi šigeli.

Če pride do aglutinacije izolirane kulture enega od teh serumov, se test kulture opravi z vsakim od serumov, vključenih v polivalentnega. Pozitiven rezultat z enim od serumov določa serovariant izolirane kulture.

Pri uporabi seruma Shigella Boyd se začne aglutinacija s serumom tistega serovarja, ki je najpogostejši na območju. Pri nas najpogosteje izoliramo serovariante Shigella Boyd 4, 5, 7, 9 in 12 (glej sliko 44).

Fluorescentna mikroskopija in biološko testiranje na morskih prašičkih se uporabljata kot pospešeni metodi za mikrobiološke raziskave dizenterije. Ob vnosu virulentnih sevov Shigella v veznično vrečko (pod spodnjo veko) se do konca prvega dne pri živalih razvije konjunktivitis.

Kontrolna vprašanja

1. Kateri material se uporablja za bakteriološko preiskavo pri diagnozi dizenterije in kako se zbira?

2. Razgradnja katerega ogljikovega hidrata daje pravico do negativnega odgovora?

3. Katere serume lahko uporabimo za določanje vrste, podvrste, serovarja in subserovarja Shigella Flexner?

4. Kateri serumi so vključeni v mešanico št. 1?

Preučite diagram študije dizenterije po dnevih.

Kulturni mediji

Ploskirev, Endo, EMS media(glej poglavje 19).

Vsebina članka

Šigela

Morfologija in fiziologija

Antigeni

Patogenost in patogeneza

Imuniteta

Ekologija in epidemiologija

Dizenterija (šigeloza)

Odvzem materiala za raziskave

Bakteriološke raziskave

Serološka diagnoza

Posebna preventiva in zdravljenje

Rod Escherichia.

Escherichia je najpogostejša aerobna črevesna bakterija, ki lahko pod določenimi pogoji povzroči široko skupino človeških bolezni, tako črevesne (driska) kot zunajčrevesne (bakteriemija, okužbe sečil itd.) lokalizacije. Glavna vrsta je E. coli (Escherichia coli) - najpogostejši povzročitelj nalezljivih bolezni, ki jih povzročajo enterobakterije. Ta patogen je pokazatelj fekalne kontaminacije, zlasti v vodi. Kot sanitarna indikatorja sta se pogosto uporabljala if - titer in if - indeks. Escherichia je del mikroflore debelega črevesa sesalcev, ptic, plazilcev in rib.

Kulturne lastnosti. Na tekočih gojiščih E. coli proizvaja difuzno motnost, na trdnih gojiščih tvori kolonije S- in R-forme. Na Endo, glavnem gojišču za Escherichio, E. coli, ki fermentira laktozo, tvori intenzivno rdeče kolonije s kovinskim sijajem, nefermentirajoče kolonije tvorijo bledo rožnate ali brezbarvne kolonije s temnejšim središčem, na gojišču Ploskireva so rdeče z rumenkastim odtenkom, na gojišču Ploskireva pa so rdeče z rumenkastim odtenkom, na gojišču Ploskireva pa so rdeče z rumenkastim odtenkom. na Levinovem mediju so temno modre s kovinskim sijajem.

Biokemijske lastnosti. V večini primerov E. coli fermentira ogljikove hidrate (glukozo, laktozo, manitol, arabinozo, galaktozo itd.) S tvorbo kisline in plina, proizvaja indol, vendar ne tvori vodikovega sulfida in ne utekočini želatine.

Antigenska struktura. Med patogeno in nepatogeno bakterijo Escherichia coli niso ugotovili pomembnih morfoloških razlik. Njihova diferenciacija temelji na študiji antigenskih lastnosti. Med površinskimi antigeni ločimo polisaharidne O-antigene, flagelarne H-antigene in kapsularne polisaharidne K-antigene. Znanih je več kot 170 variant O-antigenov (to ustreza patogenu, ki pripada določenemu serološka skupina) in 57 - H-antigeni (ki pripadajo serovar). del driskasto(povzroča drisko) Escherichia coli vključuje 43 O-skupin in 57 OH-različic.

Glavni dejavniki patogenosti diarejske E.coli.

1. Dejavniki adhezije, kolonizacije in invazije, povezani s pili, fimbrijskimi strukturami in proteini zunanje membrane. Kodirani so s plazmidnimi geni in spodbujajo kolonizacijo spodnjega dela tankega črevesa.

