पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) एक उच्च-परिशुद्धता आणविक आनुवंशिक निदान पद्धति है जो आपको मनुष्यों में विभिन्न संक्रामक और वंशानुगत बीमारियों की पहचान करने की अनुमति देती है, दोनों तीव्र और पुरानी चरणों में, और बीमारी के प्रकट होने से बहुत पहले।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) का विकास कैरी मुलिस (यूएसए) द्वारा 1983 में किया गया था, जिसके लिए उन्हें 1993 में रसायन विज्ञान में नोबेल पुरस्कार से सम्मानित किया गया था।

अधिकांश संक्रमणों के लिए पीसीआर विश्लेषण एक प्रकार का "स्वर्ण मानक" बन गया है। अधिकांश विशेषज्ञ लगभग हर दिन इसका सामना करते हैं और इसके बिना अंतिम निदान की कल्पना भी नहीं कर सकते। पीसीआर अक्सर ऐसे समय में रोग के सक्रिय चरणों की पहचान करने के लिए एकमात्र प्रतिक्रिया बन जाता है जब अन्य बैक्टीरियोलॉजिकल, वायरोलॉजिकल और इम्यूनोलॉजिकल निदान विधियां काम नहीं करती हैं।

आधुनिक चिकित्सा में पीसीआर निदान के लाभ:

परीक्षण नमूने में रोगज़नक़ (अर्थात्, रोगज़नक़ के डीएनए या आरएनए का एक विशिष्ट क्षेत्र) की उपस्थिति का प्रत्यक्ष पता लगाना।
उच्च विशिष्टता आपको किसी विशिष्ट रोगज़नक़ के डीएनए या आरएनए विशेषता के एक अद्वितीय खंड को निर्धारित करने की अनुमति देती है, जो झूठी प्रतिक्रियाओं की संभावना को समाप्त करती है।
पीसीआर विधि की उच्च संवेदनशीलता आपको रोगजनकों (वायरस, बैक्टीरिया) की एकल कोशिकाओं का भी पता लगाने की अनुमति देती है। परीक्षण नमूने में पीसीआर विश्लेषण की संवेदनशीलता 10-1000 कोशिकाएं हैं (उदाहरण के लिए, प्रतिरक्षाविज्ञानी और सूक्ष्म परीक्षणों की संवेदनशीलता केवल 103-105 कोशिकाएं हैं)।
विभिन्न रोगजनकों का पता लगाने के लिए एक सार्वभौमिक पीसीआर तकनीक का विकास। पीसीआर पद्धति का उपयोग करके अनुसंधान का उद्देश्य रोगज़नक़ की आनुवंशिक सामग्री (डीएनए, आरएनए) है। तकनीक आपको एक जैविक नमूने से कई रोगजनकों की पहचान करने की अनुमति देती है।
विश्लेषण परिणाम काफी शीघ्रता से प्राप्त करें। पूरी जांच 4-4.5 घंटों में हो जाती है, कम बार - थोड़ा अधिक समय में।
रोग के लक्षणों की शुरुआत से पहले (प्रीक्लिनिकल डायग्नोसिस) और रोग समाप्त होने के बाद (पूर्वव्यापी निदान) रोगजनकों का पता लगाने की क्षमता। प्रीक्लिनिकल डायग्नोस्टिक्स का एक उदाहरण ऊष्मायन अवधि के दौरान परीक्षा होगी (संक्रमण के क्षण से लेकर रोगी की शिकायत तक), साथ ही अव्यक्त संक्रमण (जब कोई लक्षण नहीं होते हैं, लेकिन केवल प्रयोगशाला डेटा - पीसीआर, उदाहरण के लिए)। पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के महत्वपूर्ण पहलुओं में से एक अभिलेखीय सामग्री या जैविक अवशेषों में पीसीआर करना है, जो व्यक्तित्व या पितृत्व की पहचान के लिए महत्वपूर्ण है।

वर्तमान में, पीसीआर डायग्नोस्टिक्स महत्वपूर्ण विकास के दौर से गुजर रहा है। विधि में ही सुधार किया जा रहा है, पीसीआर की नई किस्में बार-बार सामने आती हैं, और इस प्रतिक्रिया के लिए नई परीक्षण प्रणालियाँ चिकित्सा बाजार में प्रवेश कर रही हैं। इसके कारण, पीसीआर अध्ययन की लागत हर साल रोगियों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए अधिक किफायती होती जा रही है।

पीसीआर विधि किस पर आधारित है?

पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया का आधार प्रयोगशाला में एंजाइमों का उपयोग करके डीएनए या आरएनए के एक निश्चित खंड का बार-बार दोगुना (प्रवर्धन) करना है। परिणामस्वरूप, दृश्य विश्लेषण के लिए पर्याप्त डीएनए या आरएनए की मात्रा बनती है। अध्ययन के दौरान, केवल उस क्षेत्र की प्रतिलिपि बनाई जाती है जो निर्दिष्ट शर्तों के अनुरूप होता है, और केवल तभी जब वह परीक्षण नमूने में मौजूद हो।

उदाहरण के लिए, अनुसंधान के लिए सामग्री जिसमें किसी रोगज़नक़ के डीएनए या आरएनए के टुकड़े (लार, रक्त, मूत्र, जननांग अंगों से स्राव) की उपस्थिति मानी जाती है, उसे एक विशेष रिएक्टर (एम्प्लीफायर) में रखा जाता है। इसके बाद, इसमें विशिष्ट एंजाइम जोड़े जाते हैं, जो रोगज़नक़ के डीएनए या आरएनए से जुड़ते हैं, और इसकी प्रतिलिपि संश्लेषित की जाती है। यह प्रतिलिपि "श्रृंखला प्रतिक्रिया" की तरह कई चरणों में होती है, और अंततः आनुवंशिक सामग्री की एक प्रति से सैकड़ों और हजारों प्रतियां बनाई जा सकती हैं। इसके बाद विभिन्न रोगजनकों की संरचना पर मौजूदा डेटाबेस के साथ परिणाम का विश्लेषण और तुलना आती है। पीसीआर का उपयोग करके, आप न केवल रोगज़नक़ के प्रकार की पहचान कर सकते हैं, बल्कि विश्लेषण का मात्रात्मक परिणाम भी प्रदान कर सकते हैं, अर्थात मानव शरीर में कितने रोगज़नक़ हैं।

पीसीआर विधि वर्तमान में अनुसंधान संभावनाओं की सीमा का विस्तार कर रही है: उत्परिवर्तन का परिचय, डीएनए टुकड़ों को जोड़ना, और चिकित्सा में व्यापक हो गया है, उदाहरण के लिए, पितृत्व स्थापित करना, नए जीन का उद्भव, आदि।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग करके किन संक्रमणों का पता लगाया जा सकता है?

1) एचआईवी संक्रमण (मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस एचआईवी-1 का पता लगाया जा सकता है)
2) वायरल हेपेटाइटिस ए, बी, सी, जी (आरएनए-एचएवी, डीएनए-एचबीवी, आरएनए-एचसीवी, आरएनए-एचजीवी)
3) संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस (एपस्टीन-बार वायरस डीएनए - ईबीवी)
4) साइटोमेगालोवायरस संक्रमण (डीएनए-सीएमवी)
5) हरपीज संक्रमण (डीएनए हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस एचएसवी प्रकार 1 और 2)
6) एसटीआई (यौन संचारित संक्रमण) - यूरियाप्लाज्मोसिस, गार्डनरेलोसिस, क्लैमाइडिया, माइकोप्लाज्मोसिस, ट्राइकोमोनिएसिस,
7) क्षय रोग (माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस)
8) ऑन्कोजेनिक वायरस - पेपिलोमावायरस संक्रमण (मानव पेपिलोमावायरस (इसके ऑन्कोजेनिक प्रकार 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, और 59 सहित)
9) बोरेलिओसिस, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस
10) लिस्टेरियोसिस
11) कैंडिडिआसिस (जीनस कैंडिडा का कवक)
12) हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण
और दूसरे

रोगजनकों की सीमा को ध्यान में रखते हुए, पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का सक्रिय रूप से स्त्री रोग, मूत्र संबंधी अभ्यास, संक्रामक रोग अभ्यास, पल्मोनोलॉजी, फ़ेथिसियोलॉजी, गैस्ट्रोएंटरोलॉजी, हेमेटोलॉजी, ऑन्कोलॉजी और अन्य में उपयोग किया जाता है।

अनुसंधान के लिए सामग्री और उसके संग्रहण के नियम

पीसीआर अनुसंधान के लिए सामग्री, जिसमें विदेशी जीवाणु डीएनए या वायरल डीएनए या आरएनए का पता लगाया जा सकता है, विभिन्न जैविक मीडिया और मानव तरल पदार्थ हो सकते हैं: बलगम, मूत्र, रक्त, थूक, उपकला कोशिकाओं के टुकड़े, अपरा ऊतक, रक्त, प्रोस्टेट रस, एमनियोटिक द्रव, फुफ्फुस द्रव।

यौन संचारित संक्रमणों (एसटीआई) की जांच करते समय, पुरुषों और महिलाओं में जननांग स्राव, गर्भाशय ग्रीवा से धब्बा या खुरचना, मूत्रमार्ग (मूत्रमार्ग) से धब्बा या खुरचना और मूत्र का परीक्षण किया जाता है।

संक्रमण (हर्पेटिक संक्रमण, सीएमवी, मोनोन्यूक्लिओसिस, टोक्सोप्लाज्मोसिस, हेपेटाइटिस बी, सी, एचआईवी संक्रमण) की जांच करते समय, पीसीआर के लिए रक्त लिया जाता है।

संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, सीएमवी, या हर्पेटिक संक्रमण का निदान करने के लिए, गले से एक स्वाब लिया जाता है, और सीएमवी का परीक्षण करने के लिए मूत्र लिया जाता है। अक्सर किसी घाव की जांच करने के लिए तंत्रिका तंत्रकई अध्ययनों में मस्तिष्कमेरु द्रव लिया जाता है।