2. Eksotoksini: citotonini (spodbujajo hipersekrecijo tekočine v črevesnih celicah, motijo ​​presnovo vode in soli in spodbujajo razvoj driske) in enterocitotoksini (delujejo na celice črevesne stene in kapilarnega endotelija).

3. Endotoksin (lipopolisaharid).

Glede na prisotnost različnih dejavnikov patogenosti so diarejske E. coli razdeljene na pet glavnih vrst: enterotoksigene, enteroinvazivne, enteropatogene, enterohemoragične, enteroadhezivne.

4. Za patogene E. coli je značilna proizvodnja bakteriocinov (kolicinov).

Enterotoksigena E.coli imajo visokomolekularni toplotno labilni toksin, po delovanju podoben koleri, ki povzroča koleri podobno drisko (gastroenteritis pri majhnih otrocih, potovalna driska itd.).

Enteroinvazivna Escherichia coli lahko prodrejo v črevesne epitelijske celice in se v njih razmnožujejo. Povzročajo obilno drisko s primesi krvi in ​​veliko število levkocitov (indikator invazivnega procesa) v blatu. Klinično spominja na dizenterijo. Sevi imajo nekaj podobnosti s Shigella (nepremični, ne fermentirajo laktoze in imajo visoke enteroinvazivne lastnosti).

Enteropatogena E.coli- glavni povzročitelji driske pri otrocih. Lezije temeljijo na adheziji bakterij na črevesni epitelij s poškodbo mikrovil. Zanj je značilna vodena driska in huda dehidracija.

Enterohemoragična Escherichia coli povzročajo drisko s krvjo (hemoragični kolitis), hemolitično-uremični sindrom (hemolitična anemija v kombinaciji z odpovedjo ledvic). Najpogostejši serotip enterohemoragične Escherichie coli je O157:H7.

Enteroadhezivna E. coli ne tvorijo citotoksinov, slabo raziskano.

Epidemiologija. Glavni mehanizem širjenja diareične E. coli je fekalno-oralni. Okužba se lahko pojavi s hrano, vodo in pri negi živali. Ker Escherichia živi v črevesju številnih živalskih vrst, je težko določiti specifični vir okužbe. Kontaktna pot okužbe je lahko v zaprtih ustanovah. Enteropatogena in enteroinvazivna E. coli sta najpogostejša povzročitelja nozokomialnih izbruhov escherichiosis.

Laboratorijska diagnostika. Glavni pristop je izolacija čiste kulture na diferencialno diagnostičnih medijih in njena identifikacija z antigenskimi lastnostmi. RA se postavi s kompletom polivalentnih OK (za O- in K-antigene) serumov, nato adsorbiranih O-serumov in kultur, segretih na 100 stopinj Celzija (za uničenje K-antigenov).

Dodaten pomen ima biokemična diferenciacija. Identifikacija tipov diareje je mogoča z identifikacijo specifičnih markerjev (enterohemoragična E. coli ne fermentira sorbitola in serovar O157:H7 ne kaže beta-glukuronidazne aktivnosti).

Rod Shigella.

Šigela je črevesni patogen človeka in primatov, ki povzroča bacilarno dizenterijo ali šigelozo. V skladu z antigensko strukturo O-antigena in biokemičnimi lastnostmi so znani serotipi šigel razdeljeni v štiri vrste oziroma serološke skupine - S.dysenteriae (seroskupina A), S.flexneri (seroskupina B), S.boydii (seroskupina C). ) in S.sonnei (seroskupina D).

Avtor: morfološke značilnosti Shigella se ne razlikuje od drugih enterobakterij. To so nespecifične fakultativne anaerobne gramnegativne paličice.

Biokemijske lastnosti. Shigella je biokemično neaktivna v primerjavi z drugimi črevesnimi bakterijami. Na trisladkornem železovem agarju ne tvorijo vodikovega sulfida in ne fermentirajo sečnine.

Sevi S.dysenteriae (seroskupina A) imajo najmanjšo encimsko aktivnost, saj fermentirajo samo glukozo brez tvorbe plinov, za razliko od drugih šigel je ta vrsta negativna na manitol.

Shigella Flexner fermentira manitol in tvori indol, ne fermentira pa laktoze, dulcita in ksiloze. Serotip Newcastle je razdeljen na tri biokemične tipe. Za Shigello Flexner je bolj značilna vodna pot prenosa.