पल्मोनोलॉजी में, प्रयुक्त सामग्री थूक और फुफ्फुस द्रव है।

अंतर्गर्भाशयी संक्रमणों की जांच करते समय - एमनियोटिक द्रव, अपरा ऊतक।

सामग्री और पीसीआर डायग्नोस्टिक्स की डिलीवरी की तैयारी

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स से गुजरने वाले लगभग सभी रोगियों को विश्वसनीय, सटीक और त्वरित परिणाम पर भरोसा करने का अधिकार है, जो काफी हद तक प्रयोगशाला की क्षमताओं और प्रयोगशाला चिकित्सक की व्यावसायिकता पर निर्भर करता है। साथ ही, कई लोग यह नहीं सोचते कि यह विश्वसनीयता काफी हद तक हम पर निर्भर करती है, अर्थात् इलाज करने वाले डॉक्टर की सिफारिशों, जीवनशैली और सामग्री के संग्रह की शुद्धता पर। सामग्री एकत्र करते समय, ऐसी स्थितियों की आवश्यकता होती है जो सामग्री के संदूषण (संदूषण) को बाहर करती हैं और तदनुसार, विश्लेषण की निष्पक्षता पर संदेह पैदा करती हैं।

सामग्री जमा करने के लिए उचित तैयारी विशेष रूप से कठिन नहीं है। मरीजों के लिए डॉक्टरों की ओर से निम्नलिखित सिफारिशें हैं:

1) सामग्री प्रस्तुत करने से एक दिन पहले यौन रूप से सक्रिय न रहें;
2) परीक्षण के लिए रक्त सुबह खाली पेट दान किया जाता है (खाएं या पिएं नहीं);
3) मूत्र दान करते समय, सुबह का पहला भाग एक साफ, कीटाणुरहित कंटेनर में एकत्र किया जाता है।

पीसीआर विश्लेषण के लिए तैयारी का समय

सामग्री जमा करने के 1.5-2 दिन बाद अंतिम परिणाम तैयार हो जाता है। कुछ मामलों में, परिणाम पहले दिन ही तैयार हो जाता है।

पीसीआर परिणामों की व्याख्या

नकारात्मकपीसीआर परिणाम इंगित करता है कि डिलीवरी के समय परीक्षण सामग्री में संक्रामक एजेंटों का कोई निशान नहीं पाया गया। अधिकांश मामलों में उस संक्रमण की अनुपस्थिति दिखती है जिसे परीक्षण नमूने में खोजने की कोशिश की गई थी।

सकारात्मकपीसीआर परिणाम परीक्षण किए जा रहे जैविक नमूने में संक्रमण के निशान का पता लगाने का संकेत देता है। बड़ी सटीकता के साथ, एक सकारात्मक परिणाम एक निश्चित समय पर संक्रमण की उपस्थिति को इंगित करता है।

ऐसी स्थितियाँ होती हैं जब पीसीआर सकारात्मक हो जाता है, लेकिन कोई सक्रिय संक्रमण के बारे में बात नहीं कर सकता है - यह तथाकथित "स्वस्थ गाड़ी" है नैदानिक ​​लक्षणएक ऐसी बीमारी जिसके लिए उपचार की आवश्यकता नहीं होती है, लेकिन डॉक्टर द्वारा गतिशील निगरानी की आवश्यकता होती है। यह कई वायरल संक्रमणों (एचपीवी, सीएमवी संक्रमण, ईबीवी संक्रमण, हर्पेटिक संक्रमण और अन्य) के साथ लार, गर्भाशय ग्रीवा नहर के स्क्रैपिंग, मूत्रमार्ग, यानी स्थानीय फोकस से सामग्री में अधिक बार देखा जाता है। हालाँकि, हमें यह नहीं भूलना चाहिए कि वाहकों से स्वस्थ लोगों में संक्रमण का संचरण, संक्रमण की तरह ही संभव है जीर्ण रूपप्रक्रिया की सक्रियता के साथ रोग। यदि रक्त में पीसीआर सकारात्मक है, तो यह अब कोई समस्या नहीं है और इसके लिए विशिष्ट उपचार की आवश्यकता होती है।

पीसीआर के मात्रात्मक परिणाम का मूल्यांकन केवल एक डॉक्टर द्वारा किसी विशेष संक्रमण के लिए अलग से किया जाता है और इसमें सामान्य ग्रेडेशन नहीं होता है। मात्रात्मक पीसीआर परिणाम के आधार पर, डॉक्टर संक्रमण गतिविधि की डिग्री निर्धारित कर सकता है और रोग का चरण निर्धारित कर सकता है, जो निश्चित रूप से निर्धारित दवाओं के पाठ्यक्रम और खुराक को प्रभावित करेगा।

आखिरी रोमांचक सवालों में से एक: पीसीआर डायग्नोस्टिक्स कितना सटीक है?

पीसीआर विश्लेषण की 3 परिभाषाएँ हैं:

1. सटीकता (संभावना की उच्च डिग्री के साथ संक्रमण का पता लगाना या उससे बचना संभव है)।
2. विशिष्टता (किसी विशिष्ट संक्रमण का पता लगाने की सटीकता)।
3. संवेदनशीलता (परीक्षण नमूने में रोगजनकों की आनुवंशिक सामग्री की कम सामग्री के साथ भी, संक्रमण का पता लगाया जाएगा)।

पॉलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया व्यावहारिक रूप से गलत परिणाम नहीं देती है। सकारात्मक नतीजे(अर्थात जहां कोई संक्रमण नहीं है वहां कोई सकारात्मक नमूने नहीं हैं)। गलत-नकारात्मक परिणाम दुर्लभ हैं (अक्सर इस समय व्यक्ति में सक्रिय संक्रमण की अनुपस्थिति के कारण)। उदाहरण के लिए, अव्यक्त संक्रमण, गतिविधि के बिना पुराना संक्रमण।

संक्रामक रोग चिकित्सक एन.आई. बायकोवा

संक्रमण के लिए पीसीआर परीक्षण क्यों और कैसे करें, इसके बारे में वीडियो

अत्यधिक जानकारीपूर्ण पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) विधि तीव्र या कालानुक्रमिक रूप से होने वाली विभिन्न आनुवंशिक और संक्रामक बीमारियों का शीघ्र पता लगाना संभव बनाती है। इसके अलावा, उन्हें उस चरण में भी पहचाना जा सकता है जब उनमें कोई लक्षण दिखाई नहीं देते हैं। अक्सर, पीसीआर विश्लेषण का उपयोग यौन संचारित संक्रमणों (एसटीडी, एसटीआई) का पता लगाने के लिए किया जाता है।

पीसीआर विश्लेषण एक आणविक निदान पद्धति को संदर्भित करता है, जो किसी भी जैविक सामग्री (गर्भाशय ग्रीवा, योनि, मूत्रमार्ग, रक्त, लार, थूक से धब्बा) में रोगज़नक़ के न्यूक्लिक एसिड (डीएनए) के कुछ टुकड़ों की छोटी सांद्रता में कई वृद्धि पर आधारित है। आदि) और ज्ञात प्रकार के संक्रामक एजेंटों के डेटाबेस के साथ इसके डीएनए या आरएनए की तुलना करें।

यह तकनीक पिछली शताब्दी के 80 के दशक में अमेरिकी कैरी मुलिस द्वारा विकसित की गई थी। 1993 में, वैज्ञानिक ने रसायन विज्ञान में नोबेल पुरस्कार जीता। आज, अधिकांश संक्रमणों के निदान के लिए पीसीआर परीक्षण को एक प्रकार का "स्वर्ण मानक" माना जाता है। रोग की प्रकृति को स्पष्ट करने और सटीक निदान करने के लिए चिकित्सा पद्धति में पीसीआर विश्लेषण का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। बहुत बार ऐसे मामले होते हैं जब सभी ज्ञात इम्यूनोलॉजिकल, वायरोलॉजिकल और बैक्टीरियोलॉजिकल तरीकेकाम नहीं करते। तब पीसीआर रोग की सक्रिय अवस्था की पहचान करने का एकमात्र तरीका बन जाता है।

अन्य तरीकों की तुलना में पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के लाभ

कई निर्विवाद फायदों के कारण पीसीआर तकनीक को आधुनिक चिकित्सा में व्यापक अनुप्रयोग मिला है। आइए उनके बारे में अधिक विस्तार से बात करें।

रोगज़नक़ की उपस्थिति का सीधे पता लगाने की क्षमता

कई पारंपरिक निदान विधियां मार्करों - प्रोटीन के निर्धारण पर आधारित हैं जो रोगज़नक़ के अपशिष्ट उत्पाद हैं। यह निदान सिद्धांत केवल विकृति विज्ञान की अप्रत्यक्ष पुष्टि प्रदान कर सकता है। पीसीआर विधि रोगज़नक़ की प्रत्यक्ष पहचान प्रदान करती है, क्योंकि यह रोगजनक जीवों के डीएनए के विशिष्ट वर्गों की पहचान करती है।

उच्च विशिष्टता

पीसीआर तकनीक इस तथ्य के कारण अत्यधिक विशिष्ट है कि यह केवल एक विशिष्ट संक्रामक एजेंट की विशेषता वाले डीएनए अंशों का पता लगाने की अनुमति देती है। प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों का उपयोग करते समय, गलत परिणाम प्राप्त करने की संभावना अभी भी बनी रहती है (निदान में त्रुटियां क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीजन से जुड़ी होती हैं)। जहां तक ​​पीसीआर का सवाल है, यहां त्रुटियों को बाहर रखा गया है, क्योंकि इस मामले में विशिष्टता प्राइमरों के न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम द्वारा निर्धारित की जाती है।

उच्च संवेदनशील

इस विधि का उपयोग करके, एकल रोगजनक सूक्ष्मजीवों का भी निर्धारण किया जाता है। मानव शरीर में संक्रामक एजेंटों का पता तब भी चलता है जब अन्य निदान विधियां स्थिति को स्पष्ट नहीं करती हैं (हम विभिन्न प्रतिरक्षाविज्ञानी सूक्ष्म और जीवाणुविज्ञानी अनुसंधान विधियों के बारे में बात कर रहे हैं)।

तुलना के लिए यहां कुछ डेटा दिया गया है. सूक्ष्म और प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों की संवेदनशीलता 103-105 कोशिकाएं है, और पीसीआर की संवेदनशीलता प्रति नमूना 10-100 कोशिकाएं है।

विधि की बहुमुखी प्रतिभा

पीसीआर तकनीक रोगजनक जीवों के डीएनए के अध्ययन पर आधारित है। शोध के दौरान, आरएनए या डीएनए के टुकड़े निर्धारित किए जाते हैं जो विशिष्ट संक्रामक एजेंटों के लिए विशिष्ट होते हैं। चूँकि सभी न्यूक्लिक एसिड की रासायनिक संरचना समान होती है, जब प्रयोगशाला विश्लेषणमानकीकृत तरीकों का उपयोग किया जा सकता है। इसका मतलब यह है कि एक नमूने के अध्ययन से एक साथ कई रोगजनकों की पहचान करना संभव हो जाता है।