Boydove šigele (seroskupina C) imajo podobno biokemično aktivnost, vendar fermentirajo dulcit, ksilozo in arabinozo. Imajo več serotipov, od katerih ima vsak svoj glavni tip antigena.

Shigella Sonne (seroskupina D) je sposobna počasne fermentacije laktoze in saharoze ter ima biokemične tipe in fagotipe. Glavna pot prenosa je hrana (običajno z mlekom in mlečnimi izdelki).

Antigenska struktura. Shigella ima O- in K-antigene. O-antigeni imajo epitope različne specifičnosti - od tistih, ki so običajni za družino enterobakterij, do tipsko specifičnih. Razvrstitev upošteva samo termostabilno skupino (štiri skupine oziroma tipe - A, B, C in D) in tipsko specifično (delitev na serotipe). Toplotno labilni antigeni so K-antigeni (najdemo jih v skupinah A in C) in fimbrijski antigeni (pri Shigella Flexner so antigensko podobni E.coli). Za končno identifikacijo je potrebna določitev antigenske strukture.

Epidemiologija. Shigella je precej stabilna v zunanjem okolju. Vir okužbe je oseba z različnimi oblikami kliničnih manifestacij šigeloze. Mehanizem okužbe je fekalno-oralni. Za različne vrste šigel so značilne prevladujoče poti prenosa (kontaktno-gospodinjsko - za S.dysenteriae, hrana - za S.sonnei, voda - za S.flexneri). Za epidemični proces je značilna sprememba strukture krožečih populacij patogenov - sprememba vodilnih vrst, biovarjev, serovarjev, kar je povezano tako s spremembami populacijske imunosti kot s spremembami lastnosti patogena, zlasti s pridobitvijo različnih plazmidov (R, F, Col itd.). Infektivni odmerek je približno 200 - 300 Shigella. Dizenterija, ki jo povzroča Shigella Sonne, ima blažji potek.

Dejavniki patogenosti in patogeneza lezij. Glavna biološka značilnost šigel je sposobnost, da vdrejo v epitelijske celice, se v njih razmnožijo in povzročijo njihovo smrt. Nastanek lezije v sluznici descendentnega kolona (sigmoid in rektum) je cikličen: adhezija, kolonizacija, vnos šigel v citoplazmo enterocitov, razmnoževanje, uničenje in zavrnitev epitelijskih celic, sproščanje šigel v črevesni lumen, ponovno oprijem itd.

Vloga faktorji adhezije in kolonizacije izvajajo pili, proteini zunanje membrane, LPS, encimi - nevraminidaza, mucinaza, hialuronidaza (uničujejo sluz).

Shigella ima vrsto dejavniki invazije in odpornosti na delovanje obrambnih mehanizmov (K-antigen, LPS itd.), ki jih nadzirajo kromosomski geni in plazmidi Shigella.

Šigele imajo različne toksini. Imajo endotoksin in šigi podobne citotoksine (SLT-1, SLT-2). Citotoksini povzročajo uničenje celic, enterotoksin povzroča drisko, endotoksin pa splošno zastrupitev. Šiga toksin povzroči motnje v sintezi beljakovin, absorpciji natrijevih in vodnih ionov ter dotoku tekočine v mesto vnetja.

Najbolj značilni znaki griže so driska, tenezmi(boleči krči rektuma) in pogosti nagoni, splošna zastrupitev. Naravo blata določa stopnja poškodbe debelega črevesa.

Postinfekcijska imunost- vzdržljiv, tipsko specifičen.

Laboratorijska diagnostika. Glavna diagnostična metoda je bakteriološka. Iztrebke nacepimo na diferencialno diagnostična gojišča Endo in Ploskirev, da dobimo izolirane kolonije. Čiste kulture preučujemo glede na njihove biokemične lastnosti, identifikacijo izvajamo v RA s poli- in monovalentnimi serumi. Če ima izolirana kultura biokemične lastnosti šigel, vendar ne aglutinira serumov na O-antigene, jo je treba kuhati 30 minut, da se uničijo toplotno labilni K-antigeni, ki pogosto preprečujejo aglutinacijo šigel seroskupin A in C (tj. , ki imajo K-antigene), in ponovno raziskavo pri RA.

Za serološko diagnozo se uporablja RPGA s skupinsko diagnostiko eritrocitov.

Predavanje št. 8. Predstavniki rodov Vibrio, Campylobacter, Helicobacter.

Rod Vibrio.

Družina Vibrionaceae vključuje gibljive, ukrivljene, paličaste bakterije s polarnimi bički. Evolucijsko izvirajo iz vodnih bakterij, so zelo razširjene v sladki in morski vodi, v gostiteljih nevretenčarjev in vretenčarjev. Vrste, patogene za človeka, so razvrščene v rodove Vibrio, Aeromonas in Plesiomonas.

Za rod Vibrio so značilne kratke, ravne ali ukrivljene gramnegativne paličice, ki so gibljive, ne tvorijo spor ali kapsul in dobro rastejo na običajnih medijih. Fermentirajo ogljikove hidrate s tvorbo kisline brez plina in so občutljivi na vibriostatik O/129. Lahko se goji pri temperaturah od plus 18 do 37 o C, pH 8,6-9,0.

Predstavnike rodu Vibrio ločimo od drugih rodov družine z biokemičnimi preiskavami. Rod obsega več kot 25 vrst, od katerih je glavni pomen Vibrio cholerae- povzročitelj kolere, pa tudi V.parahaemolyticum, V.vulnificus.

Vibrio cholerae.

Morfologija. Vibrio cholerae ima en polarni flagelum, ki je pogosto podoben vejici ( Koch vejica). Pomemben diagnostični znak je mobilnost (določeno z mikroskopom po metodi viseče ali zdrobljene kapljice). Morfološko spremenljiv. Dobro se obarvajo s Pffefferjevim vodnim fuksinom in Ziehlovim karbolnim fuksinom.

Kulturne lastnosti. Fakultativni anaerob. Vibrio cholerae je nezahteven za hranilne medije. Dobro se razmnožuje v 1% alkalni (pH 8,6-9,0) peptonski vodi, prehiti bakterije črevesne skupine (obogatitveni medij) in tvori nežen modrikast film in motnost. Za zatiranje rasti Proteusa in nekaterih drugih mikroorganizmov se uporablja peptonska voda z dodatkom kalijevega telurita.

Na gostih medijih Vibrio cholerae tvori gladke, steklaste, prozorne kolonije v obliki diska z modrikastim odtenkom viskozne konsistence. Uporabite alkalni agar, agar z žolčno soljo, alkalni krvni agar, najboljši je TCBS agar (agar s tiosulfatom, citratom, žolčnimi solmi in saharozo).

Biokemijske lastnosti. Vibrio cholerae fermentira številne ogljikove hidrate (glukozo, saharozo, manozo, manitol, laktozo, levulozo, glikogen, škrob) s tvorbo kisline brez plina. V zvezi s tremi sladkorji ( Heibergova triada) - saharoza, manoza in arabinoza, vibrije delimo v osem biokemijskih skupin, Vibrio cholerae spada v prvo skupino (razgrajuje saharozo in manozo).

Vibrio cholerae razgrajuje želatino, kazein, koagulira mleko in razgrajuje beljakovinske pripravke na indol in amoniak.

Vrsto V.cholerae delimo na biotipi, serološke skupine in serovarjev.. Glavna biotipa sta klasični (V.cholerae asiaticae) in El Tor (V.cholerae eltor). Serogene skupine se razlikujejo po strukturi O-antigenov, v glavni skupini O1 Vibrio cholerae pa se razlikujejo serovarji Ogawa, Inaba in Hikojima.

Antigenska struktura. Pri Vibrio cholerae so izolirani termostabilni O-antigeni in termolabilni H-antigeni. Glede na strukturo O-antigenov je identificiranih 139 seroloških skupin, El Tor in klasični biotipi so združeni v skupino 01 (tipizirana z antiserumom 01). Izolate El Tor odlikujejo hemolitične lastnosti (povzročijo hemolizo ovčjih eritrocitov), ​​sposobnost aglutinacije piščančjih eritrocitov, odpornost na polimiksin in občutljivost na fage.

O-antigen skupine 01 je heterogen in vključuje skupno A-komponento in dve tipsko specifični - B in C. Glede na njihovo prisotnost ima serovar Ogawa kombinacijo AB, Inaba - AC, Hikojima - ABC.