शीघ्र परिणाम प्राप्त करें

इस तकनीक में रोगज़नक़ संस्कृतियों की खेती की आवश्यकता नहीं होती है, जिसमें काफी समय लगता है। सामग्री के प्रसंस्करण और प्रतिक्रिया उत्पादों की पहचान के लिए एक एकीकृत तकनीक के उपयोग के साथ-साथ एक स्वचालित प्रवर्धन प्रक्रिया के लिए धन्यवाद, पूरी शोध प्रक्रिया में केवल कुछ घंटे लगते हैं।

अव्यक्त रूप में संक्रमण का पता लगाने की संभावना

पीसीआर तकनीक प्रीक्लिनिकल डायग्नोस्टिक्स (लक्षणों की शुरुआत से पहले रोगजनकों की पहचान) और पूर्वव्यापी निदान (बीमारी के बाद रोगजनकों की पहचान) को प्रभावी ढंग से करना संभव बनाती है। इस प्रकार, किसी मरीज की जांच करते समय प्रीक्लिनिकल डायग्नोस्टिक्स का बहुत महत्व है उद्भवनसंभावित रोग - पहले लक्षण प्रकट होने से पहले संदिग्ध संक्रमण के बाद।

पीसीआर के महत्वपूर्ण लाभों में से एक विश्लेषण के लिए जैविक अवशेषों या अभिलेखीय सामग्रियों का उपयोग करने की क्षमता है। इससे पितृत्व और पहचान की पहचान करना संभव हो जाता है।

आज, पीसीआर निदान विधियों का विकास जारी है। विश्लेषण तकनीक में ही सुधार किया जा रहा है, और नए प्रकार के पीसीआर उभर रहे हैं। इस प्रतिक्रिया के लिए नवीन परीक्षण प्रणालियाँ चिकित्सा पद्धति में पेश की जा रही हैं। विज्ञान में इतनी तीव्र प्रगति के कारण, प्रक्रिया की लागत कम हो रही है, और पीसीआर परीक्षण का उपयोग अब कई श्रेणियों के रोगियों के लिए किया जा सकता है।

यह निदान पद्धति आरएनए या डीएनए के किसी दिए गए खंड के एकाधिक दोहरीकरण पर आधारित है। यह प्रक्रिया प्रयोगशाला में विशेष एंजाइमों का उपयोग करके की जाती है। परिणामस्वरूप, दृश्य परीक्षण के लिए आवश्यकतानुसार कई डीएनए (आरएनए) अनुभाग बनते हैं। प्रक्रिया के दौरान, केवल वही क्षेत्र कॉपी किया जाता है जो निर्दिष्ट शर्तों को पूरा करता है (यदि यह अध्ययन किए जा रहे नमूने में मौजूद है)।

रोगजनकों के डीएनए या आरएनए की उपस्थिति के लिए जांच की जाने वाली जैविक सामग्री को एक साइक्लर में रखा जाता है। (विशिष्ट स्थिति के आधार पर, रक्त, मूत्र, लार और जननांगों से स्राव को विश्लेषण के लिए लिया जाता है)। फिर नमूनों में विशेष एंजाइम मिलाए जाते हैं। वे रोगजनक रोगाणुओं के आरएनए या डीएनए से जुड़ जाते हैं, और प्रतियों का संश्लेषण शुरू हो जाता है। नकल करना एक बहु-चरणीय प्रक्रिया है जो एक श्रृंखला प्रतिक्रिया की तरह होती है। परिणाम सैकड़ों या हजारों प्रतियां भी हो सकता है।

अगले निदान चरण में, परिणामों का विश्लेषण किया जाता है और संक्रामक एजेंटों के डेटाबेस के साथ तुलना की जाती है।

पीसीआर तकनीक न केवल रोगजनक जीव के प्रकार को निर्धारित करना संभव बनाती है, बल्कि हमें मानव शरीर में संक्रामक एजेंटों की संख्या के बारे में निष्कर्ष निकालने की भी अनुमति देती है।
आज, ऐसी प्रौद्योगिकियों के उपयोग से डीएनए अनुभागों के उत्परिवर्तन और स्प्लिसिंग के अध्ययन में व्यापक संभावनाएं खुलती हैं। आधुनिक चिकित्सा में, इस पद्धति का उपयोग पितृत्व निर्धारित करने, नए जीन की पहचान करने और बहुत कुछ करने के लिए किया जाने लगा है।

इसकी बहुमुखी प्रतिभा के कारण, पीसीआर पद्धति को मूत्रविज्ञान, स्त्री रोग विज्ञान, पल्मोनोलॉजी, ऑन्कोलॉजी, हेमेटोलॉजी, फ़ेथिसियोलॉजी, संक्रामक रोग अभ्यास और चिकित्सा के अन्य क्षेत्रों में व्यापक अनुप्रयोग मिला है।

पीसीआर विश्लेषण के लिए सामग्री

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के लिए, मानव शरीर से लिए गए विभिन्न जैविक मीडिया और तरल पदार्थों का उपयोग किया जाता है: थूक, बलगम, लार, मूत्र, रक्त, उपकला कोशिकाओं के स्क्रैपिंग, प्लेसेंटल ऊतक, फुफ्फुस द्रव, एमनियोटिक द्रव, प्रोस्टेट रस, आदि।

एसटीडी (एसटीआई) का निदान करते समय, पुरुष और महिला जननांग अंगों से स्राव का विश्लेषण किया जाता है। ऐसा करने के लिए, मूत्रमार्ग या गर्भाशय ग्रीवा से स्मीयर या स्क्रैपिंग करें। शोध के लिए भी मूत्र का उपयोग किया जाता है।

संक्रमण (दाद, मोनोन्यूक्लिओसिस, सीएमवी, टॉक्सोप्लाज्मोसिस, एचआईवी, हेपेटाइटिस बी और सी) की पहचान करने के लिए विश्लेषण के लिए रक्त लिया जाता है। यदि तंत्रिका तंत्र को नुकसान होने का संदेह है, तो मस्तिष्कमेरु द्रव एकत्र किया जाता है।

फुफ्फुसीय जांच के लिए, फुफ्फुस द्रव और थूक का उपयोग किया जाता है।

अंतर्गर्भाशयी संक्रमण की पहचान करने के लिए, अपरा ऊतक और एमनियोटिक द्रव का विश्लेषण किया जाता है।

एसटीआई और अन्य संक्रमणों के लिए पीसीआर

पीसीआर विश्लेषण का उपयोग करके किन संक्रमणों का पता लगाया जा सकता है?

एचआईवी संक्रमण (मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस एचआईवी-1 का पता लगाया जा सकता है)।

वायरल हेपेटाइटिस ए, बी, सी, जी (आरएनए-एचएवी, डीएनए-एचबीवी, आरएनए-एचसीवी, आरएनए-एचजीवी)।

एसटीआई (यौन संचारित संक्रमण) - यूरियाप्लाज्मोसिस, गार्डनरेलोसिस, क्लैमाइडिया, माइकोप्लाज्मोसिस, ट्राइकोमोनिएसिस।

संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस (एपस्टीन-बार वायरस डीएनए - ईबीवी)।

साइटोमेगालोवायरस संक्रमण (डीएनए-सीएमवी)।

हर्पेटिक संक्रमण (डीएनए हर्पीस सिम्प्लेक्स वायरस एचएसवी प्रकार 1 और 2)।

क्षय रोग (माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस)।

ऑन्कोजेनिक वायरस - पेपिलोमावायरस संक्रमण (मानव पेपिलोमावायरस (इसके ऑन्कोजेनिक प्रकार 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 और 59 सहित)।

बोरेलिओसिस, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस।

लिस्टेरियोसिस।

कैंडिडिआसिस (जीनस कैंडिडा का कवक)।

हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण
और दूसरे।

पीसीआर विश्लेषण की तैयारी और वितरण

जिन मरीजों के लिए सामग्री दान की गई पीसीआर चला रहे हैंनिदान, त्वरित और सटीक परिणाम प्राप्त करने पर भरोसा करें। इस मामले में, एक महत्वपूर्ण बिंदु को ध्यान में रखा जाना चाहिए - निदान की विश्वसनीयता न केवल विशेषज्ञों की व्यावसायिकता और चिकित्सा प्रयोगशाला की क्षमताओं पर निर्भर करती है। अध्ययन जानकारीपूर्ण हो इसके लिए रोगी को स्वयं प्रयास करना चाहिए। इसलिए, डॉक्टर की सभी सिफारिशों का सख्ती से पालन करना और सामग्री एकत्र करने की तैयारी के नियमों का सावधानीपूर्वक पालन करना आवश्यक है। जैविक नमूनों के संदूषण को रोकना बहुत महत्वपूर्ण है, अन्यथा परीक्षा परिणाम विकृत हो जाएंगे।

पीसीआर विश्लेषण की तैयारी

प्रक्रिया के लिए तैयारी करना विशेष रूप से कठिन नहीं है। बस कुछ नियम याद रखें:

पीसीआर विश्लेषण के लिए रक्त खाली पेट दान किया जाता है। आमतौर पर सुबह में एक नस से रक्त एक विशेष कंटेनर में एक बाँझ सुई के साथ लिया जाता है।

सामग्री एकत्र करने से पहले दिन के दौरान, एसटीआई के लिए पीसीआर स्मीयर लेते समय यौन संयम का संकेत दिया जाता है।

पीसीआर के लिए मूत्र का परीक्षण करने के लिए, पहला भाग लिया जाता है; कंटेनर बाँझ होना चाहिए।

पुरुषों और महिलाओं में पीसीआर टेस्ट कैसे लें

टीकाकरण कक्ष में पुरुषों और महिलाओं से पीसीआर विश्लेषण लिया जाता है, यह नस से रक्त, लार, ग्रसनी से स्वाब, टॉन्सिल, नासॉफिरिन्जियल स्वाब आदि है। संग्रह विधि अलग नहीं है.

एसटीआई के लिए पीसीआर परीक्षण महिलाओं में स्त्री रोग संबंधी जांच के दौरान प्रसवपूर्व क्लिनिक में लिया जाता है; ये योनि, गर्भाशय ग्रीवा और मूत्रमार्ग से स्मीयर होते हैं। पुरुषों के लिए, किसी एंड्रोलॉजिस्ट या वेनेरोलॉजिस्ट के दौरे के दौरान, यह मूत्रमार्ग से एक धब्बा है।

पीसीआर के लिए सामग्री एकत्र करने की योजनाएँ

पीसीआर करने में कितना समय लगता है?

मरीजों को पीसीआर जांच के नतीजों के लिए लंबा इंतजार नहीं करना पड़ता है। संपूर्ण विश्लेषण प्रक्रिया में आमतौर पर कई घंटों (वास्तविक समय पीसीआर) से लेकर 2-10 दिन तक का समय लगता है। एक नियम के रूप में, रोगी को परीक्षण के परिणाम 2-5 दिनों में प्राप्त होते हैं, अधिकतम 10 दिनों तक, यह विश्लेषण के प्रकार पर निर्भर करता है। एचआईवी और हेपेटाइटिस के लिए पीसीआर रक्त निदान में सबसे अधिक समय लगता है, और स्मीयर और स्क्रैपिंग में सबसे अधिक समय लगता है - 2-3 दिन।

एक नकारात्मक परिणाम इंगित करता है कि वर्तमान में जैविक सामग्री में संक्रामक एजेंटों का कोई निशान नहीं पाया गया है। यानी जिस संक्रमण के लिए जांच की गई वह संक्रमण अनुपस्थित है।

एक सकारात्मक परिणाम जैविक नमूनों में रोगज़नक़ के निशान का पता लगाने का संकेत देता है। इसका मतलब है कि मानव शरीर में इस समय कोई संक्रमण है।
ऐसे मामले हो सकते हैं जब पीसीआर सकारात्मक परिणाम देता है, लेकिन कोई सक्रिय संक्रामक प्रक्रिया नहीं देखी जाती है। हम "स्वस्थ गाड़ी" नामक एक घटना के बारे में बात कर रहे हैं। ऐसे रोगियों के लिए उपचार की आवश्यकता नहीं है, लेकिन उनकी निरंतर गतिशील निगरानी होनी चाहिए। ऐसी स्थितियाँ वायरल संक्रमणों के लिए विशिष्ट हैं: एपस्टीन-बार वायरस (ईबीवी), जननांग दाद, साइटोमेगालोवायरस संक्रमण (सीएमवीआई), मानव पैपिलोमावायरस (एचपीवी), जिसमें अनुसंधान के लिए स्थानीय फॉसी (मूत्रमार्ग का स्क्रैपिंग, ग्रीवा नहर) से नमूने लिए जाते हैं। लार)। साथ ही, हमें यह नहीं भूलना चाहिए कि एक स्वस्थ वाहक अन्य लोगों तक संक्रमण फैला सकता है। इसके अलावा, संक्रामक प्रक्रिया की सक्रियता से इंकार नहीं किया जा सकता है। ऐसे मामलों में जहां पीसीआर रक्त परीक्षण में सकारात्मक परिणाम देता है, इसे अब वाहक नहीं माना जा सकता है। ऐसे रोगियों को ज्ञात रोगज़नक़ के कारण होने वाली बीमारी के लिए विशिष्ट उपचार की आवश्यकता होती है।

मात्रात्मक संकेतकों में सामान्य ग्रेडेशन नहीं होते हैं। प्रत्येक विशिष्ट संक्रमण के लिए डॉक्टर द्वारा व्यक्तिगत रूप से उनका मूल्यांकन किया जाता है। मात्रात्मक परिणाम यह निर्धारित करना संभव बनाता है कि संक्रमण कितना सक्रिय है और प्रक्रिया के चरण की पहचान करता है।

पीसीआर विधि की विश्वसनीयता

तकनीक की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए तीन मानदंड हैं:

- शुद्धता– उच्च स्तर की संभावना के साथ संक्रमण का पता लगाना (या उसकी कमी)।

- विशिष्टता- एक विशिष्ट रोगज़नक़ की पहचान करने की सटीकता।

- संवेदनशीलता- जैविक नमूनों में आनुवंशिक सामग्री की थोड़ी मात्रा के साथ भी रोगज़नक़ की पहचान करने की क्षमता।

पीसीआर पद्धति का उपयोग करते समय, गलत सकारात्मक परिणाम प्राप्त करना लगभग असंभव है (अर्थात, यदि रोगज़नक़ अनुपस्थित है, तो सकारात्मक परीक्षणनही होगा)।

गलत नकारात्मक परिणाम संभव है, लेकिन यह काफी दुर्लभ है। यदि अध्ययन के समय संक्रमण निष्क्रिय हो तो ऐसी ही स्थितियाँ उत्पन्न होती हैं। उदाहरण के लिए, गतिविधि के बिना एक पुराना संक्रमण या एक अव्यक्त संक्रमण।

पीसीआर विश्लेषण: वीडियो

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स(पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) का उपयोग पारंपरिक अध्ययनों के संयोजन में रोग के सक्रिय चरण की पहचान करने के लिए किया जाता है, जब प्रतिरक्षाविज्ञानी और सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान विधियों का उपयोग करके कोई प्रतिक्रिया नहीं होती है।

एक निश्चित अवधि के लिए, पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग केवल वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए किया जाता था, और केवल 20 वीं सदी के अंत और 21 वीं की शुरुआत से, यह विश्लेषण एक प्रकार का "स्वर्ण मानक" बन गया, जिससे चिकित्सा के विभिन्न क्षेत्रों में बहुत लाभ हुआ। .

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का सार क्या है?

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स, एंटीबॉडी (एटी) के निशान का पता लगाने में सक्षम लोगों के विपरीत, न केवल मूल कारणों को स्थापित करता है रोग संबंधी स्थिति, बल्कि प्रयोगशाला में एंजाइमों का उपयोग करके किसी विशिष्ट क्षेत्र में डीएनए या आरएनए की उपस्थिति का भी पता लगाता है।

पीसीआर विधि का उपयोग करके विश्लेषण अत्यधिक सटीक है, जिससे गलत प्रतिक्रियाओं की संभावना समाप्त हो जाती है, और परीक्षण के लिए नस से रक्त लेना बिल्कुल आवश्यक नहीं है; ऊतक के नमूने या जैविक तरल पदार्थ की एक छोटी संख्या पर्याप्त है।

किसी संदिग्ध संक्रामक रोगज़नक़ वाले परीक्षण के लिए सामग्री के जैविक वातावरण के उपर्युक्त प्रकार के लिए, डॉक्टर के निर्णय द्वारा एक साथ कई विकल्प निर्दिष्ट किए जा सकते हैं, जिनमें ये शामिल हो सकते हैं:

• धब्बा(जननांगों से स्राव);
• श्लेष्मा खुरचना(मुंह, नाक, जननांग);
• लार, थूक या फुफ्फुस द्रव;
• प्रोस्टेट रस, किसी कीट की उपस्थिति के लिए प्रोस्टेट स्राव की जांच;
• अपरा ऊतकया एमनियोटिक द्रव;
• सामान्य मूत्र विश्लेषणमाइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की पहचान करने के लिए यदि आवश्यक हो तो तलछट (सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद) की जांच करना;
• मस्तिष्कमेरु द्रवकेंद्रीय तंत्रिका तंत्र के संक्रामक घावों की पहचान करना;
• कोशिकाओं या ऊतकों का संग्रह(बायोप्सी) यकृत से, ग्रहणी, पेट, आदि

इन नमूनों को एक विशेष रिएक्टर में रखा जाता है और संश्लेषण के लिए विशिष्ट एंजाइमों को जोड़ने के साथ प्रतिकृति और विकृतीकरण के बार-बार चक्र के माध्यम से अध्ययन के तहत डीएनए टुकड़ों के बार-बार दोहरीकरण (प्रवर्धन) द्वारा विश्लेषण किया जाता है। श्रृंखला प्रतिक्रिया के प्रकार के आधार पर, यह विधि डीएनए या आरएनए के प्रकार और व्यक्तिगत विशेषताओं की पहचान करती है। अंततः, क्लोन आनुवंशिक सामग्री के तुलनात्मक विश्लेषण में पीसीआर की प्रक्रिया जीवित वायरस की एकल कोशिकाओं की भी पहचान करना संभव बनाती है, जिससे यूरियाप्लाज्मा को माइकोप्लाज्मा से आसानी से अलग किया जा सकता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के फायदे और नुकसान

इस पीसीआर डायग्नोस्टिक के फायदे और कई नुकसान दोनों हैं।

निदान के लाभ:

• रोगज़नक़ का निर्धारण आनुवंशिक सामग्री में डीएनए या आरएनए के एक असामान्य खंड की उपस्थिति का प्रत्यक्ष संकेत देता है;
• परीक्षण की जाने वाली सामग्री में न्यूक्लिक एसिड कणों (डीएनए या आरएनए टुकड़े) की उपस्थिति के कारण पीसीआर डायग्नोस्टिक्स 100% सटीक है, जो केवल एक विशिष्ट वायरस या बैक्टीरिया की विशेषता है;
• अन्य निदान विधियों की तुलना में पीसीआर प्रणाली की उच्च संवेदनशीलता। रोगज़नक़ की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए पीसीआर विश्लेषण के लिए जीवित वायरस की एक कोशिका (एक नमूने में 10-100 कोशिकाएं) की आवश्यकता होती है, जिससे स्पष्ट लक्षणों की अनुपस्थिति में रोग के प्रारंभिक चरण में एक रोगजनक सूक्ष्मजीव का पता लगाना संभव हो जाता है, और उन्नत रूपों में;
• उच्च तकनीक स्वचालित पीसीआर प्रवर्धन संग्रह के दिन परीक्षण आयोजित करके विश्लेषण की गति को बढ़ाता है (निदान के लिए 4-6 घंटे से अधिक का आवंटन नहीं)। इससे उत्पादकता बढ़ती है और सांस्कृतिक अनुसंधान विधियों पर श्रेष्ठता मिलती है;
• विश्लेषण की बहुमुखी प्रतिभा विभिन्न तरीकों से एकत्रित डीएनए या आरएनए आनुवंशिक सामग्री का उपयोग करके एक जैविक नमूने से कई रोगजनकों का पता लगाना संभव बनाती है।

नुकसान की बात हो रही है, फिर, पीसीआर प्रणाली की संवेदनशीलता को देखते हुए, अप्रिय क्षणों में से एक है:

• सूक्ष्मजीवों की परिवर्तनशीलता. नुकसान यह है कि सूक्ष्मजीवों में उत्परिवर्तन होता है, जिससे अध्ययन किए जा रहे रोगज़नक़ के जीनोटाइप में बदलाव होता है। और जीनोम के प्रवर्धित क्षेत्र में पीसीआर परीक्षण प्रणाली पहले से ही विकसित रोगज़नक़ के संकर का पता नहीं लगा सकती है, जैसे मानव प्रतिरक्षा प्रणाली इसे नहीं पहचानती है, इसलिए एक संक्रामक रोग की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए कोई प्रतिक्रिया नहीं होगी। लेकिन इसके लिए पीसीआर पद्धति में सुधार के लिए विभिन्न विकास कार्य चल रहे हैं;
• गलत सकारात्मक या गलत नकारात्मक परिणाम प्राप्त करने की संभावना। पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के किसी भी चरण में गलत परिणामों का सामना न करने के लिए, सामग्री एकत्र करने के नियमों का पालन करते हुए, प्रक्रिया को बाधित किए बिना इसे सावधानीपूर्वक किया जाना चाहिए। नमूने अपनी संरचना बदल सकते हैं या पूरी तरह से नष्ट हो सकते हैं, जिससे गलत नकारात्मक या गलत सकारात्मक परिणाम आ सकता है। यह समझा जाना चाहिए कि यह परिणाम तब हो सकता है जब संक्रमण पहले ही समाप्त हो चुका हो, लेकिन मृत कोशिकाओं को अभी तक खुद को नवीनीकृत करने का समय नहीं मिला है और क्लोनिंग के दौरान उन्हें ध्यान में रखा गया था। इसलिए आगे प्रारम्भिक चरणउपचार के बाद, अन्य तरीकों का उपयोग किया जाता है (उदाहरण के लिए), और शरीर से निष्क्रिय संक्रामक एजेंटों को पूरी तरह से हटाने के बाद, पीसीआर विधि का उपयोग करके एक नियंत्रण विश्लेषण किया जाता है। और उपस्थित चिकित्सक सभी पेशेवरों और विपक्षों को ध्यान में रखते हुए, चिकित्सा की उपयुक्तता पर अंतिम निर्णय लेता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स की तैयारी और परीक्षण लेने की शर्तें

यह ध्यान देने योग्य है सरल तैयारीपीसीआर के लिए, इसके लिए उपस्थित चिकित्सक की सभी सिफारिशों का सख्ती से पालन करना और अधिक सटीक परिणाम के लिए कम से कम कई निर्विवाद शर्तों का पालन करना आवश्यक है।

परीक्षा के लिए सामग्री एकत्र करने की विधि के आधार पर यह याद रखना आवश्यक है कि:

• शिरापरक रक्त का उपयोग कर निदान के लिएतरल पदार्थ के सेवन को छोड़कर, रोगी का परीक्षण खाली पेट किया जाना चाहिए;
• स्मीयर परीक्षण के लिएकम से कम कुछ दिनों के लिए संभोग से बचना आवश्यक है, शाम को जननांग स्वच्छता करने की अनुमति है, लेकिन परीक्षण के दिन नहीं। यह ध्यान में रखते हुए अध्ययन करने के लिए इष्टतम समय चुनने लायक है: मासिक धर्म चक्र से दो दिन पहले या बाद में;
• सामग्री संग्रह की किसी भी विधि के लिएआपको अपने डॉक्टर से परामर्श करने के बाद, परीक्षण से कुछ सप्ताह पहले जीवाणुरोधी दवाओं का उपयोग बंद कर देना चाहिए, क्योंकि इससे परिणाम की विश्वसनीयता प्रभावित हो सकती है;
• मूत्र परीक्षण के लिएरोगजनकों की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए, न केवल बाँझपन और स्वच्छता बनाए रखना आवश्यक है, बल्कि अनुसंधान के लिए एकत्रित सामग्री की गुणवत्ता भी सुनिश्चित करना आवश्यक है, जो अधिक सटीक जानकारी प्रदान करता है। इसलिए, मूत्र एकत्र करने से पहले अंतिम पेशाब से 2-3 घंटे इंतजार करना या सुबह के नमूने का उपयोग करना अनुमत है, जो एक सूजन प्रक्रिया की उपस्थिति दिखाने की उच्च संभावना देता है।

पीसीआर का अनुप्रयोग और पता लगाया गया रोग

कई बीमारियों के प्रेरक एजेंटों की खोज करने के लिए, उपर्युक्त सिफारिशों को नजरअंदाज नहीं किया जाना चाहिए, और पीसीआर डायग्नोस्टिक पद्धति का उपयोग करके एक डॉक्टर द्वारा निर्धारित परीक्षा न केवल एक वयस्क, बल्कि गर्भ में एक छोटे, अजन्मे बच्चे को भी बचा सकती है। गंभीर जटिलताएँ.

दरअसल, अधिकतर आबादी की आधी महिला ही कुछ प्रकार के वायरस (एचपीवी) से पीड़ित होती है, जिससे सर्वाइकल कैंसर या बांझपन की संभावना काफी बढ़ जाती है। और, गर्भावस्था और भ्रूण के विकास के दौरान संभावित नकारात्मक प्रभाव को ध्यान में रखते हुए, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि सूक्ष्मजीवों के विभिन्न समूह जो यौन संचारित हैं या प्रतिरक्षाविहीनता में हैं, उन्हें रोगजनकों के एक या दूसरे समूह के रूप में वर्गीकृत करना मुश्किल है, क्योंकि वे बहुत परस्पर संबंधित हैं (उदाहरण के लिए, टॉर्च संक्रमण और एसटीआई)। लेकिन पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया महिला शरीर में विशिष्ट प्रकार के वायरल डीएनए की पहचान करते हुए, एक विदेशी संरचना खोजने में सक्षम है।

विश्लेषण परिणामों को डिकोड करने से आप बीमारियों की उपस्थिति की पुष्टि या खंडन कर सकते हैं। रोगजनकों की एक विस्तृत श्रृंखला को कवर करते हुए, ऐसा विश्लेषण कई संक्रमणों का समय पर पता लगाने के लिए बहुत प्रासंगिक है, जैसे:

• एचआईवी संक्रमण का पता लगाना. संक्रमण से प्रतिरक्षा की गंभीर हानि जो मुख्य रूप से सीडी 4 रिसेप्टर्स पर प्रतिरक्षा प्रणाली की सतह पर मौजूद प्रतिरक्षा सक्षम कोशिकाओं को प्रभावित करती है, जो बाद में खुद को संक्रमण से बचाने की क्षमता खो देती है और रक्त प्लाज्मा में वायरल आरएनए की उपस्थिति पर प्रतिक्रिया करना बंद कर देती है। अज्ञात परीक्षा के दौरान सकारात्मक परिणाम के मामले में, इसे अतिरिक्त अध्ययनों के साथ दोहराया जाता है;
• वायरल हेपेटाइटिस, अक्सर हेपेटाइटिस सी(एक आरएनए रोगज़नक़ युक्त), जिसकी आसान पोर्टेबिलिटी के कारण, अन्य तरीकों का उपयोग करके निदान करना मुश्किल है, क्योंकि रक्त या यकृत बायोप्सी में रोगज़नक़ को पहचानने के लिए पीसीआर विधि अधिक इष्टतम है। यह देर से चरण में प्रकट होता है, जिससे एक घातक सूजन प्रक्रिया बनती है। हालांकि, यह विचार करने योग्य है कि यदि रक्त में एंटीबॉडी (एबी) की उपस्थिति के लिए परीक्षण किया जाता है, तो परिणाम सकारात्मक होता है, और पीसीआर विश्लेषण नकारात्मक परिणाम देता है, यह शरीर में वायरस की उपस्थिति का संकेत दे सकता है। बहुत कम मात्रा, या प्रभावित कोशिकाएं रक्तप्रवाह में बाहर निकले बिना यकृत कोशिकाओं के जीनोम में प्रतीक्षा चरण में हैं। ऐसे मामलों में, अंतिम निदान और उपचार पद्धति के लिए बार-बार अध्ययन की एक श्रृंखला आयोजित की जाएगी;
• एचपीवी जैसे ऑन्कोजेनिक वायरस(मानव पेपिलोमावायरस) 100 से अधिक विभिन्न प्रकार के वायरस, यौन संचारित या चिकित्सा प्रक्रियाओं के दौरान, मां से नवजात शिशु का संक्रमण जन्म नहर से गुजरता है यदि वह पेपिलोमावायरस संक्रमण का वाहक है;
• एसटीआई(यौन रूप से संक्रामित संक्रमण);
• सभी एसटीडी का पता लगाने के लिए उपयुक्त(, गार्डनरेलोसिस,) और टॉर्च संक्रमण;
• बड़ी सटीकता से इंगित करता है मोनोन्यूक्लिओसिस संक्रमण की उपस्थितिलसीका और रेटिकुलोएन्डोथेलियल सिस्टम (बढ़े हुए लिम्फ नोड्स, प्लीहा, यकृत) को नुकसान की विशेषता, परीक्षण सामग्री के रूप में रक्त सीरम लेकर पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग करके पता लगाया जा सकता है। बाहरी मापदंडों के अनुसार, फिलाटोव की बीमारी खुद को चकत्ते, त्वचा की पित्ती, के रूप में प्रकट कर सकती है। सफ़ेद लेपजीभ पर.
• , प्रतिरक्षा प्रणाली को दबाने के लिए दवाओं का उपयोग करके एड्स रोगियों और अंग प्रत्यारोपण कराने वाले लोगों के रक्त में प्रवेश करना;
• हर्पेटिक संक्रमण, एक या दूसरे प्रकार के दाद का प्रतिनिधित्व करना जो जननांगों, आंखों की श्लेष्मा झिल्ली या त्वचा को प्रभावित कर सकता है;
• तपेदिक. यदि रोग के मुख्य लक्षण मौजूद हैं, तो ब्रोंकोस्कोपी के परिणामों के बाद एक पीसीआर परीक्षण निर्धारित किया जाता है, जिससे तपेदिक के सक्रिय चरण का निदान बैक्टीरियोलॉजिकल या बैक्टीरियोस्कोपिक विधि की तुलना में बहुत तेजी से किया जा सकता है;
• वायरल संक्रामक रोग जैसे टिक - जनित इन्सेफेलाइटिस(बोरेलिओसिस)। यह तंत्रिका तंत्र की कोशिकाओं को नुकसान, नशा, मस्तिष्क की सूजन और बाद में पक्षाघात के विकास की विशेषता है। पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाने के लिए, आरएनए वायरस को अलग करने के लिए रक्त और मस्तिष्कमेरु द्रव लिया जाता है।
• हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण का पता लगाना(क्रोनिक गैस्ट्रिटिस, पेप्टिक अल्सर, पेट के ट्यूमर के लिए अग्रणी) पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग आपको बायोप्सी, मल, लार में हेलिकोबैक्टर पाइलोरी के डीएनए (आनुवंशिक सामग्री) का पता लगाने की अनुमति देता है, जो घातकता की डिग्री के अनुसार उपभेदों को अलग करता है।