Vibrio cholerae lahko prehaja iz S- v R- obliko, ne da bi bil aglutiniran z O- serumom. Zaradi antigenske zgradbe se za identifikacijo V.cholerae uporabljajo O-serum, OR-serum (za identifikacijo OR- in R-disociatov), ​​tipsko specifična seruma Inaba (C) in Ogawa (B). V devetdesetih letih prejšnjega stoletja je bil identificiran nov serovar V.cholerae 0139, ki ni aglutiniran z zgornjimi serumi in se v drugih lastnostih malo razlikuje od skupine Vibrio cholerae 01.

Vibrioni, ki niso tipizirani z glavnim serumom 01 (tj. Ne spadajo v skupino 01), se imenujejo neaglutinacijski (NAG) vibriji - podobni koleri ali paraholeri. H-antigen imata skupen z Vibrio cholerae, razlikujeta pa se po O-antigenu.

Glede na H-antigen ločimo skupini A in B, vibrione kolere uvrščamo v skupino A. Virioni skupine B (biokemično drugačni od vibriov kolere) imajo heterogeno strukturo O-antigena in jih delimo v šest seroloških podskupin.

Dejavniki patogenosti Vibrio cholerae.

1. Mobilnost(flagella) in kemotaksija.

2. Encimi spodbujajo adhezijo in kolonizacijo, interakcijo z epitelnimi celicami - mucinaza (redčenje sluzi), nevtaminidaza (interakcija z mikrovili, ustvarjanje pristajališča), lecitinaza in drugi.

3. Endotoksin- termostabilni lipopolisaharid, podoben strukturi in lastnostim drugim endotoksinom gram-negativnih bakterij.

4. Eksotoksin - holerogeni- glavni dejavnik patogenosti, toplotno labilna beljakovina. Sinteza holerogena je najpomembnejša, genetsko pogojena lastnost Vibrio cholerae. Molekula holerogena je sestavljena iz dveh fragmentov A in B. Dejansko toksično funkcijo opravlja peptid A 1 fragmenta A. Molekula holerogena prepozna enterocitni receptor, prodre v celično membrano, aktivira sistem adenilat ciklaze, kopičenje cikličnega AMP povzroči hipersekrecijo tekočine, Na +, HCO 3 -, K +, Cl - iz enterocitov. To vodi v drisko, dehidracijo in razsoljevanje telesa, značilno za kolero.

5. V mnogih vibrijih, vklj. ki ne spadajo v skupino 01, obstajajo različne enterotoksini.

6. V patogenezi manifestacij kolere je pomemben tudi dejavnik, ki poveča prepustnost kapilar.

Nekatere značilnosti epidemiologije. Kolera je črevesna okužba. Glavni vir je oseba (bolnik ali nosilec vibracij), onesnažena voda. Način okužbe je fekalno-oralni. Individualna dovzetnost za kolero je zelo različna. Zanj je značilno veliko število skritih (izbrisanih) oblik, vibriocarriage. Odkrivanje patogena v vodi je neposredno povezano s prisotnostjo bolnikov ali bakterijskih nosilcev. Vibriji kolere skupine 01 lahko ostanejo v vodnih ekosistemih dolgo časa v obliki nekultivirane oblike.

Laboratorijska diagnostika. Kolera spada v skupino posebej nevarnih okužb, gojenje njenega povzročitelja zahteva upoštevanje posebnega režima biološke varnosti. Glavna diagnostična metoda je bakteriološka, ​​ki vključuje izolacijo in identifikacijo povzročitelja.

Material za raziskave - iztrebki in bruhanje, sekcijski materiali mrtvih, vzorci vode in brisi iz okoljskih predmetov, ostanki hrane.

Za inokulacijo se uporabljajo tekoča obogatitvena gojišča, alkalni MPA, gojišča za selektivno in diferencialno diagnostiko (po možnosti TCBS). Kot transportni medij je najbolj primerna 1% peptonska voda. Sumljive steklaste prozorne kolonije subkulturiramo, da dobimo čisto kulturo, ki jo identificiramo po morfoloških, kulturnih, biokemičnih lastnostih, gibljivosti, antigenskih lastnostih in fagotipiziramo.

Za pospešeno diagnostiko uporabljamo imunoluminiscenčno metodo, biokemično identifikacijo s kompletom indikatorskih diskov, za detekcijo vibrionov kolere v primarnih materialih - RNGA s protitelesnim diagnostikom, za detekcijo nekultiviranih oblik - PCR, za določanje virulence in sinteza holeragena - biološki testi na kuncih sesih, ELISA, DNA - sonde (detekcija fragmenta kromosoma, ki nosi operon holerogena).

Specifična preventiva. Obstajajo različna cepiva - ubita iz serovarjev Inaba in Ogawa, toksoid koleragena, kemično bivalentno cepivo. Cepiva se uporabljajo samo za epidemiološke indikacije (nizka imunogenost). Izvaja se lahko antibiotična profilaksa (preventivno zdravljenje) s tetraciklini in drugimi antibiotiki.

V.parahaemolyticus(parahemolitični vibrio) je halofil, najdemo ga v morski vodi (Japonsko, Črno, Kaspijsko in druga južna morja). Pri uživanju morskih sadežev, ki niso bili ustrezno toplotno obdelani, ta povzročitelj pri ljudeh povzroča bolezni, ki se prenašajo s hrano, in dizenterijo - podobne bolezni. Povzroča hemolizo na krvnem agarju s povečano koncentracijo natrijevega klorida (7% NaCl - sevi z enteropatogenimi lastnostmi).

V. vulnificus- najbolj patogene vrste nekoleričnih vibrijev za ljudi. Odkrito v morski vodi in njenih prebivalcih. Povzroča okužbe ran, septikemijo in druge bolezni. Fermentira saharozo in laktozo ter tvori rumene kolonije na TCBS agarju.

Predstavniki rodov Campylobacter in Helicobacter.

Gram-negativni mikroaerofili teh dveh rodov so majhne, ​​gibljive bakterije v obliki paličice, ki ne tvorijo spor in so ukrivljene (v obliki črke S ali v obliki galebjih kril). Vrste, ki sestavljajo rod Helicobacter, vključno s H. pylori, povzročiteljem peptične razjede pri ljudeh, so izolirane iz rodu Campylobacter.

Rod Campylobacter

Ta rod vključuje 13 vrst spiralnih bakterij z enim ali več kodri. Kampilobakteri so gibljivi mikroorganizmi s polarnimi bički (ali flagelami) in vijačnim gibanjem. Ne fermentirajo in ne oksidirajo ogljikovih hidratov, kaprofilov in mikroaerofilov, tj. zahtevajo povečane koncentracije CO 2 in znižane koncentracije O 2 .

Rod vključuje vrste, ki so patogene za ljudi in toplokrvne živali. Bolezni, ki jih povzročajo, so kampilobakterioze - akutne črevesne bolezni, ki se pojavijo s poškodbo prebavil. Kampilobakterje pogosto izoliramo iz črevesja, ustne votline in genitourinarnih organov toplokrvnih živali.

Obstaja skupina C.jejuni (vključuje to vrsto, pa tudi C.coli, C.lari) ali termofilnih kampilobakterij. Odlikuje jih visok temperaturni optimum za rast (+42 0 C).

Med mezofilnimi kampilobakterijami z optimalno rastjo pri +37 0 C ima C.fetus pomembno vlogo v človeški patologiji (povzroči artritis, meningitis, vaskulitis, splav), obstaja pa tudi vrsta pogojno patogenih vrst (C.concisus in C. .sputorum - v ustni votlini, C.fennelliae, C.cinaedi in C.hyointestinalis - v debelem črevesu).

Kulturne lastnosti. Campylobacters potrebujejo posebne plinske mešanice za ustvarjanje mikroaerofilnih pogojev, pH - 7,0-7,2, mezofilnih pogojev (+42 0 C za termofile, +37 0 C za druge). Uporabljajo posebne hranilne medije (meso, jetra, kri) z dodatkom selektivnih antibiotikov. Za pridobitev čistejših vzorcev za kulturo (pogosto se proučujejo koprofiltrati!) se lahko uporabi filtracija skozi membranske filtre s premerom por 0,65 µm. Na gostih medijih tvorijo dve vrsti kolonij - "razširjene" z neravnimi robovi ali sijoče konveksne z gladkimi robovi, majhne kolonije.

Biokemijske lastnosti. So inertni na ogljikove hidrate, reducirajo nitrate, oksidaza je pozitivna, energijo pridobivajo iz aminokislin in trikarboksilnih kislin. Razlikovanje vrst po biokemijskih lastnostih temelji na hidroliza hipurata(C.jejuni in C.coli), občutljivost na nalidiksična kislina(C.jejuni in C.lari), tvorba vodikovega sulfida itd.