संक्रमणों का पीसीआर निदान त्वरित गति से विकसित हो रहा है और ऑन्कोलॉजी, स्त्री रोग, मूत्रविज्ञान, गैस्ट्रोएंटरोलॉजी, वायरोलॉजी में सफलतापूर्वक उपयोग किया जाता है, और सूची लगातार बढ़ रही है, लेकिन संक्रामक रोगों के रोगजनकों की खोज तक सीमित नहीं है। पीसीआर पद्धति के अन्य व्यावहारिक अनुप्रयोगों में, पितृत्व स्थापित करने और व्यक्तियों की पहचान करने के लिए अनुसंधान के उपयोग पर भी प्रकाश डाला जा सकता है।

हमारे आधुनिक युग में, चिकित्सा की विभिन्न शाखाओं में आणविक आनुवंशिकी का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। अपनी स्थापना के बाद से, यह सबसे अधिक में से एक बन गया है प्रभावी तरीकेनिदान और मानव शरीर में संक्रमणों की शीघ्र और सटीक पहचान करना संभव बनाया। यदि आपको मॉस्को में डीएनए डायग्नोस्टिक्स कराने की आवश्यकता है, तो हम आपको यूरोमेडप्रेस्टीज क्लिनिक की सेवाओं का उपयोग करने के लिए आमंत्रित करते हैं। हमारे केंद्र के विशेषज्ञों के पास आनुवंशिक विश्लेषण के क्षेत्र में व्यापक अनुभव है और वे कम से कम समय में डीएनए सामग्री के अत्यधिक सटीक परीक्षण की गारंटी देते हैं!

मॉस्को में डीएनए डायग्नोस्टिक्स क्यों किया जाता है?

डीएनए डायग्नोस्टिक्स संक्रामक रोगों की पहचान करने के लिए सूक्ष्म जीव विज्ञान में उपयोग किए जाने वाले अध्ययनों की एक विस्तृत श्रृंखला को संदर्भित करता है। हाल के वर्षों में, वायरस और बैक्टीरिया तेजी से विकसित और विकसित हो रहे हैं, उनकी संख्या अधिक है, और उन्हें पहचानना अधिक कठिन होता जा रहा है। आनुवंशिक तरीकों के उपयोग से परीक्षण नमूने में एक भी सूक्ष्मजीवों को ढूंढना और एक जैविक नमूने में एक साथ कई रोगजनकों की पहचान करना संभव हो जाता है।

मॉस्को में हमारे क्लिनिक में डीएनए डायग्नोस्टिक्स के लिए इस्तेमाल की जाने वाली सबसे आम तकनीक पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) है। जब इसे किया जाता है, तो डीएनए न्यूक्लिक एसिड के अलग-अलग वर्गों की एकाधिक चयनात्मक प्रतिलिपि होती है, जो एंजाइमों (जटिल प्रोटीन अणुओं) की मदद से की जाती है। प्रतिक्रिया एक विशेष उपकरण में की जाती है - एक थर्मल साइक्लर, जो समय-समय पर एक नमूने के साथ परीक्षण ट्यूबों को गर्म और ठंडा करता है, और फिर ग्राफ़ के रूप में डिस्प्ले पर वास्तविक समय में जानकारी प्रदर्शित करता है।

चल रहे शोध की संभावनाएं काफी बड़ी हैं। इसकी मदद से यह पता लगाना संभव है एक बड़ी संख्या कीरोग, जिनमें लगभग सभी यौन संचारित संक्रमण शामिल हैं:

• यूरियाप्लाज्मा;
• क्लैमाइडिया;
• कैंडिडा कवक;
• गार्डनेरेला;
• ट्राइकोमोनास;
• गोनोकोकी और अन्य।

अक्सर ऐसी स्थितियाँ होती हैं जब डॉक्टर को चिकित्सा की प्रभावशीलता या किसी बीमारी के इलाज की डिग्री स्थापित करने की आवश्यकता होती है - और इस मामले में, मॉस्को में डीएनए डायग्नोस्टिक्स बस अपूरणीय हो जाता है। इसे छिपे हुए संक्रमणों की उपस्थिति में विशेष रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है जिनका माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाना मुश्किल होता है।

पीसीआर विधि निष्पादित करने में सरल है और इसके कई फायदे हैं:

• उच्च विशिष्टता - परीक्षण के दौरान, नमूने में एक डीएनए टुकड़ा अलग किया जाता है, जो केवल एक विशिष्ट रोगज़नक़ की विशेषता है।
• अतिसंवेदनशीलता - यदि परीक्षण सामग्री में वायरस या बैक्टीरिया की केवल एक कोशिका हो तो भी संक्रमण का पता लगाया जा सकता है।
• बहुमुखी प्रतिभा - निदान करने के लिए किसी भी जैविक सामग्री का उपयोग किया जा सकता है, क्योंकि संक्रमण अक्सर सभी ऊतकों में पाया जाता है।
• प्रत्यक्ष पता लगाना - कई अन्य तरीकों के विपरीत, पीसीआर अप्रत्यक्ष संकेतों से नहीं, बल्कि एकत्रित सामग्री में इसकी प्रत्यक्ष उपस्थिति से रोगज़नक़ की पहचान करने में मदद करता है।
• मॉस्को में प्रीक्लिनिकल डीएनए परीक्षण की संभावना - रोगज़नक़ों का पता लक्षण प्रकट होने से पहले भी लगाया जा सकता है, जिसमें ऊष्मायन अवधि भी शामिल है।

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परीक्षा की तैयारी कैसे करें

रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए, विभिन्न सामग्रियों का उपयोग करने की अनुमति है - रक्त, थूक, मूत्र, योनि, गर्भाशय ग्रीवा या मूत्रमार्ग से उपकला का खुरचना। सामग्री एकत्र करते समय विश्लेषण की सटीकता काफी हद तक बाँझपन पर निर्भर करती है। चूंकि पीसीआर ने संवेदनशीलता बढ़ा दी है, इसलिए नमूने का कोई भी संदूषण प्राप्त परिणाम को विकृत कर सकता है।

निदान की विश्वसनीयता में एक महत्वपूर्ण भूमिका अध्ययन के लिए रोगी की प्रारंभिक तैयारी निभाती है। यह किसी भी कठिनाई का कारण नहीं बनता है और निम्नलिखित अनुशंसाएँ प्रदान करता है:

• परीक्षण से 1 महीने पहले एंटीबायोटिक्स लेना बंद करना आवश्यक है।
• मॉस्को में हमारे केंद्र में डीएनए डायग्नोस्टिक्स के लिए रक्त सुबह खाली पेट दान किया जाता है।
• मूत्र दान करते समय, जननांगों की सावधानीपूर्वक स्वच्छता के बाद इसके पहले सुबह के हिस्से को एक बाँझ कंटेनर में इकट्ठा करें।
• यौन संचारित संक्रमणों की जांच करते समय, अंतरंग जीवन को 72 घंटे और पेशाब को नमूना लेने से 3-4 घंटे पहले बाहर रखा जाता है। पिछले दिन से आपको जननांग स्वच्छता नहीं करनी चाहिए।

हमारे केंद्र में मॉस्को में डीएनए डायग्नोस्टिक्स की सटीकता

हमारे केंद्र की दीवारों के भीतर सभी परीक्षण विशेष रूप से प्रमाणित विशेषज्ञों द्वारा किए जाते हैं। प्रयोगशाला डीएनए परीक्षण में नवीनतम प्रगति से सुसज्जित है, जो मानवीय त्रुटि की संभावना को कम करती है। मॉस्को में डीएनए डायग्नोस्टिक्स के लिए यूरोमेडप्रेस्टीज विशेषज्ञों द्वारा उपयोग किए जाने वाले उच्च तकनीक उपकरण 97% तक की सटीकता के साथ परिणाम प्राप्त करने की अनुमति देते हैं।

उन्नत वैज्ञानिक और तकनीकी विकास के लिए धन्यवाद, गुणवत्ता और मूल्य अनुपात के मामले में इस पद्धति का कोई एनालॉग नहीं है। कम लागत पर, रोगी को अपने निदान का तुरंत पता लगाने और जटिलताओं का कारण बनने से पहले ही पहचानी गई बीमारी का इलाज शुरू करने का अवसर मिलता है।

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पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) आणविक जीव विज्ञान की एक उपलब्धि है, जो 20वीं सदी के अंत और 21वीं सदी की शुरुआत में नैदानिक ​​​​प्रयोगशाला निदान के मुख्य तरीकों में से एक है, जिसने चिकित्सा विज्ञान के विभिन्न क्षेत्रों में भारी लाभ पहुंचाया है।

इस प्रकार, भले ही मानव शरीर की लाखों कोशिकाओं के बीच जीवित वायरस न हो, बल्कि उसके डीएनए का केवल एक कण खो गया हो, तो पीसीआर, अगर इसमें कुछ भी हस्तक्षेप नहीं करता है, तो संभवतः कार्य का सामना करेगा और उपस्थिति की रिपोर्ट करेगा सकारात्मक परिणाम के साथ एक "अजनबी" का। यह पीसीआर का सार और इसका मुख्य लाभ है।

फायदे और नुकसान

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स करने वाली प्रयोगशाला उपकरण, परीक्षण प्रणाली और चिकित्सा कर्मियों की योग्यता के मामले में उच्चतम आवश्यकताओं के अधीन है। यह एक उच्च तकनीक प्रयोगशाला है जिसमें अत्यधिक संवेदनशील और अत्यधिक विशिष्ट अभिकर्मकों का एक शस्त्रागार है, इसलिए इसमें कोई विशेष नुकसान नहीं है। जब तक यह नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों की अनुपस्थिति में सकारात्मक परिणाम नहीं देता है और इस तरह चिकित्सक को दुविधा में डालता है: क्या उपचार शुरू करना उचित है या नहीं?