Antigenska struktura. Kampilobakteri imajo O-, H- in K-antigene. Za serotipizacijo so najpomembnejši toplotno stabilni O-antigeni.

Epidemiološke značilnosti. Campylobacter je pogost pri različnih vrstah sesalcev in ptic. Glavna pot prenosa je hrana. Značilna je predvsem poletna sezonskost.

Glavni patogenetski dejavniki. Za kampilobakterje je značilna visoka adhezivna in invazivna aktivnost, hitra kolonizacija zgornjih delov tankega črevesa. Najpomembnejši dejavniki adhezije so flagele in specifični površinski adhezini. Te bakterije imajo endotoksin, toplotno labilen enterotoksin.

Klinične manifestacije- enterokolitis.

Laboratorijska diagnostika. Mikroskopska metoda - barvanje z 1% vodno raztopino bazičnega fuksina 10-20 sekund - razkrije kratke verige v obliki črke S, "galebova krila". Glavna metoda je bakteriološka - kultura blata. Kulture prepoznamo po nizu značilnosti.

Helicobacter pylori.

Peptični ulkus je bolezen, za katero je značilna prisotnost ulcerativne okvare na želodčni sluznici ali dvanajstniku. Odkritje H. pylori je povzročilo revolucijo v predstavah o etiologiji, patogenezi, zdravljenju in preprečevanju peptične ulkusne bolezni. Peptični ulkus je skoraj 100% povezan s Helicobacter pylori. Pomembno vlogo pri nastanku bolezni igrajo tudi stresni dejavniki in psihološke značilnosti bolnikov ter genetski dejavniki.

Morfološke in kulturne lastnosti- podobno kot Campylobacter. Raje ima čokoladni agar.

Biokemijske lastnosti. Je pozitiven na ureazo, oksidazo in katalazo.

Antigenske lastnosti. Vsebuje O- in H-antigene.

Patogeneza lezij. Helicobacter prodre skozi plast sluzi (običajno v antrumu želodca in dvanajstniku), se pritrdi na epitelijske celice in prodre v kripte in žleze sluznice. Bakterijski antigeni (predvsem LPS) spodbujajo migracijo nevtrofilcev in povzročajo akutno vnetje. Helicobacter so lokalizirani v območju medceličnih prehodov, kar je posledica kemotaksije na sečnino in hemin (uničenje hemoglobina eritrocitov v mikrovaskulaturi). Pod vplivom ureaze Helicobacter se sečnina razgradi v amoniak, katerega delovanje je povezano s poškodbo sluznice želodca in dvanajstnika. Številni encimi (mucinaza, fosfolipaza itd.) Prav tako lahko spodbujajo motnje celovitosti sluznice.

Dejavniki patogenosti H. pylori vključujejo predvsem dejavnike kolonizacije (adhezija, gibljivost), dejavnike obstojnosti in dejavnike, ki povzročajo bolezen. Ključni dejavniki tropizma in patogenosti H. pylori vključujejo mehanizme adhezije in izločanja bakterijskih toksinov. Predstavljeni so dokazi o vodilni vlogi antigena Lewis B kot adhezijskega receptorja. Poleg njih so pomembni želodčni mucini in sulfatidi želodčne sluznice. Identificiran je bil patogenov protein Bab A (adhezin), ki mikroorganizmu omogoča, da se veže na antigen krvne skupine Lewis B, ki je prisoten na površini želodčnih epitelijskih celic. Drugi dejavniki patogenosti vključujejo cag A (s citotoksinom povezan gen) in vac A (vakuolizirajoči citotoksin). Sevi, ki izražajo te označevalce virulence, spadajo med seve prvega tipa, ki so povezani s povečanim ulcerogenim in vnetnim potencialom, v nasprotju s sevi drugega tipa, ki teh dejavnikov nimajo.

Prisotnost vseh treh dejavnikov (Bab A, cag A, vacA) je bistvena za manifestacijo patogenih lastnosti H. pylori (triplet - pozitivni sevi). Škodljiv učinek na sluznico je lahko povezan tako z neposrednim učinkom bakterijskih toksinov kot s posrednim učinkom preko imunskega sistema. Dolgotrajna obstojnost patogena je povezana s številnimi mehanizmi, ki mu omogočajo premagovanje zaščitnih pregrad sluznice in sposobnost tvorbe kokalnih oblik, ki nimajo patogenega potenciala.