रोगी को देखने वाले डॉक्टर को परीक्षण के परिणामों की विश्वसनीयता पर संदेह होने लगता है, क्योंकि उसे बीमारी के कोई लक्षण नहीं दिखते हैं। लेकिन फिर भी, पीसीआर प्रणाली की उच्च संवेदनशीलता को देखते हुए, यह याद रखना चाहिए कि यह प्रीक्लिनिकल चरण में भी रोगज़नक़ का पता लगाता है, और इस मामले में सकारात्मक परिणाम नुकसान से अधिक लाभ है। इसके आधार पर, उपस्थित चिकित्सक को "पक्ष" और "विरुद्ध" अन्य तर्कों को ध्यान में रखते हुए, चिकित्सा की उपयुक्तता पर स्वयं निर्णय लेना चाहिए।

पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया का उपयोग करके निदान के लाभ स्पष्ट हैं:

• उच्च विशिष्टता, किसी विशेष जीव में निहित, लेकिन मनुष्यों के लिए विदेशी न्यूक्लिक एसिड कणों के चयनित नमूने में उपस्थिति के कारण, 100% तक पहुंचना;
• उच्च प्रदर्शन, क्योंकि पीसीआर एक उच्च तकनीक वाली स्वचालित तकनीक है जो नमूना लेने के दिन परीक्षण करने का अवसर प्रदान करती है और इस प्रकार रोगी को अनावश्यक चिंताओं से छुटकारा दिलाती है;
• पीसीआर, एक नमूने पर काम करते हुए, कई अध्ययन करने में सक्षम है एकाधिक रोगज़नक़ों का पता लगाएं, यदि उसके पास ऐसा कोई कार्य है। उदाहरण के लिए, क्लैमाइडियल संक्रमण का निदान करते समय, जहां पीसीआर मुख्य तरीकों में से एक है, क्लैमाइडिया के साथ-साथ, प्रेरक एजेंट निसेरिया (गोनोकोकस) का भी पता लगाया जा सकता है। इसके अलावा, यह परिणामों की विश्वसनीयता पर नकारात्मक प्रभाव नहीं डालता है;
• पीसीआर परीक्षण ऊष्मायन अवधि के दौरान खतरनाक सूक्ष्मजीवों का पता चलता है, जब उनके पास अभी तक शरीर को महत्वपूर्ण नुकसान पहुँचाने का समय नहीं हुआ है, अर्थात, शीघ्र निदानरोग प्रक्रिया के आगामी विकास की चेतावनी देता है, जिससे इसकी तैयारी करना और इसे पूरी तरह से तैयार करना संभव हो जाता है।

इसके अलावा, निदान के दौरान कभी-कभी उत्पन्न होने वाली गलतफहमियों से बचने के लिए, पीसीआर इस तथ्य से भी अपनी रक्षा करता है कि यदि आवश्यक हो तो विशेषज्ञ उद्देश्यों के लिए उपयोग करने के उद्देश्य से इसके परिणामों को रिकॉर्ड किया जा सकता है (फोटो, कंप्यूटर)।

पीसीआर प्रतिक्रियाओं का मानक एक नकारात्मक परिणाम है।, विदेशी न्यूक्लिक एसिड के टुकड़ों की अनुपस्थिति का संकेत, एक सकारात्मक उत्तर शरीर में संक्रमण की उपस्थिति का संकेत देगा, डिजिटल मान परीक्षण के समय वायरस की स्थिति और इसकी एकाग्रता को इंगित करते हैं। हालाँकि, विश्लेषण की पूरी व्याख्या एक डॉक्टर द्वारा की जाती है जिसने "पीसीआर" विषय पर विशेष प्रशिक्षण प्राप्त किया है। परिणामों की स्वयं व्याख्या करने का प्रयास करने का कोई मतलब नहीं है, क्योंकि आप, जैसा कि संभवतः होता है, गलत समझ सकते हैं और पहले से ही चिंता करना शुरू कर सकते हैं।

पीसीआर किससे डरती है, यह क्या कर सकती है और इसके लिए तैयारी कैसे करें?

किसी भी अन्य शोध की तरह, कभी-कभी परीक्षण के परिणाम ग़लत सकारात्मक या ग़लत नकारात्मक होते हैं, जहां पीसीआर कोई अपवाद नहीं है। ऐसा निम्नलिखित मामलों में हो सकता है:

1. प्रतिक्रिया के चरणों में से एक पर तकनीकी प्रक्रिया का उल्लंघन;
2. सामग्री एकत्र करने, भंडारण या परिवहन करने के नियमों का पालन करने में विफलता;
3. सामग्री में विदेशी अशुद्धियों की उपस्थिति.

इससे पता चलता है कि संक्रमण के पीसीआर डायग्नोस्टिक्स को सावधानीपूर्वक, सावधानीपूर्वक और सटीक रूप से किया जाना चाहिए, अन्यथा सामग्री के नमूने उनकी संरचनात्मक संरचना को बदल सकते हैं या पूरी तरह से ढह सकते हैं।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के चरण। अध्ययन के किसी भी चरण में उल्लंघन के कारण गलत परिणाम हो सकते हैं।

संक्रमणों का पीसीआर निदान अन्य प्रयोगशाला विधियों के बीच "स्वर्ण मानकों" की श्रेणी में आता है, इसलिए इसका उपयोग कई बीमारियों के रोगजनकों की खोज के लिए किया जा सकता है, जिनमें पहली नज़र में, एक दूसरे के साथ कुछ भी सामान्य नहीं है:

• विभिन्न स्थानीयकरणों का क्षय रोग, निमोनिया (असामान्य सहित, क्लैमाइडिया के कारण);
• बचपन में संक्रमण (खसरा रूबेला, कण्ठमाला, खसरा);
• डिप्थीरिया;
• साल्मोनेलोसिस;
• ज़ूनोटिक संक्रामक रोग - लिस्टेरियोसिस (यह रोग लिम्फ नोड्स, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र और आंतरिक अंगों को नुकसान के साथ विभिन्न प्रकार के लक्षणों की विशेषता है);
• एपस्टीन-बार वायरस (संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, आदि) के कारण होने वाले रोग;
• मानव पैपिलोमावायरस संक्रमण (एचपीवी और इसके प्रकार) के कारण होने वाली ऑन्कोलॉजिकल विकृति;
• बोरेलिओसिस (लाइम रोग, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस);
• हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण, जिसका प्रेरक एजेंट मानव पेट में रहने वाला सूक्ष्म जीव हेलिकोबैक्टर पाइलोरी है। यह सिद्ध हो चुका है कि हेलिकोबैक्टर पेट या ग्रहणी संबंधी कैंसर के विकास का कारण बनता है;
• और लगभग सब कुछ.

यौन संचारित संक्रमणों का पीसीआर निदान विशेष महत्व रखता है, क्योंकि इस तरह से होने वाली बीमारियाँ अक्सर बिना किसी नैदानिक ​​​​अभिव्यक्ति के लंबे समय तक चलती रहती हैं, लेकिन गर्भावस्था के दौरान वे अधिक सक्रिय होने लगती हैं और इस प्रकार, स्वास्थ्य और यहां तक ​​कि जीवन को भी खतरा होता है। बच्चा। वे वैसा ही व्यवहार करते हैं. उनमें से कुछ ("मशाल") एसटीआई का भी उल्लेख करते हैं, इसलिए बाद वाले पर अधिक विस्तृत विचार की आवश्यकता है। पाठक लेख के निम्नलिखित अनुभागों में सबसे लोकप्रिय तरीकों से परिचित हो सकेंगे।

विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए ठीक से तैयारी कैसे करें?

आइए तुरंत ध्यान दें कि पीसीआर की तैयारी काफी सरल है और इसके लिए रोगी की ओर से किसी विशेष प्रयास की आवश्यकता नहीं होती है। आपको बस तीन सरल कार्य पूरे करने होंगे:

1. परीक्षण लेने से 24 घंटे पहले संभोग न करें;
2. नस से रक्त लेने और परीक्षण करने के लिए, आपको खाली पेट आना होगा; वैसे, आप पी भी नहीं सकते;
3. मूत्र रात में दान किया जाना चाहिए (सुबह में - फार्मेसी में एक दिन पहले खरीदे गए बाँझ जार में)।

पीसीआर किसी भी जैविक वातावरण में काम कर सकता है

पीसीआर विधि "खून की प्यासी" नहीं है और इसलिए संदिग्ध संक्रामक एजेंट वाले किसी भी जैविक माध्यम को स्वीकार करती है। आमतौर पर शोध के लिए क्या लेना है इसका विकल्प डॉक्टर पर निर्भर रहता है।

इस प्रकार, एक रोगज़नक़ की खोज में, रक्त परीक्षण के अलावा (हालांकि यह भी उपयुक्त है और ज्यादातर मामलों में अन्य सामग्री के साथ समानांतर में लिया जाता है), आप इसका उपयोग कर सकते हैं:

• (मूत्रजनन पथ से निर्वहन);
• मौखिक गुहा, कंजाक्तिवा, नासोफरीनक्स, जननांग पथ (महिलाओं के लिए, गर्भाशय ग्रीवा और योनि से लिया गया, पुरुषों के लिए - मूत्रमार्ग से) के श्लेष्म झिल्ली को खुरचना;
• लार;
• शुक्राणु;
• प्रोस्टेट रस;
• अपरा ऊतक और एमनियोटिक द्रव (एमनियोटिक द्रव);
• मूत्र तलछट (सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद), उदाहरण के लिए, कुछ एसटीआई और माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस का पता लगाने के लिए;
• एक ही उद्देश्य के लिए थूक और फुफ्फुस द्रव;
• रिसाव;
• यदि केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के संक्रमण का संदेह हो तो मस्तिष्कमेरु द्रव;
• बायोप्सी सामग्री (बायोप्टाट) यकृत, ग्रहणी, पेट आदि से ली जाती है।

उपरोक्त में, मैं यह जोड़ना चाहूंगा कि सभी मामलों में, परीक्षण के लिए पर्याप्त सामग्री होगी, यहां तक ​​कि स्क्रैपिंग और स्राव में भी, क्योंकि पीसीआर द्वारा परीक्षण के लिए बड़ी मात्रा की आवश्यकता नहीं होती है; विश्लेषण के लिए कुछ माइक्रोलीटर पर्याप्त होते हैं, जो आमतौर पर लिए जाते हैं एक एपेंडॉर्फ माइक्रोट्यूब में और परीक्षण के लिए भेजा गया। अध्ययन।

पीसीआर के रोग और उपयोग

एचआईवी और पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया

आमतौर पर, जब एक अज्ञात परीक्षा से गुज़रते हैं, तो सकारात्मक इम्युनोब्लॉटिंग परिणाम के मामले में, निदान फिर से दोहराया जाता है। यदि निदान की पुष्टि हो जाती है, तो रोगी को अतिरिक्त परीक्षण निर्धारित किए जाते हैं:

1. प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं का उपयोग करते हुए, सीडी 4 लिम्फोसाइटों (प्रतिरक्षा सक्षम कोशिकाएं - टी-हेल्पर्स या हेल्पर्स) की संख्या के पूर्ण मूल्यों का निर्धारण, जिसे संक्रमण पहले प्रभावित करता है, जिसके बाद वे अपने मूल गुणों को खो देते हैं और "स्वयं" के बीच अंतर नहीं कर पाते हैं। और "विदेशी।" वे रक्त प्लाज्मा में प्रसारित वायरल आरएनए को सामान्य शरीर कोशिकाएं समझने की गलती करते हैं और उन पर प्रतिक्रिया नहीं करते हैं;
2. पीसीआर द्वारा वायरल आरएनए का पता लगाना और इन आंकड़ों के आधार पर चरण, रोग प्रक्रिया की गंभीरता और पूर्वानुमान स्थापित करने के लिए वायरल कणों की एकाग्रता की गणना करना. बेशक, इस संबंध में "मानदंड" शब्द मौजूद नहीं है, क्योंकि प्रतिक्रिया हमेशा सकारात्मक होती है, और डिजिटल मूल्यों को समझना डॉक्टर की क्षमता के भीतर है।

पीसीआर और हेपेटाइटिस

पीसीआर विधि रोगजनकों का पता लगा सकती है; अक्सर परीक्षण का उपयोग हेपेटाइटिस सी के निदान के लिए किया जाता है, जिसका अन्य तरीकों से पता लगाना मुश्किल होता है।

हेपेटाइटिस सी वायरस (आरएनए युक्त) मानव शरीर में अपने व्यवहार में एचआईवी जैसा दिखता है। यकृत कोशिकाओं (हेपैटोसाइट्स) के जीनोम में प्रवेश करके, यह वहां पंखों में प्रतीक्षा करता रहता है, जो कम से कम 2 वर्षों में, यहां तक ​​कि 20 वर्षों में भी आ सकता है, यही कारण है कि डॉक्टरों ने इसे "सौम्य हत्यारा" उपनाम दिया है। हेपेटाइटिस सी से लीवर पैरेन्काइमा में एक घातक प्रक्रिया का निर्माण होता है, जो बाद के चरणों में प्रकट होता है। प्रतिरक्षा प्रणाली इन सभी घटनाओं पर ध्यान नहीं देती है, गलती से वायरस को हेपेटोसाइट समझ लेती है। सच है, वायरस के प्रति एंटीबॉडी कुछ मात्रा में उत्पन्न होती हैं, लेकिन वे एक अच्छी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्रदान नहीं करती हैं। हेपेटाइटिस सी के निदान के लिए, एलिसा बहुत जानकारीपूर्ण नहीं है, क्योंकि यह इंगित करता है कि वायरस ने निशान छोड़े हैं, लेकिन क्या यह अपने आप दूर हो गया है यह अज्ञात है। एचसीवी के साथ, स्व-उपचार के मामले ज्ञात हैं, जबकि वायरस के खिलाफ एंटीबॉडी बने रहते हैं और जीवन भर प्रसारित होते रहते हैं (इम्यूनोलॉजिकल मेमोरी)। पीसीआर एंटीबॉडी के निर्माण में काफी आगे है और 1-1.5 सप्ताह के भीतर एक वायरल कण का पता लगा सकता है, जबकि एंटीबॉडी 2 महीने से छह महीने के अंतराल में दिखाई दे सकती है।

मानव शरीर में संदिग्ध बड़े पैमाने पर हेपेटाइटिस सी वायरस के मामले में पीसीआर डायग्नोस्टिक्स सबसे इष्टतम शोध पद्धति है, क्योंकि केवल यह रोगी के रक्त या यकृत बायोप्सी में "कोमल दुश्मन" की उपस्थिति को पहचान सकता है।

हालाँकि, कभी-कभी ऐसे मामले भी होते हैं जब एंटीबॉडीज़ सकारात्मक होती हैं, लेकिन पीसीआर परिणाम नकारात्मक होता है। ऐसा कभी-कभी तब होता है जब वायरस की मात्रा बहुत कम होती है या जब यह रक्तप्रवाह में प्रवेश किए बिना यकृत में "निष्क्रिय" अवस्था में होता है। सत्य का पता लगाने के लिए, रोगी को दूसरा परीक्षण दिया जाता है, या एक से अधिक भी।

मानव पैपिलोमावायरस संक्रमण

यदि स्व-उपचार नहीं होता है, तो यह किसी भी तरह से खुद को दिखाए बिना, मालिक के शरीर में लंबे समय तक बना रह सकता है, जिसे इसका संदेह भी नहीं होता है, क्योंकि पीसीआर नहीं किया गया था, और कोई लक्षण नहीं थे मर्ज जो। हालाँकि, पेपिलोमावायरस संक्रमण की उपस्थिति, यद्यपि अव्यक्त, मानव स्वास्थ्य के प्रति उदासीन है, जहां कुछ प्रकार के वायरस जो कैंसर का कारण बनते हैं (प्रकार 16, 18) एक विशेष खतरा पैदा करते हैं।

अधिक बार, आबादी की आधी महिला एचपीवी से पीड़ित होती है, क्योंकि वायरस महिला जननांग क्षेत्र और विशेष रूप से गर्भाशय ग्रीवा को पसंद करता है, जहां कुछ प्रकार के वायरस डिसप्लास्टिक प्रक्रियाओं के विकास में योगदान करते हैं, और फिर गर्भाशय ग्रीवा कैंसर, अगर डिसप्लेसिया का इलाज नहीं किया जाता है। और वायरस को खुली छूट दे दी गई है। तो, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन वायरल डीएनए का पता लगाएगा, और फिर संकेत देगा कि महिला के शरीर में "खराब" या "अच्छा" (ऑन्कोजेनिक या गैर-ऑन्कोजेनिक) प्रकार बस गया है।

अन्य एसटीआई और टॉर्च संक्रमण

जाहिर है, पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया न्यूक्लिक एसिड से युक्त किसी भी विदेशी संरचना का पता लगा सकती है, इसलिए यह परीक्षण सभी एसटीडी और टीओआरसीएच संक्रमणों की पहचान करने के लिए उपयुक्त है, हालांकि, इसका उपयोग हमेशा नहीं किया जाता है। गोनोकोकस का पता लगाने के लिए इतने महंगे अध्ययन क्यों करें, यदि अधिक सुलभ और सस्ते हैं?

टॉर्च संक्रमण और एसटीआई इतने परस्पर जुड़े हुए हैं कि कभी-कभी यह निर्धारित करना मुश्किल होता है कि किसी विशेष रोगज़नक़ को किस समूह में वर्गीकृत किया जाना चाहिए। सामान्य तौर पर, उन्हें समझना मुश्किल हो सकता है, क्योंकि ये सूक्ष्मजीवों के काफी विविध समूह हैं जो हमेशा या केवल कुछ शर्तों (इम्युनोडेफिशिएंसी) के तहत यौन संचारित हो सकते हैं, और संभावित नकारात्मक प्रभाव के कारण केवल गर्भावस्था के दौरान ही रुचिकर हो सकते हैं। इसका कोर्स और भ्रूण पर।

छिपे हुए संक्रमणों का पता लगाने के लिए पीसीआर मुख्य तरीका है

नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों का विकास विभिन्न रोगजनकों पर आधारित होता है, जिसका पता केवल पीसीआर द्वारा लगाया जा सकता है, जो इसका मुख्य कार्य है, कभी-कभी एलिसा के साथ, और कभी-कभी एकमात्र पुष्टिकारक परीक्षण के रूप में, विशेषकर यदि रोग के कोई लक्षण न हों।ऐसी कठिन स्थिति एक पॉलीमाइक्रोबियल संक्रमण द्वारा बनाई जा सकती है, जिसमें स्पष्ट रोगजनकों के अलावा, अवसरवादी रोगजनक भी शामिल होते हैं।

यूरियाप्लाज्मा को अक्सर माइकोप्लाज्मा के साथ संयोजन में माना जाता है।और यह अकारण नहीं है. क्लैमाइडिया जैसी ये प्रजातियां न तो वायरस हैं और न ही बैक्टीरिया; वे कोशिकाओं के अंदर रहते हैं और उन्हें एसटीआई के रूप में वर्गीकृत किया जाता है, हालांकि स्वस्थ शरीर में उनकी उपस्थिति भी असामान्य नहीं है। इसलिए, एक स्वस्थ वाहक को एक बीमार व्यक्ति से अलग करने के लिए, विशेष तरीकों की आवश्यकता होती है, जहां पीसीआर को सबसे विश्वसनीय माना जाता है, क्योंकि, इन सूक्ष्मजीवों की संरचनात्मक विशेषताओं और व्यवहार के कारण, अन्य अध्ययन अप्रभावी हैं।

जहाँ तक (प्रकार 1, 2) और, जो हर्पीस वायरस (प्रकार 5) से भी संबंधित है, यहाँ स्थिति भी अस्पष्ट है। दुनिया की आबादी की संक्रमण दर 100% के करीब पहुंच रही है, इसलिए इस मामले में वायरस की पहचान और इसकी खुराक बहुत महत्वपूर्ण है, जो विशेष रूप से गर्भावस्था के दौरान एक भूमिका निभाती है, क्योंकि एक वयस्क के लिए, एक वायरस जो उसके शरीर में जड़ें जमा चुका है अक्सर कोई परेशानी नहीं होती और बीमारी के लक्षण नहीं दिखते।

इसलिए, किसी को डॉक्टर द्वारा निर्धारित ऐसी परीक्षा को नजरअंदाज नहीं करना चाहिए, क्योंकि कुछ मामलों में, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन प्रयोगशाला निदान का एक अनिवार्य और आवश्यक तरीका है जो न केवल एक महिला, बल्कि एक छोटे, अजन्मे व्यक्ति को भी गंभीर जटिलताओं से बचा सकता है।

अंत में, मैं यह नोट करना चाहूंगा कि पीसीआर जैसी अद्भुत पद्धति 30 से अधिक वर्षों से मानवता की सेवा कर रही है। साथ ही, परीक्षण के उद्देश्य संक्रामक रोगों के रोगजनकों की खोज तक सीमित नहीं हैं। आणविक जीव विज्ञान के आधार पर पैदा हुई पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया, आनुवंशिकी के साथ अटूट रूप से जुड़ी हुई है व्यक्तिगत पहचान के लिए फोरेंसिक में सफलतापूर्वक उपयोग किया गया, फोरेंसिक चिकित्सा में पितृत्व स्थापित करने के लिए, पशु चिकित्सा में, यदि पशु क्लिनिक के पास महंगे उपकरण खरीदने का अवसर है, साथ ही अन्य क्षेत्रों (उद्योग, कृषि, आदि) में भी।

वीडियो: पीसीआर - सार और अनुप्रयोग