H. pylori ne povzroči vedno razvoja peptičnih razjed, vendar se v peptičnih ulkusih ta povzročitelj nenehno odkrije. Dejavniki, ki določajo ulcerogenost H. pylori, se intenzivno proučujejo.

Laboratorijska diagnostika mora biti celovit, temeljiti na več testih. Metode odkrivanja so lahko invazivne (povezane s potrebo po odvzemu biopsije sluznice) in neinvazivne (posredne).

Osnovne metode dokazovanja H. pylori v biopsijah sluznice.

1.Mikroskopske metode (barvanje s hematoksilin-eozinom, akridin oranžnim, po Gramu, vodnim fuksinom, impregnacijo s srebrom; fazno-kontrastna mikroskopija z določanjem mobilnosti).

2. Določanje aktivnosti ureaze.

3. Izolacija in identifikacija povzročitelja na trdnih gojiščih (običajno krvi). Kulture izvajamo na krvnem agarju, krvnem agarju z amfotericinom, eritritol - agarju z amfotericinom. Kultivirajte 5-7 dni pri 37 o C v mikroaerofilnih, aerobnih in anaerobnih pogojih. Pripadnost določajo morfologija mikroorganizmov in njihovih kolonij, vijačna gibljivost, rast v mikroaerofilnih razmerah in odsotnost rasti v aerobnih in anaerobnih razmerah ter pri temperaturah +25 in +42 o C, prisotnost oksidaze, katalaze in ureaze. dejavnost.

4. Odkrivanje antigenov patogenov v ELISA.

5.PCR diagnostika je najbolj občutljiv in specifičen test.

Neinvazivne metode vključujejo "dihalni test" in ELISA za odkrivanje protiteles IgG in IgA.

Zdravljenje zapleteno, z uporabo sanitarnih metod (sevanje povzročitelja). Uporabljajo se De-NOL (koloidni bizmutov subcitrat), ampicilin, trihopol (metronidazol) itd.

Predhodni zaključek: glede na biokemične značilnosti izolirana kultura ustreza podskupini Shigella _______________________________

4. Izvedite aglutinacijsko reakcijo na steklu izolirane kulture s tipsko specifičnimi serumi na Flexnerjevo šigelo (1,2,3), dobljene rezultate primerjajte s tabelo 3 in podajte sklep.

Tabela 3

Razvrstitev šigel po antigenski strukturi

Zaključek: Shigella flexneri je bila izolirana iz bolnikovega blata;

serovar ________________________________________________________________

5. Dopolnite shemo za laboratorijsko diagnostiko dizenterije.

Raziskljivo

material:

	Stopnja I. Stopnja II
Stopnja III						RA z vrsto, tipom, podtipom diagnostičnih serumov

Naštejte lastnosti šigel, ki so potrebne za določitev njihove vrste, tipa in podtipa: _____________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________

6. Naštejte dejavnike patogenosti šigel: __________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________

III. Študijski diagnostični pripravki (diagnostični imunski serumi, diagnostiki, antigeni)

Podpis učitelja _______________________________________

Datum__________________

Lekcija 4

Predmet: Salmonella tifus, paratifus in gastroenteritis. Laboratorijska diagnostika salmoneloze.

Teme za razpravo:

1. Razvrstitev salmonele. Ključne značilnosti pri prepoznavanju salmonele.

2. Dejavniki patogenosti salmonelnega tifusa in patogeneza bolezni.

3. Faze laboratorijske diagnoze tifusne mrzlice v dinamiki bolezni.

4. Dejavniki patogenosti salmonel – povzročiteljev gastroenteritisa.

5. Laboratorijska diagnostika salmonelnega gastroenteritisa.

6. Preprečevanje trebušnega tifusa, paratifusa in gastroenteritisa zaradi salmonele.

Praktične naloge:

I. Bakteriološka preiskava pacientove krvi.

1. Preučite rezultat gojenja hemokultur v 10 % žolčni juhi in zabeležite spremembe v gojišču.

3. Določite encimske lastnosti izolirane hemokulture v gojišču Olkenitsky in podajte predhodni zaključek.

4. Preučite biokemične lastnosti salmonele v Hissovem mediju (prikaz) in jih primerjajte s podatki v tabeli 1.